凝集、沉淀反应.ppt

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1、凝集、沉淀反应凝集、沉淀反应 实验目的实验目的l1 掌握直接凝集反应的原理意义及操作方法掌握直接凝集反应的原理意义及操作方法 2 了解双向琼脂扩散试验的原理意义及操作方了解双向琼脂扩散试验的原理意义及操作方法法 实验内容l1 直接凝集反应玻片法直接凝集反应玻片法 l2 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验 实验原理实验原理l直接凝集反应：颗粒性抗原悬液与其相应抗体，直接凝集反应：颗粒性抗原悬液与其相应抗体，在有适量电解质的环境中，两者直接特异性结在有适量电解质的环境中，两者直接特异性结合，进一步凝集成肉眼可见的凝集块。合，进一步凝集成肉眼可见的凝集块。l沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体特异性结合，沉

2、淀反应：可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及其一定的温度两者比例适当并有电解质存在及其一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀物，在琼脂板上双方结合出现白色沉淀线。淀物，在琼脂板上双方结合出现白色沉淀线。实验用品实验用品l琼脂板，打孔器，酒精灯，毛细吸管，诊断血琼脂板，打孔器，酒精灯，毛细吸管，诊断血清，对照抗原，待检血清，湿盒，清，对照抗原，待检血清，湿盒，37温箱，温箱，双凹玻片，伤寒诊断血清，生理盐水，待检菌双凹玻片，伤寒诊断血清，生理盐水，待检菌液等。液等。实验方法实验方法直接凝集反应玻片法直接凝集反应玻片法

3、l1 先标记双凹玻片，两侧分别为先标记双凹玻片，两侧分别为1，2号，在号，在1号凹号凹内加入伤寒诊断血清内加入伤寒诊断血清1滴，在滴，在2号凹内加入生理盐号凹内加入生理盐水水1滴。滴。l2 分别加入待检菌液于两凹内各分别加入待检菌液于两凹内各1滴滴 l3 摇动混匀摇动混匀2分钟，观察结果分钟，观察结果 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验 l1 铺板：将溶化之铺板：将溶化之1琼脂琼脂5ml铺于洁净玻片上。铺于洁净玻片上。l2 打孔：在琼脂板上打打孔：在琼脂板上打7个孔。个孔。l3 封底：把琼脂板通过火焰三次。封底：把琼脂板通过火焰三次。l 4 加样：把抗体加样：把抗体1滴加于中央孔，把对照抗原滴加

4、于中央孔，把对照抗原加于上下两孔加于上下两孔 （6点，点，12点），把待检血清点），把待检血清（肝癌病人血清）加于右侧孔内，（肝癌病人血清）加于右侧孔内，左侧孔留左侧孔留作空白对照。作空白对照。l5 孵育：将加样后的琼脂板放在湿盒内，放入孵育：将加样后的琼脂板放在湿盒内，放入37温箱孵育温箱孵育24h，取出观察结果。，取出观察结果。实验结果与分析：实验结果与分析：l1直接凝集反应玻片法：直接凝集反应玻片法：1号凹内出现凝集颗粒，号凹内出现凝集颗粒，2号凹内均匀混浊不出现颗粒。号凹内均匀混浊不出现颗粒。l2 双向琼脂扩散试验：两对照抗原孔和抗体孔双向琼脂扩散试验：两对照抗原孔和抗体孔之间出现白色沉淀线，待检血清孔（之间出现白色沉淀线，待检血清孔（2点，点，4点）点）和中央抗体孔之间亦出现白色沉淀线为阳性反和中央抗体孔之间亦出现白色沉淀线为阳性反应应实验注意事项：实验注意事项：l1直接凝集反应玻片法摇动玻片时不要把两凹直接凝集反应玻片法摇动玻片时不要把两凹内液体混在一起。内液体混在一起。l2双向琼脂扩散试验要注意加样要加满而不溢双向琼脂扩散试验要注意加样要加满而不溢出为止。出为止。作业作业l1 写出实验报告写出实验报告 l 2 分析凝集反应的结果和意义分析凝集反应的结果和意义 l 3 绘出双向琼脂扩散试验结果图绘出双向琼脂扩散试验结果图