黄酮类化合物精选文档.ppt

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1、黄酮类化合物本讲稿第一页，共九十六页本章内容本章内容第一节第一节结构与分类结构与分类第二节第二节理化性质理化性质第三节第三节提取与分离提取与分离第四节第四节鉴鉴定定本讲稿第二页，共九十六页 1、名名称称由由来来：此此类类化化合合物物多多为为黄黄色色，且且具有具有酮式羰基酮式羰基，故称黄酮类化合物。，故称黄酮类化合物。2、存在形式：、存在形式：黄酮类化合物广泛存在于黄酮类化合物广泛存在于植物中，不少的常用中药中主要含有此类成植物中，不少的常用中药中主要含有此类成分。大多与糖结合成苷，称为分。大多与糖结合成苷，称为黄酮苷类黄酮苷类；有；有的以游离形式存在，即未与糖结合，称为的以游离形式存在，即未与

2、糖结合，称为游游离黄酮或黄酮苷元离黄酮或黄酮苷元，同一植物中可能同时存，同一植物中可能同时存在游离黄酮及其苷。在游离黄酮及其苷。本讲稿第三页，共九十六页主要的生理活性主要的生理活性1.1.对心血管的作用，如葛根总黄酮及葛根素对心血管的作用，如葛根总黄酮及葛根素(puerarin)(puerarin)、银杏叶总黄酮等具有扩张冠状血管作用、银杏叶总黄酮等具有扩张冠状血管作用 。芦丁（。芦丁（rutinrutin）、橙皮苷（）、橙皮苷（hesperidinhesperidin）、）、d-d-儿茶素儿茶素（d-catechind-catechin）等具有降低毛细血管脆性和异常通透）等具有降低毛细血管脆

3、性和异常通透性作用，可用作毛细血管性出血的止血药及治疗高血性作用，可用作毛细血管性出血的止血药及治疗高血压、动脉硬化的辅助药压、动脉硬化的辅助药 。2.2.抗菌、抗病毒作用，如黄芩苷，木犀草素苷等。抗菌、抗病毒作用，如黄芩苷，木犀草素苷等。3.3.止咳祛痰作用，如杜鹃素、甘草素和甘草苷等。止咳祛痰作用，如杜鹃素、甘草素和甘草苷等。本讲稿第四页，共九十六页一、基本结构与分类一、基本结构与分类（一）黄酮类化合物的基本结构（一）黄酮类化合物的基本结构色原酮色原酮2-2-苯基色原酮苯基色原酮本讲稿第五页，共九十六页黄酮类化合物是泛指黄酮类化合物是泛指两个苯环两个苯环（A-与与B-环）通过环）通过三碳链

4、三碳链相互连接而成的一相互连接而成的一系列化合物。系列化合物。定义定义:6C-3C-6C本讲稿第六页，共九十六页（二）黄酮类化合物的分类（二）黄酮类化合物的分类中央三碳链的氧化程中央三碳链的氧化程度度B-环连接位置（环连接位置（2-或或3-位）位）三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状分为以下几种类型：分为以下几种类型：根据其根据其：本讲稿第七页，共九十六页 1黄酮类（黄酮类（flavones）以以2-苯基色原酮为基本母核，苯基色原酮为基本母核，C3无含无含氧取代基氧取代基。黄芩苷黄芩苷 本讲稿第八页，共九十六页2 2黄酮醇类（黄酮醇类（flavonolflavonol）槲皮素槲皮素R=H 芦丁

5、芦丁 R=芸香糖基芸香糖基 以以2-2-苯基色原酮为基本母核，苯基色原酮为基本母核，C C3有含有含氧取代基。氧取代基。本讲稿第九页，共九十六页3 3二氢黄酮类（二氢黄酮类（flavanonesflavanones）二氢黄酮二氢黄酮 橙皮苷橙皮苷 C2、C3上的双键已被饱和上的双键已被饱和本讲稿第十页，共九十六页4 4二氢黄酮醇类（二氢黄酮醇类（flavanonolsflavanonols）二氢槲皮素二氢槲皮素二氢黄酮醇二氢黄酮醇本讲稿第十一页，共九十六页5 5异黄酮类（异黄酮类（isoflavonesisoflavones）其其B环连接在环连接在C3位上。位上。大豆素大豆素R=H 大豆苷大豆

6、苷R=glc 本讲稿第十二页，共九十六页l具有雌性激素样作用，可能与它们与己具有雌性激素样作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。烯雌酚结构类似。本讲稿第十三页，共九十六页6 6查耳酮类（查耳酮类（chalconeschalcones）两苯环之间的两苯环之间的三碳链为开链结构三碳链为开链结构 查耳酮查耳酮 红花苷红花苷本讲稿第十四页，共九十六页 中药红花中的红花苷为查耳酮类。红花在开花中药红花中的红花苷为查耳酮类。红花在开花初期时，花中主要成分为无色的新红花苷（二氢黄初期时，花中主要成分为无色的新红花苷（二氢黄酮类）及微量红花苷，故花冠是淡黄色；开花中期酮类）及微量红花苷，故花冠是淡黄色；开花中期

7、花中主要成分为黄色的红花苷，故花冠为深黄色；花中主要成分为黄色的红花苷，故花冠为深黄色；开花后期则变成红色的醌式红花苷，故花冠为红色。开花后期则变成红色的醌式红花苷，故花冠为红色。本讲稿第十五页，共九十六页7 7花色素类花色素类 又称花青又称花青素，是一类素，是一类水溶性色素水溶性色素，多以多以苷苷的形式存在。的形式存在。矢车菊素矢车菊素花色素花色素本讲稿第十六页，共九十六页8 8黄烷黄烷-3-3-醇类醇类 又称儿茶素类化合物又称儿茶素类化合物（）（）儿茶素儿茶素 黄烷醇黄烷醇 本讲稿第十七页，共九十六页9 9橙橙酮类酮类 橙橙酮酮硫磺菊素硫磺菊素本讲稿第十八页，共九十六页（三（三)组成黄酮苷

8、的糖类组成黄酮苷的糖类 单糖类：单糖类：D-葡萄糖、葡萄糖、D-半乳糖、半乳糖、D-木糖、木糖、L-鼠李糖、鼠李糖、L-L-阿拉伯糖、阿拉伯糖、D-D-葡萄糖醛酸等。葡萄糖醛酸等。酰化糖类：酰化糖类：2-乙酸葡萄糖等。乙酸葡萄糖等。三糖类：三糖类：龙胆三糖、槐三糖等。龙胆三糖、槐三糖等。双糖类：双糖类：槐糖、芸香糖、龙胆二糖等。槐糖、芸香糖、龙胆二糖等。本讲稿第十九页，共九十六页第二节第二节 黄酮类的理化性质及显色反应黄酮类的理化性质及显色反应 一、性一、性状状多为结晶性固体，多为结晶性固体，少数苷为无定形粉末。少数苷为无定形粉末。1晶形晶形 本讲稿第二十页，共九十六页3颜色颜色 黄酮、黄酮醇

9、及其苷类黄酮、黄酮醇及其苷类灰黄灰黄黄色黄色查耳酮查耳酮黄黄橙黄色橙黄色，二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇不显色不显色异黄酮异黄酮显微黄色微黄色本讲稿第二十一页，共九十六页黄酮类化合物大多呈色的最主要原因是黄酮类化合物大多呈色的最主要原因是交叉共轭体系交叉共轭体系本讲稿第二十二页，共九十六页 黄酮（醇）分子中，尤其在黄酮（醇）分子中，尤其在 7-位及位及 4-位引入位引入-OH及及-OCH3等助色团后，而使等助色团后，而使化合物的化合物的颜色加深。颜色加深。花色素及其苷元的颜色随花色素及其苷元的颜色随pH不同而改变不同而改变 一般显一般显红红（pH 7）紫紫（pH8.5）蓝蓝（pH8.

10、5）等颜色）等颜色本讲稿第二十三页，共九十六页A.黄色黄色B.淡黄色淡黄色C.紫色紫色D.红色红色E.无色无色二氢黄酮类化合物的颜色多是二氢黄酮类化合物的颜色多是（E）黄酮类化合物的准确定义为黄酮类化合物的准确定义为A.两个苯环通过三碳链相连的一类化合物两个苯环通过三碳链相连的一类化合物B.B.-吡喃酮吡喃酮C.2-苯基色原酮苯基色原酮D.2-苯基苯并苯基苯并-吡喃酮吡喃酮E.2-苯基苯并苯基苯并-吡喃酮吡喃酮（A）本讲稿第二十四页，共九十六页色原酮环色原酮环C2、C3间为双键，间为双键，B环连接在环连接在C3位的黄酮类化合物是位的黄酮类化合物是A.黄酮醇黄酮醇B.异黄酮异黄酮C.查耳酮查耳酮

11、D.二氢黄酮二氢黄酮E.黄烷醇黄烷醇（B）本讲稿第二十五页，共九十六页 二、溶二、溶解解性性1苷与苷元苷与苷元 游离苷元游离苷元 苷类苷类 2苷元苷元黄酮、黄酮醇、查耳酮等黄酮、黄酮醇、查耳酮等更难溶于水更难溶于水平面性强的分子，因分子与分子间平面性强的分子，因分子与分子间排列紧排列紧密密，分子间，分子间引力较大。引力较大。本讲稿第二十六页，共九十六页二氢黄酮及二氢黄酮醇等二氢黄酮及二氢黄酮醇等溶解度稍大溶解度稍大因系因系非平面性非平面性分子，故分子与分子间分子，故分子与分子间排排列不紧密列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子，分子间引力降低，有利于水分子进入，进入，溶解度稍大。溶解度稍大。R

12、=H，二氢黄酮，二氢黄酮R=OH，二氢黄酮醇，二氢黄酮醇本讲稿第二十七页，共九十六页花色苷元（花青素）类花色苷元（花青素）类水溶度较大水溶度较大虽也为平面性结构，但因以虽也为平面性结构，但因以离子形式离子形式存在，具有存在，具有盐的通性盐的通性，故亲水性较强。，故亲水性较强。花青素花青素本讲稿第二十八页，共九十六页 3 3苷类苷类苷元相同时，羟基糖越多，糖分子越多，苷元相同时，羟基糖越多，糖分子越多，水溶度越大。水溶度越大。同一苷元，同一苷元，3-O-葡萄糖苷葡萄糖苷的水溶度的水溶度7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷本讲稿第二十九页，共九十六页 三、酸性与碱性三、酸性与碱性（一）酸性（一）酸性黄酮黄酮酚

13、羟基酸性强弱顺序依次为：酚羟基酸性强弱顺序依次为：7,4-7,4-二二OHOH7-7-或或4-OH4-OH一般酚羟基一般酚羟基5-5-OHOH应用应用:用于提取、分离及鉴定工作用于提取、分离及鉴定工作 本讲稿第三十页，共九十六页判断下列黄酮类化合物的酸性大小判断下列黄酮类化合物的酸性大小A.4-羟基黄酮羟基黄酮B.6-羟基黄酮羟基黄酮C.7,4-二羟基黄酮二羟基黄酮D.5-羟基黄酮羟基黄酮E.6,4-二羟基黄酮二羟基黄酮CEABD本讲稿第三十一页，共九十六页（二）碱性（二）碱性强酸下形成洋盐强酸下形成洋盐 -吡喃环上的吡喃环上的1-氧原子氧原子，因有未共用，因有未共用的电子对，故表现的电子对，

14、故表现微弱的碱性微弱的碱性，可与强无，可与强无机酸生成盐，但生成的盐极不稳定，加水机酸生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分解。后即可分解。本讲稿第三十二页，共九十六页 （五）显色反应1.还原反应还原反应（1）盐酸）盐酸-镁粉反应（镁粉反应（HCl-Mg）（2）四氢硼钠反应（）四氢硼钠反应（NaBH4）2.金属盐类试剂的络合反应金属盐类试剂的络合反应（1）铝盐）铝盐（4）镁盐）镁盐（2）铅盐）铅盐（5）氯化锶）氯化锶（3）锆盐）锆盐3.硼酸显色反应硼酸显色反应4.碱性试剂显色反应碱性试剂显色反应本讲稿第三十三页，共九十六页 四、呈色反应四、呈色反应（一）还原试验（一）还原试验鉴别鉴别1盐酸盐

15、酸-镁粉（或锌粉）反应镁粉（或锌粉）反应鉴别黄酮类化合物最常用的显色反应鉴别黄酮类化合物最常用的显色反应黄酮（醇）黄酮（醇）橙红橙红紫红色紫红色二氢黄酮（醇）二氢黄酮（醇）查耳酮、橙酮、儿茶素查耳酮、橙酮、儿茶素（-）异黄酮类除少数例外，也不显色异黄酮类除少数例外，也不显色操作：操作：样品样品/乙醇中加入少许镁粉振摇，滴加乙醇中加入少许镁粉振摇，滴加 几滴浓几滴浓HClHCl，即可显色。，即可显色。本讲稿第三十四页，共九十六页 （五）（五）显色反应显色反应 1.还原反应(1)盐酸镁粉反应（HCl-Mg）本讲稿第三十五页，共九十六页排除干扰排除干扰：先作空白对照实验先作空白对照实验Mg粉粉2 2

16、四氢硼钠反应四氢硼钠反应区别区别二氢黄酮二氢黄酮类类上述四种黄酮上述四种黄酮HCl无色无色红色红色二氢黄酮类二氢黄酮类/EtOH2NaBH4/MeOH浓浓HCl 红红紫色紫色其它黄酮类化合物均不显色。其它黄酮类化合物均不显色。本讲稿第三十六页，共九十六页 （五）（五）显色反应显色反应 1.1.还原反应还原反应（2）四氢硼钠反应（NaBH4）本讲稿第三十七页，共九十六页常可与金属类试剂反应，生成有色络合物。常可与金属类试剂反应，生成有色络合物。（1）铝盐）铝盐（2）铅盐）铅盐（3）锆盐）锆盐（4）镁盐）镁盐（5）氯化锶）氯化锶黄酮类化合物分子结构中多具有下列结构：黄酮类化合物分子结构中多具有下列

17、结构：C3-OH，C5-OH，邻二酚，邻二酚OH（+）本讲稿第三十八页，共九十六页1.铝盐铝盐 1AlCl3溶液，络合物多为溶液，络合物多为黄色，黄色，为为显色剂和比色测定。显色剂和比色测定。C3-OH，C5-OH邻二邻二OH黄色黄色黄酮类化合物的基本定性鉴别黄酮类化合物的基本定性鉴别本讲稿第三十九页，共九十六页2.铅盐铅盐 常用常用1醋酸铅醋酸铅及及碱式醋酸铅碱式醋酸铅水溶液水溶液，可可生成生成沉淀沉淀。应用：应用：鉴定、提取及分离工作。鉴定、提取及分离工作。1醋酸铅：只能与邻二酚羟基或兼有醋酸铅：只能与邻二酚羟基或兼有3-羟基、羟基、4酮基或酮基或5-羟基、羟基、4酮基的结构反应。酮基的结

18、构反应。碱式醋酸铅：一般酚类化合物均可用之沉淀碱式醋酸铅：一般酚类化合物均可用之沉淀本讲稿第四十页，共九十六页3ZrOCl2（锆盐）（锆盐）区别区别C3-OH与与C5-OH可用可用不与邻二酚羟基反应不与邻二酚羟基反应 5-OH黄酮类黄酮类3-OH2%枸橼酸枸橼酸 黄黄（3-OH3-OH黄酮黄酮）褪色（褪色（5-OH5-OH黄酮）黄酮）2%ZrOCl2黄黄甲醇甲醇本讲稿第四十一页，共九十六页（3）锆盐（ZrOCl2）（五）（五）显色反应显色反应 2.2.金属盐类试剂的络合金属盐类试剂的络合本讲稿第四十二页，共九十六页3-OH3-OH，4-4-酮基酮基络合物稳定性络合物稳定性5 5OHOH，4-4

19、-酮基酮基络合物络合物原因：原因：本讲稿第四十三页，共九十六页4镁盐镁盐 鉴别两类二氢黄酮鉴别两类二氢黄酮 二氢黄酮二氢黄酮Mg(Ac)2二氢黄酮醇二氢黄酮醇天蓝色天蓝色荧光荧光喷洒喷洒黄酮、黄酮醇及异黄酮黄酮、黄酮醇及异黄酮 显显黄色黄色橙黄色橙黄色褐色褐色 本讲稿第四十四页，共九十六页（4）镁盐）镁盐本讲稿第四十五页，共九十六页 5.氯化锶（氯化锶（SrCl2）鉴别鉴别邻二邻二OH具邻二酚邻二酚OHOH黄酮黄酮类/氨性甲醇氨性甲醇 绿色绿色棕色棕色乃至乃至黑色黑色本讲稿第四十六页，共九十六页（三）硼酸显色反应（三）硼酸显色反应具具5 5OHOH 的黄酮的黄酮 22OHOH查耳酮查耳酮硼酸硼

20、酸亮黄色亮黄色酸性液酸性液本讲稿第四十七页，共九十六页本讲稿第四十八页，共九十六页（四）碱性试剂显色反应（四）碱性试剂显色反应在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情察样品用碱性试剂处理后的颜色变化情况，对于鉴别黄酮类化合物有一定意义。况，对于鉴别黄酮类化合物有一定意义。本讲稿第四十九页，共九十六页碱性试剂显色反应碱性试剂显色反应本讲稿第五十页，共九十六页五、三氯化铁反应：五、三氯化铁反应：检查酚类化合物检查酚类化合物多数黄酮类化合物因分子中含有游离酚羟多数黄酮类化合物因分子中含有游离酚羟基，与三氯化铁水溶液或醇溶液可产生正基，与三

21、氯化铁水溶液或醇溶液可产生正反应，呈现颜色；当含有氢键缔合的酚羟反应，呈现颜色；当含有氢键缔合的酚羟基时，颜色更明显。基时，颜色更明显。本讲稿第五十一页，共九十六页思考题思考题鉴别：黄酮类和二氢黄酮类5-羟基黄酮和3-羟基黄酮3-羟基黄酮和邻二羟基黄酮本讲稿第五十二页，共九十六页 第三节第三节 黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离 一、提一、提取取存在形式存在形式：花、叶、果等组织中花、叶、果等组织中苷苷木部坚硬组织中木部坚硬组织中游离苷元游离苷元本讲稿第五十三页，共九十六页花青素类花青素类可加少量酸（如可加少量酸（如 0.l盐酸）盐酸）黄酮苷元黄酮苷元宜用极性较小的溶剂宜用极性较

22、小的溶剂（氯仿、乙醚、醋酸乙酯）等提取（氯仿、乙醚、醋酸乙酯）等提取多糖苷类多糖苷类沸水提取沸水提取选择溶剂：选择溶剂：黄酮苷黄酮苷，极性稍大的苷元极性稍大的苷元丙酮、丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水、醋酸乙酯、乙醇、水、甲醇甲醇-水（水（1：1）、甲醇）、甲醇本讲稿第五十四页，共九十六页 四、黄酮类化合物的提取分离四、黄酮类化合物的提取分离（一）提取（一）提取1.溶剂法溶剂法2.碱提酸沉法碱提酸沉法3.炭粉吸附法炭粉吸附法本讲稿第五十五页，共九十六页 （一）（一）提取提取 1.1.溶剂萃取法溶剂萃取法本讲稿第五十六页，共九十六页 （一）（一）提取提取 1.1.溶剂萃取法溶剂萃取法本讲稿第五十七页，共

23、九十六页一提取方法一提取方法溶溶剂剂法法溶溶剂剂法法关关键键溶溶剂剂的的选择选择选择选择依据依据黄黄酮类酮类成分的存在状成分的存在状态态（游离、苷）及溶解性（游离、苷）及溶解性溶溶剂剂的溶解性能的溶解性能提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的提取方法（煎煮法、渗漉法、回流法等）的选择选择溶溶剂剂提取原理提取原理游离黄游离黄酮酮黄黄酮酮苷苷备备注注乙醇乙醇溶解范溶解范围围广广+（甲醇）（甲醇）苷、苷元均可溶苷、苷元均可溶（9095%）(60%）甲醇毒性大甲醇毒性大沸水沸水多糖苷易于水多糖苷易于水+水溶性水溶性杂质杂质多多碱性水或碱性水或稀稀氢氢氧化氧化钠钠溶出能力溶出能力强强碱性乙醇碱性乙醇酚酚

24、羟羟基的酸性基的酸性+石灰水除石灰水除杂质杂质效果好效果好本讲稿第五十八页，共九十六页l利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行地萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。本讲稿第五十九页，共九十六页 四、黄酮类化合物的提取分离（一）提取（一）提取1.溶剂法溶剂法2.碱提酸沉法碱提酸沉法3.炭粉吸附法炭粉吸附法本讲稿第六十页，共九十六页 （一）（一）提取提取 2.碱提取酸沉淀法注意：加入的酸、碱度应尽可能低。注意：加入的酸、碱度应尽可能低。例如：芦丁

25、的提取例如：芦丁的提取本讲稿第六十一页，共九十六页l槐米中芦丁的提取l槐米（槐树SophorajaponicaL.花蕾）加约6倍量水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH89，在此pH条件下微沸2030分钟，趁热抽滤，残渣同上再加4倍水煎1次，趁热抽滤。合并滤液，在6070下，用浓盐酸调至pH为5，搅匀，静置24小时，抽滤。沉淀物水洗至中性，60干燥得芦丁粗品，于水中重结晶，7080干燥得芦丁纯品。本讲稿第六十二页，共九十六页2碱水提酸沉淀法碱水提酸沉淀法适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。丁的提取。注意事项：注意事项：酸碱度不宜过大酸碱度不宜过大邻二酚

26、羟基的保护：碱性条件下，邻二酚邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护羟基易被氧化，加硼砂保护石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质酸性杂质本讲稿第六十三页，共九十六页 四、黄酮类化合物的提取分离（一）提取1.溶剂法溶剂法2.碱提酸沉法碱提酸沉法3.炭粉吸附法炭粉吸附法本讲稿第六十四页，共九十六页 （一）（一）提取提取 4.4.炭粉吸附法炭粉吸附法主要适用于苷类成分的精制。本讲稿第六十五页，共九十六页 二、分二、分离离分离黄酮的依据分离黄酮的依据：（1 1）极性大小不同）极性大小不同吸附吸附层析层析（2 2）分配比不同）分配比不同分

27、配分配层析层析（3 3）酸性不同）酸性不同pH梯度萃取法梯度萃取法（4）MW大小不同大小不同葡聚糖凝胶分子筛葡聚糖凝胶分子筛molecularweight 或膜技或膜技术术（5 5）官能团）官能团络合，沉淀等络合，沉淀等 本讲稿第六十六页，共九十六页（一）柱色谱法（一）柱色谱法1硅胶柱色谱硅胶柱色谱 适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类 常用的分离方法有常用的分离方法有柱层析法柱层析法、萃取法萃取法、铅盐法铅盐法、HPLCHPLC法、法、薄层层析法薄层层析法等。等。常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰

28、胺及纤维常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。素粉等。也有用氧化铝、氧化镁及硅藻土等。本讲稿第六十七页，共九十六页（三）柱色（三）柱色谱谱法法吸附原理吸附原理异黄异黄酮酮、二、二氢氢黄黄酮酮（醇）、（醇）、氯氯仿仿-甲醇不同比例甲醇不同比例（105，活化），活化）高度甲基化或乙高度甲基化或乙酰酰化黄化黄酮酮（醇）（醇）混合溶混合溶剂剂洗脱洗脱（极性小）（极性小）1硅胶柱色谱硅胶柱色谱本讲稿第六十八页，共九十六页（1）分离对象）分离对象：酚、醌、硝基化合物酚、醌、硝基化合物2 2聚酰胺柱色谱聚酰胺柱色谱（2 2）原）原 理：理：氢键吸附氢键吸附 本讲稿第六

29、十九页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.1.柱色谱法柱色谱法（4）聚酰胺柱色谱吸附强弱取决于吸附强弱取决于化合物与聚酰胺形成氢键的能力。化合物与聚酰胺形成氢键的能力。聚酰胺对化合物的吸附力在水中有下列规律：聚酰胺对化合物的吸附力在水中有下列规律：形成氢键的基团越多，则吸附力越强；形成氢键的基团越多，则吸附力越强；本讲稿第七十页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.1.柱色谱法柱色谱法（4）聚酰胺柱色谱易形成分子内氢键，则吸附力减弱；易形成分子内氢键，则吸附力减弱；C=O C=O 邻位邻位邻位邻位-OH黄酮黄酮C=OC=O对位对位（或间位）间位）间位）间位）-OH-OH黄酮黄酮 本讲稿第

30、七十一页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.1.柱色谱法柱色谱法（4）聚酰胺柱色谱芳香核、共轭双键多者芳香核、共轭双键多者吸附力大；吸附力大；本讲稿第七十二页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.柱色谱法（4）聚酰胺柱色谱以上介绍了聚酰胺对化合物吸附力的影响因素。以上介绍了聚酰胺对化合物吸附力的影响因素。即：即：形成氢键的基团越多，则吸附力越强；形成氢键的基团越多，则吸附力越强；（Ar-OH、-COOH、醌基、硝基等）、醌基、硝基等）易形成分子内氢键，则吸附力减弱；易形成分子内氢键，则吸附力减弱；（邻二（邻二-OH、3-OH4-酮基、酮基、5-OH4-酮基等）酮基等）芳香核、共轭双键多者

31、芳香核、共轭双键多者吸附力大；吸附力大；本讲稿第七十三页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.1.柱色谱法（4 4）聚酰胺柱色谱聚酰胺柱色谱在分离黄酮类化合物时聚酰胺柱色谱在分离黄酮类化合物时有下述规律：有下述规律：本讲稿第七十四页，共九十六页聚酰胺的聚酰胺的双重色谱性双重色谱性以以含水含水移动相（如甲醇一水）作洗脱移动相（如甲醇一水）作洗脱剂，剂，苷苷比比苷元苷元先洗下来。先洗下来。以有机溶剂有机溶剂作洗脱剂作洗脱剂（如氯仿一甲醇）（如氯仿一甲醇）苷元苷元比比苷苷先洗脱下来。先洗脱下来。本讲稿第七十五页，共九十六页极性移动相（极性移动相（含水含水 溶剂系统）洗脱时溶剂系统）洗脱时有有机机溶

32、溶剂剂（如如氯氯仿仿一甲醇）洗脱时一甲醇）洗脱时色谱行为色谱行为类似类似反相分配色谱反相分配色谱正相分配色谱正相分配色谱苷极性苷元苷极性苷元苷元极性苷苷元极性苷苷苷先洗脱先洗脱苷元苷元易洗脱易洗脱本讲稿第七十六页，共九十六页洗脱洗脱规规律律：与吸附与吸附规规律正好相反，即吸附能力越律正好相反，即吸附能力越强强，越越难难洗脱（薄洗脱（薄层层Rf越小）越小）（2）“双重色双重色谱谱”原理原理主要用于解主要用于解释释黄黄酮酮苷与苷元聚苷与苷元聚酰酰胺色胺色谱现谱现象象正相色正相色谱谱反相色反相色谱谱聚聚酰酰胺：胺：极性固定相（极性极性固定相（极性酰酰胺基胺基团团）非极性固定相非极性固定相（非极性脂肪

33、（非极性脂肪链链）洗脱洗脱剂剂：有机溶有机溶剂剂（氯氯仿仿-甲醇，极性小甲醇，极性小）含水溶含水溶剂剂（甲醇（甲醇-水，极性大）水，极性大）先洗脱：先洗脱：游离黄游离黄酮酮（苷元，极性小）（苷元，极性小）苷苷（极性大）（柱色（极性大）（柱色谱谱分离）分离）Rf值值：苷元苷元 苷苷苷元苷元 二氢黄酮醇二氢黄酮醇黄酮黄酮黄酮醇黄酮醇本讲稿第七十八页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.柱色谱法（4 4）聚酰胺柱色谱苷元相同，出柱先后顺序：苷元相同，出柱先后顺序：叁糖苷叁糖苷双糖苷双糖苷单糖苷单糖苷苷元苷元查尔酮往往比相应的黄酮类化合物难于洗脱查尔酮往往比相应的黄酮类化合物难于洗脱。本讲稿第七十九

34、页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.1.柱色谱法（5）葡聚糖凝胶柱色谱葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶（Sephadexgel）用于黄酮类化合物的分离，主要有两种型号：用于黄酮类化合物的分离，主要有两种型号：Sephadex-G型型SephadexLH-20型型（羟丙基葡聚糖凝胶）（羟丙基葡聚糖凝胶）本讲稿第八十页，共九十六页 （二）（二）分离分离 1.柱色谱法（5）葡聚糖凝胶柱色谱作用机理：作用机理：分离游离黄酮时分离游离黄酮时吸附作用吸附作用（取决于游离（取决于游离Ar-OH的数目，的数目，Ar-OH少则先出柱）少则先出柱）分离黄酮苷是分离黄酮苷是分子筛起主导作用分子筛起主导作用（分子量大的先出

35、柱）（分子量大的先出柱）本讲稿第八十一页，共九十六页（二）梯度（二）梯度pH萃取法萃取法酸性不同的酸性不同的黄酮苷元黄酮苷元的分离的分离酸性：酸性：7,4-OH7-或或 4-OH一般一般Ar-OH5-OH5%NaHCO3 35%Na2 2CO2 20.2%NaOH4%NaOH溶解溶解的碱水的碱水本讲稿第八十二页，共九十六页二二.分离方法分离方法（一）溶（一）溶剂剂萃取法萃取法黄黄酮酮与与杂质杂质分离依据：成分之分离依据：成分之间间苷与苷元苷与苷元之之间间的极性（分配系数的极性（分配系数K）差异）差异苷元与苷元苷元与苷元分离工分离工艺艺：原料的提取原料的提取浓缩浓缩液（水溶液）液（水溶液）依次以

36、石油依次以石油醚醚、乙、乙醚醚、乙酸乙、乙酸乙酯酯、水、水饱饱和正丁醇萃取和正丁醇萃取石油石油醚醚液液乙乙醚醚液液乙酸乙乙酸乙酯酯水水饱饱和正丁醇和正丁醇母液母液（脂溶性（脂溶性杂质杂质）回收回收回收回收减减压压回收回收（水溶性（水溶性杂质杂质)苷元苷元单单糖苷糖苷多糖苷多糖苷本讲稿第八十三页，共九十六页 （二）（二）分离分离 2.pHpH梯度萃取法梯度萃取法适用于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。适用于酸性强弱不同的黄酮苷元的分离。本讲稿第八十四页，共九十六页第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定测定一般步骤：测定一般步骤：（1）化学反应化学反应（2）PC、TLC

37、（3）UV光谱光谱（4）1H-NMR（5）MS（6）13C-NMR本讲稿第八十五页，共九十六页一一 化学反应化学反应确定化合物的类别确定化合物的类别 二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用二、色谱法在黄酮类鉴定中的应用确定黄酮的种类与数量确定黄酮的种类与数量（一）纸色谱（一）纸色谱（PPC）分离黄酮类化合物及其苷的混合物分离黄酮类化合物及其苷的混合物 1原理原理 分配色谱分配色谱本讲稿第八十六页，共九十六页(二二)硅胶薄层色谱：硅胶薄层色谱：(不用不用Al2O3）分离与鉴定分离与鉴定弱极性弱极性黄酮类黄酮类（三）聚酰胺薄层色谱（三）聚酰胺薄层色谱分离含游离分离含游离酚羟基酚羟基的黄酮及其苷类的黄酮及其

38、苷类本讲稿第八十七页，共九十六页在不同展开剂中，苷、苷元的在不同展开剂中，苷、苷元的Rf值不同值不同脂性脂性溶剂：溶剂：Rf 苷元苷元 单糖苷单糖苷 双糖苷双糖苷 水溶剂水溶剂：Rf 三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷苷元苷元 本讲稿第八十八页，共九十六页本讲稿第八十九页，共九十六页本讲稿第九十页，共九十六页本讲稿第九十一页，共九十六页三、紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中三、紫外及可见光谱在黄酮类鉴定中的应用的应用紫外及可见光谱一般程序紫外及可见光谱一般程序：1测定样品在测定样品在甲醇甲醇中的中的UV光谱光谱2测定测定甲醇甲醇+诊断试剂后诊断试剂后的的UV光谱光谱3苷类苷类水解，或甲基化后水解，或甲基化后

39、水解水解 测苷元或衍生物的测苷元或衍生物的UV光谱光谱 本讲稿第九十二页，共九十六页（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的的UV光谱特征光谱特征 1两个谱带两个谱带、与结构的关系与结构的关系 苯甲酰基苯甲酰基 峰带峰带（220280nm）桂皮酰基桂皮酰基 峰带峰带（300400nm）本讲稿第九十三页，共九十六页 2各种类型黄酮的各种类型黄酮的UV光谱特点光谱特点（1）黄酮及黄酮醇类）黄酮及黄酮醇类 黄酮黄酮 黄酮黄酮 3-OR黄酮醇黄酮醇 带带(nm)(nm)带带(nm)(nm)220-280304-350328-357352-385本讲稿第九十四页，共九十六页木犀草素木犀草素(黄酮类黄酮类)槲皮素槲皮素(黄酮醇类黄酮醇类)（A）黄酮及黄酮醇类）黄酮及黄酮醇类UV光谱（甲醇）光谱（甲醇）本讲稿第九十五页，共九十六页本讲稿第九十六页，共九十六页