1.1《DNA重组技术的基本工具》课件.pptx

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1、第1页/共50页第2页/共50页1.DNA1.DNA的基本组成单位的基本组成单位:脱氧核苷酸脱氧核苷酸脱氧核苷酸脱氧核苷酸鸟嘌呤脱鸟嘌呤脱氧核苷酸氧核苷酸腺嘌呤脱腺嘌呤脱氧核苷酸氧核苷酸胞嘧啶脱胞嘧啶脱氧核苷酸氧核苷酸 胸腺嘧啶脱胸腺嘧啶脱氧核苷酸氧核苷酸脱氧核糖含氮碱基磷酸AGCT2.2.2.2.脱氧核苷酸的种类：脱氧核苷酸的种类：脱氧核苷酸的种类：脱氧核苷酸的种类：知识重温：知识重温：DNADNA分子的结构分子的结构第3页/共50页氢键氢键平面结构平面结构立体结构立体结构ATGCTACG磷磷酸酸二二酯酯键键3.DNA3.DNA分子的结构分子的结构第4页/共50页第5页/共50页第6页/共5

2、0页第7页/共50页第8页/共50页第9页/共50页第10页/共50页11限限制制酶酶的的识识别别序序列列有有何何特特点点？第11页/共50页限制酶识别序列的特点限制酶识别序列的特点中轴线两侧的中轴线两侧的DNADNA上碱基呈反向对称，重复排列上碱基呈反向对称，重复排列 如：如：GAAGAA TTCTTC CCCCCC GGGGGG CTT CTT AAGAAG GGGGGG CCCCCC中轴线中轴线第12页/共50页 1、EcoR（大肠杆菌的一种限制酶）能识别GAATTC序列，并切割G和A之间的磷酸二酯键。2、Sma能识别CCCGGG序列，并切割C和G之间的磷酸二酯键。常用的两种限制酶第13

3、页/共50页EcoR黏性末端黏性末端黏性末端黏性末端第14页/共50页什么叫黏性末端？当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA的末端带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的末端叫黏性末端。第15页/共50页Sma平末端平末端第16页/共50页什么叫平末端？当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA的末端是平整的，这样的末端叫平末端。平末端平末端平末端平末端第17页/共50页第18页/共50页可把可把黏性末端黏性末端之间的之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来。起来。Ecoli DNA连接酶或T4DNA连接酶第19页/共50页 T4 DNA连接酶连接酶还可把还可把平

4、末端平末端之间的之间的缝隙缝隙“缝合缝合”起来，但效率较低起来，但效率较低第20页/共50页氢键氢键TGCGATAC磷磷酸酸二二酯酯键键TACGTGCA DNA DNA聚合酶的作用：把聚合酶的作用：把单个单个脱氧核苷酸脱氧核苷酸连接到连接到DNADNA片段末端。片段末端。磷磷酸酸二二酯酯键键 DNA DNA连接酶的作用：将两连接酶的作用：将两个个双链双链DNADNA片段片段连接起来。连接起来。第21页/共50页第22页/共50页1.载体需要的条件：有1多个限制酶切点（便于外源基因的插入）对受体细胞无害导入基因能在受体细胞中复制、表达有某些标记基因，便于筛选作为分子运输车作为分子运输车载体，如果

5、没有切割位点将载体，如果没有切割位点将会怎样？会怎样？霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？子运输车吗？假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？录，转基因生物能有预想的效果吗？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？三、“分子运输车”基因进入受体细胞的载体第23页/共50页能复制并带着能复制并带着插入的目的基插入的目的基因一起复制因一起复制有切割位点有切割位点标记基因将来标记基因将来可用含青霉素可用含青霉素的培养基鉴别。的

6、培养基鉴别。2、基因工程中常用的载体、基因工程中常用的载体质粒质粒质粒是一种裸质粒是一种裸露的、结构简露的、结构简单独立于细菌单独立于细菌拟核之外、具拟核之外、具有自我复制能有自我复制能力的双链环状力的双链环状DNADNA分子。分子。第24页/共50页 在进行基因工程操作中在进行基因工程操作中,真正被用作载真正被用作载体的质粒都是在天然质粒体的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人的基础上进行过人工改造的。工改造的。质粒噬菌体的衍生物、某些动植物病毒等2、基因工程中常用的载体、基因工程中常用的载体第25页/共50页第26页/共50页第27页/共50页第28页/共50页第29页/共50页第30页/共

7、50页第31页/共50页第32页/共50页第33页/共50页第34页/共50页第35页/共50页第36页/共50页第37页/共50页第38页/共50页第39页/共50页第40页/共50页第41页/共50页一、基因工程的概念：一、基因工程的概念：二、二、DNA重组技术的基本工具：重组技术的基本工具：1.限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶“分子手术刀分子手术刀”2.DNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”3.3.基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体“分子运输车分子运输车分子运输车分子运输车”课堂小结第42页/共50页第43页/共50页第44页/共50页第45页/共50页第46页/共50页第47页/共50页第48页/共50页第49页/共50页感谢您的观看。第50页/共50页