芦丁的提取.ppt

《芦丁的提取.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《芦丁的提取.ppt（18页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实验实验红枣中黄酮类化合物（芦丁、槲皮素）红枣中黄酮类化合物（芦丁、槲皮素）的提取、精制与鉴定的提取、精制与鉴定惠岑怿生命与化学科学学院化学实验中心概概 述述 黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一类重要的天然有机化合物。其其不同的颜色不同的颜色为为天然色素天然色素家族添加了更多色彩。这类含有家族添加了更多色彩。这类含有氧杂环氧杂环的化合的化合物多存在于高等植物及羊齿类植物中。物多存在于高等植物及羊齿类植物中。n分布：分布：黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以黄酮类化合物在花、叶、果等组织中多以苷苷的形式存在，而在木的形式存在，而在木部坚硬

2、组织中，多以部坚硬组织中，多以游离苷元游离苷元形式存在。形式存在。(苷，即糖苷的简称）苷，即糖苷的简称）n性质：性质：黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水难溶于酸性水，易溶于易溶于碱性水，碱性水，故可用故可用碱性水提取碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩（沉淀析出。此法简便易行，芦丁、橙皮苷、黄芩（qin)苷提取都应用此苷提取都应用此法。法。芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应一一 实验目的和要求实验目的和要求n实验目的：实验目的：n以槐米中提取黄酮类

3、化合物以槐米中提取黄酮类化合物-芦丁，掌握碱芦丁，掌握碱-酸法提取黄酮类化合物酸法提取黄酮类化合物的原理及操作的原理及操作n通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法n掌握黄酮类化合物的化学定性鉴定，熔点和薄层分析等方法，了解掌握黄酮类化合物的化学定性鉴定，熔点和薄层分析等方法，了解UVUV及及NMRNMR在苷类结构鉴定中的应用在苷类结构鉴定中的应用n实验要求实验要求n获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物获得三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰物n能根据化学实验及能根据化学实验及UVUV、NMRNMR数据初步推断出芦丁的结

4、构。并对黄酮类数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解化合物的结构测定有一般性的了解芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应槲皮素芦丁芦丁十乙酰化物芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应实验原理提取原理-芦丁分子中有酚羟基，呈弱酸性。在碱水中成盐而增大其溶解度。然后，在酸中不溶而沉淀析出，从而进行提取。精制原理-利用芦丁易溶于热水或热甲醇，而较难溶于冷水或冷甲醇，由此进行重结晶而精制。芦丁槲皮素实验流程实验流程搅拌下加搅拌下加入石灰乳入石灰乳（4gCaO4gCaO加加40ml)40ml)加加1g1g硼砂和硼砂和250ml250ml水水槐花米槐花米（25g25g）调节

5、调节PH8-9PH8-9直火加直火加热热保持微保持微沸沸30min30min趁热过滤趁热过滤滤液滤液残渣残渣在在60-7060-70下，用下，用浓盐酸调浓盐酸调PH3-4PH3-4静置静置提提取取芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应黄黄酮酮苷苷的的水水解解滤液滤液沉淀（粗品芦丁，沉淀（粗品芦丁，6060烘干）烘干）均分均分2 2份份重结晶重结晶苷水解苷水解抽滤抽滤按按1 1：6060量加入蒸馏水，沉量加入蒸馏水，沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸沸1515分钟后，趁热抽滤分钟后，趁热抽滤残渣残渣滤液滤液冷却冷却 抽滤抽滤精制芦丁（精制芦丁（6060烘烘干，备用）干，备用）

6、按按1 1：7070量加入量加入2%2%硫酸硫酸，加热，加热40min40min，放冷静，放冷静置，抽滤置，抽滤沉淀沉淀滤液（苷）滤液（苷）干燥干燥槲皮素（备用）槲皮素（备用）糖鉴定糖鉴定芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应苷水解反应+鼠李糖+葡萄糖糖糖的的鉴鉴定定水解所得滤液水解所得滤液5ml5ml用用Ba(OH)Ba(OH)2 2乳调乳调PHPH值至中性，值至中性，折叠扇形滤纸过滤白色沉淀折叠扇形滤纸过滤白色沉淀1.5g Ba(OH)1.5g Ba(OH)2 2加加10ml10ml水水残渣残渣滤液滤液蒸干，放冷蒸干，放冷加加1ml95%1ml95%乙醇溶乙醇溶解得解得样品溶液样品溶液纸

7、色谱纸色谱芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应糖糖的的纸纸色色谱谱鉴鉴定定标准品：葡萄糖乙醇液、鼠李糖乙醇液标准品：葡萄糖乙醇液、鼠李糖乙醇液展开剂：正丁醇：醋酸：水（展开剂：正丁醇：醋酸：水（4 4：1 1：5 5，上层），上层）显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，显色剂：喷邻苯二甲酸苯胺显示剂，105105烘箱烘箱加热加热10min,10min,显棕色斑点显棕色斑点点样点样层析层析芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应芦丁中糖的鉴定1、取一对直径大小相同的培养皿，内置一小层析槽，装上展开剂，密闭。2、取一圆形滤纸，以圆心为中心，用铅笔将其分为六等份，分别标注。将标准品和样品用毛细管在距圆

8、心1cm处分别以弧形点样1，挥干溶剂。3、另取一小长条滤纸卷成纸卷，从圆滤纸的圆心处穿进去，插入层析槽的展开剂中上下培养皿密闭。由于毛细作用，展开剂在滤纸上不断水平扩散，当展开至距原点5-6cm处时取出，红外灯下烘干，喷显色剂，再烘至显出斑点为止。观察结果并记录Rf值。注：1为确定点样量，应先做纸斑反应。方法为：取一长条滤纸，用毛细管分别点不同量的样品溶液，红外灯下烘干，喷显色剂，再烘至显出斑点为止。确定最佳点样量。定定性性反反应应盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，加几滴浓盐酸，1-2min1-2min

9、内，观察颜色变化。内，观察颜色变化。MolishMolish反应反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入等体积乙醇，加入等体积10%10%-萘酚萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。意观察两界面产生的变化。黄酮母核黄酮母核苷类苷类芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应芦芦丁丁的的全全乙乙酰酰化化芦丁芦丁 0.1g0.1g加入加入2ml2ml无水吡啶无水吡啶加入加入8ml8ml醋酐醋酐反应液反应液直火，水浴上回流直火，水浴上回流30min30min，放冷，搅拌，放冷，搅拌下将反应液倒入下将反应液倒入70ml70m

10、l水中，一直搅拌水中，一直搅拌到油滴消失，白色沉淀析出为止到油滴消失，白色沉淀析出为止反应液反应液抽滤，干燥抽滤，干燥反应物反应物防防 水水芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应聚聚酰酰胺胺薄薄层层色色谱谱样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰样品：分别取少量芦丁、槲皮素、芦丁的十乙酰 化物用化物用1ml95%1ml95%乙醇溶解乙醇溶解展开剂：展开剂：75%75%乙醇乙醇 10ml10ml显色剂：氨水，显色剂：氨水，2%AlCl2%AlCl3 3/EtOHEtOH颜色颜色氨水熏氨水熏AlClAlCl3 3 喷雾喷雾R Rf f值值日光日光UVUV日光日光UVUV日光日光UVUV标标准准

11、品品芦丁芦丁槲皮素槲皮素样样品品芦丁芦丁槲皮素槲皮素芦丁酰化物芦丁酰化物观察记录观察记录芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应定定性性反反应应盐酸盐酸-镁粉反应镁粉反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入少许镁粉振摇，滴乙醇，加入少许镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，加几滴浓盐酸，1-2min1-2min内，观察颜色变化。内，观察颜色变化。MolishMolish反应反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入等体积乙醇，加入等体积10%10%-萘酚萘酚溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注溶液，倾斜试管，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两界面产生的变化。意观察两界面产生的变化。黄酮

12、母核黄酮母核苷类苷类样品：少量芦丁、槲皮素样品：少量芦丁、槲皮素芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应2%2%二氯氧锆二氯氧锆-柠檬酸反应柠檬酸反应 将样品溶于将样品溶于1ml1ml乙醇，加入乙醇，加入2%二氯氧锆二氯氧锆-柠檬柠檬酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成酸溶液，摇匀，观察颜色变化。将反应液均分成两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部两份，向其中一份滴加柠檬酸甲醇溶液，另一部分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。分加等量醇溶液作对照。比较颜色变化。3-OH，5-OH定定性性反反应应稳定性：稳定性：3-OH3-OH络合物络合物5-OH5-OH络合物络合物芦丁的提取与定性反应

13、芦丁的提取与定性反应实验注意事项实验注意事项n芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢芦丁粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢n加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除加入石灰乳即可达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但去槐花米中含有的大量多糖类粘液质，但pH值不能过高，值不能过高，否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出否则钙能与芦丁形成螯合物而沉淀析出npH值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最佳值过低会使芦丁形成氧盐重新溶解，降低收率（最佳pH值为值为5）芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应思考题思考题n苷类结构的检识大体程序如何？苷类结构的检识大体程序如何？n苷类水解的方法？苷类水解的方法？n怎样确定芦丁分子中只含有一分子葡萄糖及一分子鼠李怎样确定芦丁分子中只含有一分子葡萄糖及一分子鼠李糖糖n怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素3-OH上？上？n苷元的结构怎样确定？苷元的结构怎样确定？n怎样确定苷键的构型？怎样确定苷键的构型？n芦丁的全乙酰化的植被过程中为什么要保证无水条件芦丁的全乙酰化的植被过程中为什么要保证无水条件？芦丁的提取与定性反应芦丁的提取与定性反应