培养基及配制全解优秀PPT.ppt

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1、培育基培育基种类种类成分成分配制配制技术技术一、培育基一、培育基培培育育基基的的成成分分3碳源和能源碳源和能源4植物激素植物激素1无机盐无机盐2有机物有机物5琼脂琼脂6协助物质协助物质1 1 无无 机机 盐盐元素名称元素名称添加形式添加形式NKNO3,NH4NO3大量大量PKH2PO4NaH2PO4元素元素KKClKNO3(0.5mmol/L)CaCaCl22H2OMgMg2SO47H2OSFeFeNa2-EDTA微量微量BH3BO3元素元素MnMnSO4(0.5mmol/L)CuCuSO4MoNa2MoO42H2OClCaCl22H2O1）大量元素）大量元素N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核

2、酸、磷脂、是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置。要的位置。P是磷脂的主要成分。培育基中常用是磷脂的主要成分。培育基中常用KH2PO4NaH2PO4等。等。K对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有对碳水化合物合成，转移，以及氮素代谢等有亲密关系。亲密关系。Mg、S、Ca是叶绿素的组成成分，又是激酶的是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；活化剂，对核蛋白体结构具有稳定作用；S是含是含S氨基酸的蛋白质的组成成分。氨基酸的蛋白质的组成成分。Ca是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，

3、稳定质是构成细胞壁的成分，对细胞分裂，稳定质膜结构有显著作用，此外，膜结构有显著作用，此外，Ca及钙调素在细胞及钙调素在细胞信号转导中起重要作用。信号转导中起重要作用。2）微量元素）微量元素在微量元素中，铁的运用最大，铁在微量元素中，铁的运用最大，铁是一些氧化酶的组成成分。同时又是叶是一些氧化酶的组成成分。同时又是叶绿素形成的必要条件。绿素形成的必要条件。由于培育基的由于培育基的pH较高，所以培育中较高，所以培育中几乎都运用不易分解的乙二胺四乙酸铁几乎都运用不易分解的乙二胺四乙酸铁这种鳌合物来防止铁的沉淀。这种鳌合物来防止铁的沉淀。硼与蛋白质合成、糖类运输有着亲密的关硼与蛋白质合成、糖类运输有

4、着亲密的关系；系；铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根铜是某些氧化酶的成分，能够促进离体根的生长；的生长；锰参与植物的光合、呼吸代谢；锰参与植物的光合、呼吸代谢；钼参与氮素的代谢；钼参与氮素的代谢；氯是光合作用水光解的活化剂。氯是光合作用水光解的活化剂。微量元素的主要作用是作为酶的协助微量元素的主要作用是作为酶的协助因子或激活剂参与代谢的调整。因子或激活剂参与代谢的调整。NoMSsalts没有任何生长特征没有任何生长特征MSsalts0.47g.l-1长出更多的根长出更多的根MSsalts9.52g.l-1长大量的再生苗而长大量的再生苗而无根无根*愈伤组织缺无机养分表现症状愈伤组织缺无机养分表

5、现症状愈伤组织缺无机养分表现症状愈伤组织缺无机养分表现症状 N-N-N-N-某些愈伤组织出现花青甙，没有导管形成某些愈伤组织出现花青甙，没有导管形成某些愈伤组织出现花青甙，没有导管形成某些愈伤组织出现花青甙，没有导管形成 N N N N、P P P P或或或或K-K-K-K-细胞过度增大且形成层削减细胞过度增大且形成层削减细胞过度增大且形成层削减细胞过度增大且形成层削减 S-S-S-S-愈伤组织特别明显褪绿愈伤组织特别明显褪绿愈伤组织特别明显褪绿愈伤组织特别明显褪绿 Fe-Fe-Fe-Fe-细胞分裂停止细胞分裂停止细胞分裂停止细胞分裂停止 B-B-B-B-细胞分裂和细胞伸长迟缓细胞分裂和细胞伸

6、长迟缓细胞分裂和细胞伸长迟缓细胞分裂和细胞伸长迟缓 Mg Mg Mg Mg和和和和Mn-Mn-Mn-Mn-影响细胞伸长影响细胞伸长影响细胞伸长影响细胞伸长2有有机机物物2.1维生素维生素2.2肌肌醇醇2.4氨基酸氨基酸2.3自然复合物自然复合物种类：种类：硫胺素硫胺素-维生素维生素B1VB1吡哆素吡哆素-维生素维生素B6VB6烟烟酸酸-维生素维生素B3Vpp抗坏血酸抗坏血酸-维生素维生素CVc以及以及B5、生物素、叶酸。、生物素、叶酸。浓度：浓度：0.11.0mg/L作用：作用：VB1促愈伤组织产生，提高活力促愈伤组织产生，提高活力VB6促根生长促根生长Vpp与代谢和胚发育有关与代谢和胚发育有

7、关Vc防组织褐变防组织褐变2.1维生素维生素2.2肌醇肌醇促进愈伤组织生长、促进愈伤组织生长、胚状体和芽的形成胚状体和芽的形成对组织细胞繁殖、对组织细胞繁殖、分化的促进作用分化的促进作用浓度浓度100 mg/L100 mg/L2有有机机物物2.1维生素维生素2.2肌肌醇醇2.4氨基酸氨基酸2.3自然复合物自然复合物椰乳：椰乳：促愈伤组织和细胞培育，促愈伤组织和细胞培育，用量用量1020%。运用留意。运用留意茎尖大小。茎尖大小。2.3自然复合物自然复合物香蕉泥：香蕉泥：对对pH值缓冲大，用量值缓冲大，用量150200ml/L，应用应用在兰花组培。在兰花组培。水解酪水解酪(乳乳)蛋白：蛋白：浓度浓

8、度100-200mg/L，多用，多用于微茎尖培育。于微茎尖培育。自然复合物自然复合物马铃薯提取液：马铃薯提取液：对对pH值缓冲大，用量值缓冲大，用量150-200g/L，使苗壮。，使苗壮。其它：其它：2.4氨基酸氨基酸种类：甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、丝氨种类：甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、丝氨酸、丙氨酸、半胱氨酸以及酰胺类物质酸、丙氨酸、半胱氨酸以及酰胺类物质（如天门冬酰胺）和多种氨基酸的混合（如天门冬酰胺）和多种氨基酸的混合物（如水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。物（如水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。留意：氨基酸类物质只有在含有无机氮留意：氨基酸类物质只有在含有无机氮的状况下，对离体组织生长才有较好的的状况下

9、，对离体组织生长才有较好的效果。效果。培培育育基基的的成成分分第第一一节节3碳源和能源碳源和能源4植物激素植物激素1无机盐无机盐2有机物有机物5琼脂琼脂6协助物质协助物质3碳源和能源碳源和能源种类：种类：蔗糖或葡萄糖、果糖、砂糖等。蔗糖或葡萄糖、果糖、砂糖等。蔗糖浓度：蔗糖浓度：1-5%，胚培育为，胚培育为4-15%。留意：留意：高压灭菌部分糖会分解。高压灭菌部分糖会分解。大生产时可用白砂糖。大生产时可用白砂糖。作用：作用：作为离体组织赖以生长的碳源作为离体组织赖以生长的碳源使培育基维持确定的渗透压（一般在使培育基维持确定的渗透压（一般在1.5-4.1MPa）蔗糖蔗糖（0%）蔗糖含量（蔗糖含量

10、（1%）蔗糖含量蔗糖含量（5%）在外植体上既没有在外植体上既没有芽发生，也没有根芽发生，也没有根和愈伤组织产生和愈伤组织产生在外植体上表面边缘在外植体上表面边缘产生芽，也有一些根产生芽，也有一些根发生发生芽从外植体的上表面发芽从外植体的上表面发生而根从下表面发生生而根从下表面发生4植物激素植物激素4.1.生长素类生长素类（1）种类）种类IBA吲哚丁酸；吲哚丁酸；IAA吲哚乙酸；吲哚乙酸；NAA萘乙酸；萘乙酸；2,4-D-2,4-二氯苯氧二氯苯氧乙酸乙酸运用效价：运用效价：IAAIBANAA2,4-DNAA、IBA生根培育生根培育2,4-D愈伤组织诱导与增殖愈伤组织诱导与增殖（2）作用诱导愈伤组

11、织和根分化，促进细）作用诱导愈伤组织和根分化，促进细胞分裂和伸长。胞分裂和伸长。NAA和和IBA常与细胞分裂素结合用于芽常与细胞分裂素结合用于芽的增殖。的增殖。（3）浓度）浓度0.055mg/L（4）配制）配制生长素可溶解在稀生长素可溶解在稀NaOH中或溶于中或溶于乙醇。乙醇。4.2细胞分裂素（细胞分裂素（CTK）（1）种类：）种类：Kt-激烈素激烈素BAP-苄氨基嘌呤苄氨基嘌呤2iP-异戊烯腺嘌呤异戊烯腺嘌呤ZT-玉米素玉米素TDZ（2）作用：启动脱分化、细胞增殖，诱导愈伤组织芽）作用：启动脱分化、细胞增殖，诱导愈伤组织芽分化、芽增殖，丛生芽。分化、芽增殖，丛生芽。（3）浓度：）浓度：0.0

12、510.0mg/L（4）配制：溶于稀酸或稀碱）配制：溶于稀酸或稀碱 激素配比模式激素配比模式生长素与细胞分裂素：它们的比例确定着发育的方向，生长素与细胞分裂素：它们的比例确定着发育的方向，是愈伤组织、长根还是长芽。是愈伤组织、长根还是长芽。高：有利于根的形成和愈伤组织高：有利于根的形成和愈伤组织的形成；的形成；适中：有利于根芽的分化；适中：有利于根芽的分化；低：有利于芽的形成低：有利于芽的形成生长素生长素 细胞分裂素细胞分裂素=如：为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素如：为了促进芽器官的分化，应除去或降低生长素的浓度，或者调整培育基中生长素与细胞分裂素的比的浓度，或者调整培育基中生长素与细

13、胞分裂素的比例。例。细胞细胞分裂分裂素与素与生长生长素对素对器官器官或愈或愈伤组伤组织的织的影响影响NoBAPBAP0.1mg.l-1NoNAAPoorshootdevelopmentandnoroots.ExtensivecallusgenerationPoorshootdevelopmentandnorootsNAA0.1mg.l-1Morebalanceddevelopmentofrootsandshoots.However,undifferentiatedcallusisdevelopingattheedgesoftheexplantProfusedevelopmentofrootsa

14、ndareducednumberofshoots.UndifferentiatedcallusisdevelopingattheedgesoftheexplantNAA5.0mg.l-1Profusedevelopmentofrootsovertheexplantupperandlowersurface,andfewshoots.Somecallus4.3 4.3 赤霉素（赤霉素（GAsGAs）（1 1）种类：）种类：GA3GA3（2 2）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打）作用：促茎伸长，促胚发育成植株；打破休眠；一般在器官形成后加入。破休眠；一般在器官形成后加入。留意：不耐热；生理活性留意

15、：不耐热；生理活性5 515d15d，时间太长有，时间太长有抑制作用。抑制作用。较生长素和细胞分裂素少用，可溶于水。较生长素和细胞分裂素少用，可溶于水。ABAABA因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；因物种不同，能促进或抑制愈伤组织生长；5琼脂琼脂/培育体支持材料培育体支持材料5.1.琼脂琼脂(1)用量用量610g/L(2)种类种类琼脂粉琼脂粉琼脂条琼脂条(3)作用作用固化作用固化作用留意：琼脂运用有优缺点；新买应试凝固力。留意：琼脂运用有优缺点；新买应试凝固力。不凝缘由：不凝缘由：pH5不凝；不凝；长时间高压灭菌；

16、长时间高压灭菌；长期存放，易变质；长期存放，易变质；厂家不同，杂质含量厂家不同，杂质含量不同不同配制时融解不充分，分装不匀整；配制时融解不充分，分装不匀整；5.2.5.2.其它其它玻璃纤维滤纸桥海绵、卡拉胶等玻璃纤维滤纸桥海绵、卡拉胶等6协协助助性性物物质质6.3抗生素抗生素6.2抗氧化物抗氧化物6.1活性炭活性炭6.1 活性炭活性炭1)作用：具吸附作用；作用：具吸附作用；茎尖初代培育可防褐化；促进新梢增殖（浓度茎尖初代培育可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1-0.2%）；）；促进生根促进生根,根避光生长；根避光生长；防止组培苗玻璃化（浓度防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）；）；有利于胚胎培育。有

17、利于胚胎培育。2)常用浓度：常用浓度：0.510g/L3)留意：活性炭具副作用。选择留意：活性炭具副作用。选择吸附性差，导致养分损耗和吸附性差，导致养分损耗和pH，应适当调高养分物质与激素水，应适当调高养分物质与激素水平，并加大平，并加大Agar用量。用量。6.2抗生素抗生素用量：用量：用量520mg/L留意：抗生素对组织生长有抑制作用，运用留意：抗生素对组织生长有抑制作用，运用要慎重。要慎重。多数需过滤灭菌。多数需过滤灭菌。作用：抑制内生菌；种类：青霉素、链霉素、庆大霉素、庆大霉素、利福平、卡那霉素等，6.3抗氧化物抗氧化物2)用量：用量：50200mg/L，3)作用：防止氧化作用：防止氧化

18、4)留意：可用抗氧化剂洗留意：可用抗氧化剂洗涤外植体伤口表面。涤外植体伤口表面。1)常用抗氧化剂：常用抗氧化剂：半胱氨酸、半胱氨酸、VC6.4其它成分：其它成分：AgNO3：作用：吸附乙烯，促进茎芽分化，防玻璃化作用：吸附乙烯，促进茎芽分化，防玻璃化苗、早衰、落叶；只能短期培育，苗、早衰、落叶；只能短期培育，用量用量110mg/L，需过滤灭菌，需过滤灭菌pH值在灭菌之前培育基的在灭菌之前培育基的pH值一般都是调整到值一般都是调整到5.0-6.0。一般来说，当一般来说，当pH值高于值高于6.0时培育基将会变硬；时培育基将会变硬；低于低于5.0时，琼脂不能很好地凝固。时，琼脂不能很好地凝固。pH值

19、对不同植物的影响会有差异，如玉米胚值对不同植物的影响会有差异，如玉米胚乳愈伤组织在乳愈伤组织在pH值值7.0时鲜重增加最快，在时鲜重增加最快，在pH值值6.1时干重增长最快。时干重增长最快。种种类类最适最适pH值值种种类类最适最适pH值值杜杜鹃鹃4.0月季月季5.8越桔越桔4.5胡胡萝萝卜、石刁柏卜、石刁柏6.0蚕豆蚕豆5.5桃桃7.0番茄番茄5.7不同植物对培育基最适不同植物对培育基最适pH值的要求不同值的要求不同(见表见表)二、培育基的制备 1 水和药品水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不行缺少程的介质和溶

20、媒。它是生命活动过程中不行缺少的物质。的物质。配制培育基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水，以保配制培育基母液时要用蒸馏水或重蒸馏水，以保持母液及培育基成分的精确性，防止贮藏过程发持母液及培育基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质。霉变质。大规模生产时可用自来水。大规模生产时可用自来水。但探讨上尽量用蒸馏水，以防成分的变更引起不但探讨上尽量用蒸馏水，以防成分的变更引起不良效果。良效果。药品：药品：应选取等级较高的化学纯（应选取等级较高的化学纯（CP）或分析纯）或分析纯(AR)；药品的称量确定要精确、正确，防止药勺之药品的称量确定要精确、正确，防止药勺之间的交叉污染。间的交叉污染。2.1母液（贮备液，母液

21、（贮备液，stocksolution)配制的目的配制的目的1）便利配置其他培育基；）便利配置其他培育基；2）保证各物质成分的精确性及配制时的快速移取）保证各物质成分的精确性及配制时的快速移取3）便于低温保藏。）便于低温保藏。2.2 母液配制方法母液配制方法（1）单配法：将培育基配方中的各种成分分别配成确）单配法：将培育基配方中的各种成分分别配成确定浓度的母液。定浓度的母液。（2）混配法：将几类养分成分按配方中的用量扩大确）混配法：将几类养分成分按配方中的用量扩大确定倍数称量，分别溶解后每一类混合在一起定容到确定倍数称量，分别溶解后每一类混合在一起定容到确定体积配成混合母液定体积配成混合母液.2

22、 培育基母液的配制和保存培育基母液的配制和保存（3）一般原则：）一般原则：一般母液配成比所需浓度高一般母液配成比所需浓度高10-1000倍。倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别配机物和激素类等。其中维生素、氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起制，也可以混在一起配制时留意一些离子之间易发生沉淀，如配制时留意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和和SO42-，Ca2+、Mg2+和和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一起溶解后，会产生沉淀，确定要充分溶解再放入母液中。确定要充分溶解再放入母液中。

23、各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。母液配好后放冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。母液配好后放冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。（4）母液配制的药品与器材1 1）药品：配制）药品：配制）药品：配制）药品：配制MSMS培育基所需的药品、生长调整物培育基所需的药品、生长调整物培育基所需的药品、生长调整物培育基所需的药品、生长调整物质、蒸馏水、质、蒸馏水、质、蒸馏水、质、蒸馏水、1mol/L1mol/L的的的的NaOHNaOH，1mol/L1mol/L的的的的HClHCl2 2）器材：）器材：）器材：）器材：各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、各类天

24、平、烧杯、容量瓶、量筒、各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、各类天平、烧杯、容量瓶、量筒、母液瓶、标签、冰箱等。母液瓶、标签、冰箱等。母液瓶、标签、冰箱等。母液瓶、标签、冰箱等。（5）母液配制（以）母液配制（以MS培育基为例）培育基为例）有机物母液有机物母液铁盐母液铁盐母液无机大量无机大量 母液母液无机微量母液无机微量母液激素母液激素母液配制MS培育基时母液的计算A 无机大量母液无机大量母液(扩大扩大10倍配倍配1L)成成成成 分分分分硝酸钾硝酸钾硝酸钾硝酸钾硝酸铵硝酸铵硝酸铵硝酸铵 硫酸镁硫酸镁硫酸镁硫酸镁磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸二氢钾氯化钙氯化钙氯化钙氯化钙称量工具称量工具称量工具称量

25、工具托盘天平托盘天平托盘天平托盘天平百分电子天平百分电子天平百分电子天平百分电子天平留意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中留意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中留意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中留意：无机大量母液中的各种物质在混合过程中有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解，有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解，有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解，有些离子易产生沉淀，应使每种物质先充分溶解，再进行混合，而且钙盐最终缓慢加入进去。再进行混合，而且钙盐最终缓慢加入进去。再进行混合，而且钙盐最终缓慢加入进去。再进行混合，而且钙盐最终缓慢加入进去。硼酸，硫酸铜，硼酸，

26、硫酸铜，硼酸，硫酸铜，硼酸，硫酸铜，硫酸锰，硫酸锌，硫酸锰，硫酸锌，硫酸锰，硫酸锌，硫酸锰，硫酸锌，氯化钴，钼酸钠，氯化钴，钼酸钠，氯化钴，钼酸钠，氯化钴，钼酸钠，碘化钾碘化钾碘化钾碘化钾万分电子天平万分电子天平万分电子天平万分电子天平B 无机微量母液（扩大100倍配1000ml）称量工具称量工具称量工具称量工具成分成分成分成分C 铁盐（扩大铁盐（扩大100倍倍1000ml）铁盐铁盐硫酸亚铁，硫酸亚铁，Na2-EDTA留意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它留意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它留意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它留意：铁盐选用硫酸亚铁而不用硫酸铁，是因为它溶

27、解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。溶解后易产生红色的氢氧化铁沉淀。在装有在装有在装有在装有800ml 800ml 蒸馏水的烧杯中加入蒸馏水的烧杯中加入蒸馏水的烧杯中加入蒸馏水的烧杯中加入2 2粒氢氧化钠。粒氢氧化钠。粒氢氧化钠。粒氢氧化钠。溶解后加入溶解后加入溶解后加入溶解后加入3.73g EDTA-Na23.73g EDTA-Na2，加热使其全部溶解，加热使其全部溶解，加热使其全部溶解，加热使其全部溶解，然后边搅拌边渐渐加入然后边搅拌边渐渐加入然后边搅拌边渐渐加入然后边搅拌边渐渐加入2.78g FeSO4.7H2O2.78g FeS

28、O4.7H2O直至全部直至全部直至全部直至全部溶解，冷却后定容至溶解，冷却后定容至溶解，冷却后定容至溶解，冷却后定容至1000ml1000ml，置于冰箱中备用。，置于冰箱中备用。，置于冰箱中备用。，置于冰箱中备用。D 有机物（扩大有机物（扩大50倍倍500ml）有机物有机物甘氨酸甘氨酸VB1VB6烟酸烟酸肌醇肌醇留意：有机物中的物质均接受电子天平称取。留意：有机物中的物质均接受电子天平称取。留意：有机物中的物质均接受电子天平称取。留意：有机物中的物质均接受电子天平称取。E 激素母液（常用的）激素母液（常用的）生长素生长素生长素生长素NAANAA，IBAIBA，2,4-D2,4-D，IAAIAA

29、细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素细胞分裂素6-BA6-BA，KTKT，GAGA，ZTZT留意：这些激素配制时，一般配成留意：这些激素配制时，一般配成留意：这些激素配制时，一般配成留意：这些激素配制时，一般配成0.2-1mg/ml0.2-1mg/ml，NAANAA、IBAIBA、IAAIAA一般可先用少量无水乙醇助溶。一般可先用少量无水乙醇助溶。一般可先用少量无水乙醇助溶。一般可先用少量无水乙醇助溶。2,4-D2,4-D也可用也可用也可用也可用0.1mol0.1molL L的的的的NaOHNaOH或或或或KOHKOH助溶，细胞助溶，细胞助溶，细胞助溶，细胞分裂素类一般先用少量分裂素类一般先用少量分

30、裂素类一般先用少量分裂素类一般先用少量0.1mol0.1molL L盐酸溶解后，再加盐酸溶解后，再加盐酸溶解后，再加盐酸溶解后，再加入温水冷却后定容。入温水冷却后定容。入温水冷却后定容。入温水冷却后定容。(6)母液的保存1)装瓶:将配制好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，在标签上注明母液名称，配制倍数，与配制日期。2）贮存：母液配好后放人冰箱内4低温保存，用时再按比例稀释。3 培育基的配制培育基的配制1)1)用具器材：用具器材：用具器材：用具器材：粗天平、塑料量杯、烧杯、量筒、粗天平、塑料量杯、烧杯、量筒、粗天平、塑料量杯、烧杯、量筒、粗天平、塑料量杯、烧杯、量筒、移液管、三角瓶、玻璃棒、药勺、移

31、液管、三角瓶、玻璃棒、药勺、移液管、三角瓶、玻璃棒、药勺、移液管、三角瓶、玻璃棒、药勺、pHpH试纸（）试纸（）试纸（）试纸（）/酸度计、橡皮吸球、吸水纸、羊皮纸等。酸度计、橡皮吸球、吸水纸、羊皮纸等。酸度计、橡皮吸球、吸水纸、羊皮纸等。酸度计、橡皮吸球、吸水纸、羊皮纸等。2)2)药品试剂：蒸馏水、蔗糖、琼脂、药品试剂：蒸馏水、蔗糖、琼脂、药品试剂：蒸馏水、蔗糖、琼脂、药品试剂：蒸馏水、蔗糖、琼脂、1mol/L 1mol/L NaOHNaOH、1mol/L HCl 1mol/L HCl、各种培育基母液、各种培育基母液、各种培育基母液、各种培育基母液3.1 3.1 试验用品试验用品试验用品试验用

32、品3.2 3.2 培育基配制（以培育基配制（以培育基配制（以培育基配制（以1L1L百合继代培育基为例）百合继代培育基为例）百合继代培育基为例）百合继代培育基为例）1)1)培育基配方：培育基配方：MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖+0.8%+0.8%琼脂琼脂琼脂琼脂2)2)配方成分计算：配方成分计算：配方成分计算：配方成分计算：大量元素（大量元素（大量元素（大量元素（扩大扩大扩大扩大1010倍配倍配倍配倍配1L1L）微量元素微量元素微量元素微量元素（扩大（扩大（扩大（扩大100100倍配倍配倍配倍配10

33、00ml1000ml）有机物有机物有机物有机物（扩大（扩大（扩大（扩大5050倍配倍配倍配倍配500ml500ml）铁盐铁盐铁盐铁盐（扩大（扩大（扩大（扩大100100倍配倍配倍配倍配1000ml1000ml）6-BA(0.5mg/ml)6-BA(0.5mg/ml)NAA(0.1mg/ml)NAA(0.1mg/ml)蔗糖蔗糖蔗糖蔗糖琼脂琼脂琼脂琼脂100ml100ml10ml10ml10ml10ml10ml10ml3ml3ml2ml2ml30g30g8g8g母液的稀释计算吸取量吸取量=须要配制培育基的体积须要配制培育基的体积X 须要配制浓度须要配制浓度 母液浓度母液浓度3)3)配制步骤配制步骤

34、配制步骤配制步骤其他准备其他准备加琼脂加琼脂第三节第三节 常用培育基的配方及其特点常用培育基的配方及其特点1培育基的种类培育基的种类1.1依据其态相不同分为依据其态相不同分为固体培育基：是指加凝固剂（如琼脂）的培育基。固体培育基：是指加凝固剂（如琼脂）的培育基。液体培育基：是指不加凝固剂的培育基。液体培育基：是指不加凝固剂的培育基。1.2依据培育物的培育过程分为依据培育物的培育过程分为初代培育基：是指用来第一次接种从植物体上分别初代培育基：是指用来第一次接种从植物体上分别下来的外植体的培育基。下来的外植体的培育基。继代培育基：是指用来接种继初代培育之后的培育继代培育基：是指用来接种继初代培育之

35、后的培育物的培育基。物的培育基。1.3依据其作用不同分为依据其作用不同分为诱导培育基、增殖培育基、生根培育基诱导培育基、增殖培育基、生根培育基1.4依据其养分水平不同分为依据其养分水平不同分为基本培育基：主要有基本培育基：主要有MS、White、B5、N6、改良改良MS、Heller、Nitsh、Miller、SH等等完全培育基：就是在基本培育基的基础上，完全培育基：就是在基本培育基的基础上，依据试验的不同须要，附加一些物质，如依据试验的不同须要，附加一些物质，如植物生长调整物质和其它困难有机附加物植物生长调整物质和其它困难有机附加物等。等。下面介绍几种基本培育基下面介绍几种基本培育基:基本培

36、育基基本培育基无机盐、离子无机盐、离子浓度高，浓度高，含高含高K、N，硝酸盐含量较，硝酸盐含量较高，含铵盐。高，含铵盐。养分丰富养分丰富加速合作愈伤组织和培加速合作愈伤组织和培育物生长育物生长1962年由年由Murashige和和Skoog为培育烟草细胞而设为培育烟草细胞而设计的。广泛地用于植物的计的。广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生器官、花药、细胞和原生质体培育，效果良好。有质体培育，效果良好。有些培育基是由它演化而来些培育基是由它演化而来的。的。MSMS培育基培育基MillerMiller培育基培育基B5培育基培育基SHSH培育基培育基N6培育基培育基KM-8P培育基培育基White

37、培育基培育基基本培育基基本培育基无机元素用量是无机元素用量是MS的的1/31/2微量种类少微量种类少无肌醇无肌醇MSMS培育基培育基MillerMiller培育基培育基B5培育基培育基SHSH培育基培育基N6培育基培育基KM-8P培育基培育基White培育基培育基基本培育基基本培育基无机盐量较低无机盐量较低运用广泛运用广泛适合生根培育、胚适合生根培育、胚胎培育等胎培育等提高了提高了MgSO4的浓度和增的浓度和增加了硼素。其特点是无机加了硼素。其特点是无机机盐数量较低，适于生根机盐数量较低，适于生根培育。培育。MSMS培育基培育基MillerMiller培育基培育基White培育基培育基SHSH

38、培育基培育基B5培育基培育基N6培育基培育基KM-8P培育基培育基基本培育基基本培育基含较低的铵，硝酸盐和含较低的铵，硝酸盐和盐酸硫胺素用量较高。盐酸硫胺素用量较高。适合双子叶植物，适合双子叶植物，尤其尤其木本植物组培。木本植物组培。1968年由年由Galmborg等为培等为培育大豆根细胞而设计的。育大豆根细胞而设计的。其主要特点是含有较低的其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培育物铵，这可能对不少培育物的生长有抑制作用。从实的生长有抑制作用。从实践得知有些植物在践得知有些植物在B5培育培育基上生长更适宜，如双子基上生长更适宜，如双子叶植物特殊是木本植物。叶植物特殊是木本植物。MSMS培育基

39、培育基MillerMiller培育基培育基SHSH培育基培育基B5培育基培育基N6培育基培育基KM-8P培育基培育基White培育基培育基基本培育基基本培育基特点与特点与B5相像，相像，硫酸铵改用磷酸二氢硫酸铵改用磷酸二氢铵。铵。无机盐浓度较高。无机盐浓度较高。MSMS培育基培育基MillerMiller培育基培育基SHSH培育基培育基B5培育基培育基N6培育基培育基KM-8P培育基培育基White培育基培育基基本培育基基本培育基成分简洁成分简洁硝酸钾和硫酸铵含量高硝酸钾和硫酸铵含量高适合花粉、花药培育适合花粉、花药培育1974年朱至清等为水稻等年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培育而设禾谷类作

40、物花药培育而设计的。其特点是成分较简计的。其特点是成分较简洁，洁，KNO3和和（NH4）2SO4含量高。在含量高。在国内已广泛应用于小麦、国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培水稻及其他植物的花药培育和其他组织培育。育和其他组织培育。MSMS培育基培育基MillerMiller培育基培育基SHSH培育基培育基B5培育基培育基N6N6培育培育基基KM-8P培育基培育基White培育基培育基基本培育基基本培育基有机成分困难有机成分困难用于原生质体培育用于原生质体培育(包括包括原生质融合的培育原生质融合的培育)是是1974年为原生质体培育年为原生质体培育而设计的。其特点是有机而设计的。其特点是

41、有机成分较困难，它包括了全成分较困难，它包括了全部的单糖和维生素，广泛部的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培育。用于原生质融合的培育。MSMS培育基培育基MillerMiller培育基培育基SHSH培育基培育基B5培育基培育基N6培育基培育基KM-8P培育基培育基White培育基培育基依培育基配方中含盐量多少可将目前培育基分为依培育基配方中含盐量多少可将目前培育基分为4类：类：*含盐量较大的培育基，如含盐量较大的培育基，如MS培育基以及改良的培育基以及改良的MS培育基，含较高浓度的硝酸盐、铵盐和钾盐，微量培育基，含较高浓度的硝酸盐、铵盐和钾盐，微量元素特别全，元素特别全，LS、BL、ER培育

42、基也属于。培育基也属于。*硝酸钾含量较高的培育基，如硝酸钾含量较高的培育基，如B5、N6、SH，盐浓，盐浓度也很高，其中度也很高，其中NH+4和和PO-34是由是由NH4H2PO4供应。供应。*含盐量中等的培育基，如含盐量中等的培育基，如H培育基，大量元素为培育基，大量元素为MS的的1/2，微量元素种类削减，但含量增加，维生素种，微量元素种类削减，但含量增加，维生素种类比类比MS的多，的多，*低盐浓度的培育基，低盐浓度的培育基，White，WS和和HE培育基。培育基。n以上以上4种类培育基中，前两种培育基较适合愈种类培育基中，前两种培育基较适合愈伤组织诱导和细胞培育，但选用那类培育基，伤组织诱导和细胞培育，但选用那类培育基，还应依植物种类、基因型、外植体等而定；还应依植物种类、基因型、外植体等而定；n后两类培育基则有利于根的形成。后两类培育基则有利于根的形成。n诱导愈伤组织常用的培育基为诱导愈伤组织常用的培育基为MS和和B5。n高盐浓度的培育基可能对培育过程中愈伤组织高盐浓度的培育基可能对培育过程中愈伤组织数量及鲜重增加有益。数量及鲜重增加有益。