土壤中分解尿素的细菌的分离与计数..优秀PPT.ppt

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1、课题课题2 2土壤中分解尿素的细菌的土壤中分解尿素的细菌的分别与计数分别与计数专题专题2 2微生物的培育与应用微生物的培育与应用一、课题背景一、课题背景1 1、尿素尿素的利用的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能干脆被尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能干脆被农作物吸取。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后农作物吸取。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。才能被植物利用。2 2、细菌利用尿素的缘由、细菌利用尿素的缘由 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶脲酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+H+H2 2OO+CO+CO2 2NHNH3 33

2、 3、常见的分解尿素的微生物、常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌。某些真菌和放线菌。4 4、课题目的、课题目的从土壤中分别出能够分解尿素的细菌从土壤中分别出能够分解尿素的细菌统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细菌统计每克土壤样品中原委含有多少这样的细菌一一.探讨思路探讨思路.筛选菌株筛选菌株.统计菌落数目统计菌落数目.设置比照设置比照 1 1、实例：、实例：启示：找寻目的菌种时要依据它对生存环境的启示：找寻目的菌种时要依据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去找寻

3、。要求，到相应的环境中去找寻。缘由：因为热泉温度缘由：因为热泉温度7070800C800C，淘汰了绝大，淘汰了绝大多多 数微生物只有数微生物只有TaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。DNADNA多聚酶链式反应是多聚酶链式反应是一种在体外将少量一种在体外将少量DNADNA大量复制的技术，此项大量复制的技术，此项技术要求运用耐高温技术要求运用耐高温（930C930C）的）的DNADNA聚合聚合酶。酶。要分别一种微生物，必需依据该微生物的特点，包要分别一种微生物，必需依据该微生物的特点，包要分别一种微生物，必需依据该微生物的特点，包要分别一种微生物，必需依据该微生物的特点，包括养分、生理、生长

4、条件等；括养分、生理、生长条件等；括养分、生理、生长条件等；括养分、生理、生长条件等；方法：方法：方法：方法：抑制大多数微生物不能生长抑制大多数微生物不能生长抑制大多数微生物不能生长抑制大多数微生物不能生长造成有利于该菌生长的环境造成有利于该菌生长的环境造成有利于该菌生长的环境造成有利于该菌生长的环境结果：培育确定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀结果：培育确定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀结果：培育确定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀结果：培育确定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培育分别。释等方法对它进行纯化培育分别。释等方法对它进行纯化培育分别。释等方法对它进行

5、纯化培育分别。2、试验室中微生物的筛选原理：、试验室中微生物的筛选原理：人为供应有利于目的菌株生长的条件人为供应有利于目的菌株生长的条件人为供应有利于目的菌株生长的条件人为供应有利于目的菌株生长的条件(包括养分、温包括养分、温包括养分、温包括养分、温度、度、度、度、pHpH等等等等)，同时抑制或阻挡其他微生物生长。，同时抑制或阻挡其他微生物生长。，同时抑制或阻挡其他微生物生长。，同时抑制或阻挡其他微生物生长。15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO447H7H2 2OO2.1g2.1gNaHNaH2 2POPO4 41

6、.4g1.4gKHKH2 2POPO4 43 3、土壤中分解尿素的细菌的分别与计数所需培、土壤中分解尿素的细菌的分别与计数所需培育基：育基：从物理性质看此培育基属于哪类？从物理性质看此培育基属于哪类？固体培育基固体培育基在此培育基中哪些作为碳源、氮源？在此培育基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素氮源：尿素思索思索2该培育基对微生物该培育基对微生物 （具有，（具有，不具有）选择作用。假如具有，其选择不具有）选择作用。假如具有，其选择机制是机制是 。具有具有只有能够以尿素作只有能够以尿素作为氮源的微生物才为氮源的微生物才能在该培育基上生能在该培育基上生长长 培育

7、基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能培育基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能培育基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能培育基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培育基就能够选择出分解尿

8、素的微生物。制，所以用此培育基就能够选择出分解尿素的微生物。制，所以用此培育基就能够选择出分解尿素的微生物。制，所以用此培育基就能够选择出分解尿素的微生物。4 4、培育基选择分解尿素的微生物的原理、培育基选择分解尿素的微生物的原理1 1、显微镜干脆计数：、显微镜干脆计数：利用血球计数板，在显微镜下计算确定容积利用血球计数板，在显微镜下计算确定容积里样品中微生物的数量。里样品中微生物的数量。（二）（二）.统计菌落数目：统计菌落数目：不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；须要相对高的细菌浓度；须要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以视察；个

9、体小的细菌在显微镜下难以视察；缺点缺点（比例计数法）（比例计数法）待测样品待测样品等量的已知含量的红细胞等量的已知含量的红细胞 混匀混匀涂抹涂抹测定：测定：红细胞数目红细胞数目细菌数目细菌数目计算单位体积内的细菌数目计算单位体积内的细菌数目 将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按将含已知数目的红细胞液体与待测的菌液按1：1匀整混合，在显微镜下数出各自的数目，然后求菌液匀整混合，在显微镜下数出各自的数目，然后求菌液中的细胞数目。中的细胞数目。细菌细菌红细胞红细胞【补充】显微镜干脆计数是测定微生物的方法。【补充】显微镜干脆计数是测定微生物的方法。举例：已知红细胞浓度为举例：已知红细胞浓度为M个个/

10、mL，从体，从体积为积为N mL的大肠杆菌培育液中取出大杆菌液的大肠杆菌培育液中取出大杆菌液与红细胞液等量匀整混合后，涂片，染色，与红细胞液等量匀整混合后，涂片，染色，镜检。在同一视野中发出有红细胞镜检。在同一视野中发出有红细胞W个，大个，大肠杆菌肠杆菌Y个，求个，求NmL大肠杆培育液中大肠杆大肠杆培育液中大肠杆菌的个数菌的个数X是多少？是多少？XNM YW(个个)视察到的红细胞平均数视察到的红细胞平均数/视察到的细菌平均数视察到的细菌平均数红细胞含量红细胞含量/细菌含量细菌含量 公公 式式 2.2.间接计数法（活菌计数法）间接计数法（活菌计数法）原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培原理：在

11、稀释度足够高时，微生物在固体培育基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖育基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。常用方法：稀释涂布平板法。常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M(CV)M其中，其中，C C代表某一稀释度下平板上生长的平代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，均菌落数，V V代表涂布平板时所用的稀释液代表涂布平板时所用的稀释液的体积的体积(ml)(ml)，M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。留意事项留意事项为了保证结果精确，一般选择菌落为了保证结果精确，一般选择菌落数在数

12、在3030030300的平板上进行计数。的平板上进行计数。为使结果接近真实值可将同一稀释为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培育计算出菌落平均数。涂布，培育计算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低。低。恰当的稀释度是成功地统计菌落数恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键，一般以三个稀释度中的其目的关键，一般以三个稀释度中的其次个稀释度所出现的平均菌落数在次个稀释度所出现的平均菌落数在5050个左右为最好。个左右为最好。如何从平板上的菌落数推想出每克如何从平板上的菌落数推想出每克样品中的菌落数

13、？样品中的菌落数？统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算值，然后按课本旁栏的公式进行计算教材教材P22计数法计数法干脆计数法、干脆计数法、平板计数法、平板计数法、比浊法、比浊法、膜过滤法膜过滤法实例分析实例分析P22 你认为哪个同学的结果更接近真实你认为哪个同学的结果更接近真实值？值？你认为这两位同学的试验须要改进你认为这两位同学的试验须要改进吗？假如须要，如何改进？吗？假如须要，如何改进？实例分析实例分析P22 第一同学只涂布了一个平板，没有设置第一同学

14、只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有劝服力。重复组，因此结果不具有劝服力。其次位同学考虑到设置重复组的问题，其次位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中涂布了三个平板，但是其中1个平板的计个平板的计数结果与数结果与2个相差太远，说明在操作过程个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简洁地中可能出现了错误，因此，不能简洁地将将3个平板的计数值用来求平均值。个平板的计数值用来求平均值。设置比照的主要目的是解除试验组中非测试设置比照的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度。因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度。（三）（三）

15、.设置比照：设置比照：实例：教材实例：教材P23P23 缘缘由由：土土样样不不同同，培培育育基基污污染染或或操操作作失失误误(或者是混入了其他的含氮物质或者是混入了其他的含氮物质)小结：通过这个事例可以看出，试验结果要有小结：通过这个事例可以看出，试验结果要有劝服力，比照的设置是必不行少的。劝服力，比照的设置是必不行少的。方案一：由其他同学用与方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行试验同学相同土样进行试验 方案二：将方案二：将A同学配制的培育基在不加土样的状同学配制的培育基在不加土样的状况下进行培育，作为空白比照，以证明培育基是况下进行培育，作为空白比照，以证明培育基是否受到污染。否受到污染

16、。结果预料：假如结果与结果预料：假如结果与A同学一样，则证明同学一样，则证明A无误；无误；假如结果不同，则证明假如结果不同，则证明A同学存在操作失误或培育同学存在操作失误或培育基的配制有问题。基的配制有问题。菌落计数菌落计数配制土壤配制土壤溶液溶液系列稀释系列稀释涂布平板涂布平板与培养与培养依据图示依据图示27填写以下试验流程：填写以下试验流程：试验设计：试验设计：试验的具体操作试验的具体操作 .土壤取样土壤取样 从肥沃、潮湿的土壤中取样。从肥沃、潮湿的土壤中取样。先铲去表层土先铲去表层土3cm3cm左右，再取样，左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。将样品装入事先准备好的信封中。取土样

17、用的小铁铲和盛土样取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在运用前都要灭菌。的的信封在运用前都要灭菌。.制备培育基：制备培育基：制备以尿素为唯一氮源的选择培制备以尿素为唯一氮源的选择培育基。育基。准备牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基将菌准备牛肉膏蛋白胨培育基和选择培育基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培育基上生液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培育基上生长的菌落数目应明显多于选择培育基上的数目，长的菌落数目应明显多于选择培育基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培育基可以作为比照，用来因此，牛肉膏蛋白胨培育基可以作为比照，用来推断选择培育基是否起到了选择作用。由于初次推断选择培育基是否起到了选择作用。由于初次

18、试验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一试验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为个较为宽泛的范围：稀释倍数为103103107107。每个。每个稀释度下须要稀释度下须要3 3个选择培育基，个选择培育基，1 1个牛肉膏蛋白胨个牛肉膏蛋白胨培育基，因此共须要培育基，因此共须要1515个选择培育基，个选择培育基，5 5个牛肉个牛肉膏蛋白胨培育基。此外，还须要准备膏蛋白胨培育基。此外，还须要准备8 8个灭菌的试个灭菌的试管和管和1 1个灭菌的移液管。个灭菌的移液管。应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g10g10g。在稀释土

19、壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行分别不同的微生物接受不同的稀释度分别不同的微生物接受不同的稀释度缘由：不同微生物在土壤中含量不同缘由：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在目的：保证获得菌落数在3030300300之间、适于计之间、适于计数的平板数的平板 三三 样样品品的稀释的稀释 由于初次试验，对于稀释的范围没有把握，因由于初次试验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为103

20、103107107。每个稀释度下须要。每个稀释度下须要3 3个选择培育基，个选择培育基，1 1个牛个牛肉膏蛋白胨培育基，因此共须要肉膏蛋白胨培育基，因此共须要1515个选择培育基，个选择培育基，5 5个牛肉膏蛋白胨培育基。此外，还须要准备个牛肉膏蛋白胨培育基。此外，还须要准备8 8个个灭菌的试管和灭菌的试管和1 1个灭菌的移液管。个灭菌的移液管。为为什什么么分分别别不不同同的的微微生生物物要要接接受受不不同同的的稀稀释释度度？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能能分分解解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？缘缘由由：土土

21、壤壤中中各各类类微微生生物物的的数数量量（单单位位：株株/kg/kg）是是不不同同的的。例例如如在在干干旱旱土土壤壤中中的的上上层层样样本本中中：好好氧氧及及兼兼性性厌厌氧氧细细菌菌数数约约为为2 2 185185万万，放放线线菌菌数数约约为为477477万万，霉霉菌菌数数约约为为23.123.1万。万。结结论论：为为获获得得不不同同类类型型的的微微生生物物，就就须须要要按按不不同同的的稀稀释释度度进进行行分分别别，同同时时还还应应当当有有针对性地供应选择培育的条件。针对性地供应选择培育的条件。.取样涂布取样涂布试验时要试验时要对培育皿作对培育皿作好标记。注好标记。注明培育基类明培育基类型、培

22、育时型、培育时间、稀释度、间、稀释度、培育物等。培育物等。假如得到了假如得到了2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，假犹如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，数，假犹如一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，须要重新试验。表明试验不精确，须要重新试验。.微生物的培育与视察并计数微生物的培育与视察并计数 在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h24h统计一次菌落数目。统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以

23、防止 因培育时间不足而导致遗漏菌落的数目。因培育时间不足而导致遗漏菌落的数目。培育不同微生物往往须要不同培育温度。培育不同微生物往往须要不同培育温度。细菌：细菌：30303737培育培育1 12d2d 放线菌：放线菌：25252828培育培育5 57d7d 霉菌：霉菌：25252828的温度下培育的温度下培育3 34d4d。当菌落数目稳定时，选取菌落数在当菌落数目稳定时，选取菌落数在3030300300的平板进行计数。在同一稀释度下，的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对至少对3 3个平板进行重复计数，然后求出个平板进行重复计数，然后求出平均值，并依据平板所对应的稀释度计算平均值，并依据平板所

24、对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。出样品中细菌的数目。微微生生物物的的培培育育与视察与视察 关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小

25、、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。地等等，都是区分细菌的重要手段。思索在探讨未知微生物时务必规范操作，思索在探讨未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，试验后确定要洗手。以防被致病微生物感染，试验后确定要洗手。（六）鉴定：筛选后必鉴定（六）鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培育基：加入某种指示剂或化学鉴别培育基：加入某种指示剂或化学药品，不影响微生物的生存药品，不影响微生物的生存1 1、酚红培育基：、酚红培育基：鉴定分解尿素的细菌

26、。鉴定分解尿素的细菌。原理：脲酶催化尿素分解成氨原理：脲酶催化尿素分解成氨培育基碱性增加培育基碱性增加 酚红变红酚红变红脲脲酶阳性酶阳性2 2、伊红、伊红美蓝培育基：美蓝培育基：鉴定大肠杆菌。鉴定大肠杆菌。原理：代谢产物与伊红原理：代谢产物与伊红美蓝美蓝结合结合 菌落呈深紫色并带有金属光菌落呈深紫色并带有金属光泽。泽。伊红伊红美蓝培育基是鉴别培育基，可以用来美蓝培育基是鉴别培育基，可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢检测自来水中的大肠杆菌是否超标，因为的代谢产物与伊红产物与伊红美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有美蓝结合，使菌落呈深紫色并带有金属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有金

27、属光泽，使大肠杆菌的菌落显示出来，并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。例如：鉴别大肠杆菌培育基例如：鉴别大肠杆菌培育基大肠杆菌呈大肠杆菌呈 黑色中心黑色中心,有或无金属光泽有或无金属光泽大肠杆菌在伊红美蓝琼脂大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 三、操作提示三、操作提示 无菌操作无菌操作 做好标记做好标记 制定支配制定支配 课题成果与评价课题成果与评价 （一）培育物中是否有杂菌污染以（一）培育物中是否有杂菌污染以及选择培育基是否筛选出菌落及选择培育基是否筛选出菌落 比照的培育皿在培育过程中没有菌比照的培育皿在培育过

28、程中没有菌落生长，说明培育基没有被杂菌污染。落生长，说明培育基没有被杂菌污染。牛肉膏培育基的菌落数目明显大于选择牛肉膏培育基的菌落数目明显大于选择培育基的数目，说明选择培育基已筛选培育基的数目，说明选择培育基已筛选出一些菌落。出一些菌落。假如学生选取的是同一种土样，统计的结假如学生选取的是同一种土样，统计的结果应当接近。假如结果相差太远，须要进一步果应当接近。假如结果相差太远，须要进一步分析产生差异的缘由。分析产生差异的缘由。（二）样品的稀释操作是否成功（二）样品的稀释操作是否成功 假如得到了假如得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操

29、作比较成功，并能够的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。进行菌落的计数。（三）重复组的结果是否一样（三）重复组的结果是否一样本课题学问小结本课题学问小结:课后练习课后练习2.提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生提示：反刍动物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后瘤胃中的微生物多为厌氧菌，接触空气后会死亡，因此分别其中能分解尿素的微生会死亡，因此分别其中能分解尿素的微生物除了须要准备选择培育基外，还应参照物除了须要准备选择培育基外，还应参照厌氧菌的培育方法进行试验设计。厌氧菌的培育方法进行

30、试验设计。六、例题解析六、例题解析 例例1 1对细菌群体生长规律测定的正确的表述是对细菌群体生长规律测定的正确的表述是A A在液体培育基上进行在液体培育基上进行 B B至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C C接种一个细菌接种一个细菌 DD刚好补充消耗的养分物质刚好补充消耗的养分物质 解析：细菌群体生长规律的测定是人们在确定条件下进行的。解析：细菌群体生长规律的测定是人们在确定条件下进行的。这些条件是：一种细菌、恒定容积的培育基，液体培育基、定时这些条件是：一种细菌、恒定容积的培育基，液体培育基、定时测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细菌的生长规律。测测定细菌总数。在这些条件下，才能测定出细

31、菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变更规律表达微生物的生长；定时只能用一种细菌的子细胞群体的变更规律表达微生物的生长；恒定容积是给微生物供应确定的生存环境；液体培育基才能通过恒定容积是给微生物供应确定的生存环境；液体培育基才能通过样品推想细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能样品推想细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证确定的接种量。测定一种微生物的生长规律。在接种时，要保证确定的接种量。答案：答案：A A1.1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）A.A.在液体培育基上进行在

32、液体培育基上进行 B.B.至少接种一种细菌至少接种一种细菌 C.C.接种一个细菌接种一个细菌 D.D.刚好补充消耗的养分物质刚好补充消耗的养分物质 2.2.运用选择培育基的目的是（运用选择培育基的目的是（）A.A.培育细菌培育细菌 B.B.培育真菌培育真菌 C.C.使须要的微生物大量繁殖使须要的微生物大量繁殖 D.D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区分表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区分3.3.能合成脲酶的微生物所须要的碳源和氮源分别是能合成脲酶的微生物所须要的碳源和氮源分别是()A.CO2 A.CO2和和N2 B.N2 B.葡萄糖和葡萄糖和NH3NH3 C.CO2 C.CO2和

33、尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素实践训练实践训练A A C CD D4.4.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分别到耐高温的度热泉中分别到耐高温的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作为该样品菌落数的估计值作为该样品菌落数的估计值 C.C.设置比照试验的主要目的是解除试验组中非测试因设置比照试验的主要目的是解除试验组中非测试因素对试验结果的影响，提高试验结果的可信度素对试验结果

34、的影响，提高试验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。种类最多。5.5.为培育和分别出酵母菌并淘汰杂菌，常在培育基中加为培育和分别出酵母菌并淘汰杂菌，常在培育基中加入（）入（）A.A.较多的氮源物质较多的氮源物质 B.B.较多的碳源物质较多的碳源物质 C.C.青霉素类药物青霉素类药物 D.D.高浓度食盐高浓度食盐B BC C（09，宁夏，宁夏，15分）分）（1）在大肠杆菌培育过程中，除考虑养分条件外，还要考虑）在大肠杆菌培育过程中，除考虑养分条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简洁、变

35、异类型简洁和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简洁、变异类型简洁选择、选择、_、_等优点，因此常作为遗传学探讨的试验材料。等优点，因此常作为遗传学探讨的试验材料。（2）在微生物培育操作过程中，为防止杂菌污染，需对培育基和培育皿进）在微生物培育操作过程中，为防止杂菌污染，需对培育基和培育皿进行行_（消毒、灭菌）；操作者的双手须要进行清洗和（消毒、灭菌）；操作者的双手须要进行清洗和_；静止空；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其缘由是紫外线能使蛋白质变性，还能气中的细菌可用紫外线杀灭，其缘由是紫外线能使蛋白质变性，还能_。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更）若用

36、稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形态、大小等菌落特征对细）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形态、大小等菌落特征对细菌进行初步的菌进行初步的_。（5）培育大肠杆菌时，在接种前须要检测培育基是否被污染。对于固体培）培育大肠杆菌时，在接种前须要检测培育基是否被污染。对于固体培育基应接受的检测方法是育基应接受的检测方法是_。（6）若用大肠杆菌进行试验，运用过的培育基及其培育物必需经过）若用大肠杆菌进行试验，运用

37、过的培育基及其培育物必需经过_处理后才能丢弃，以防止培育物的扩散。处理后才能丢弃，以防止培育物的扩散。答案答案:（1）温度）温度 酸碱度酸碱度 易培育易培育 生活周期短生活周期短 （2）灭菌）灭菌 消毒消毒 损伤损伤DNA的结构的结构 （3）比例合适）比例合适 （4）鉴定）鉴定(或分类或分类)（5）将未接种的培育基在适宜的温度下放置适宜的时间）将未接种的培育基在适宜的温度下放置适宜的时间,视察培育基上是否有菌落产生视察培育基上是否有菌落产生.（6）灭菌）灭菌例例3 3（20052005年江苏）抗生素作为治疗细菌感年江苏）抗生素作为治疗细菌感染的药物，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业染的药物

38、，其高效性和巨大的经济价值使抗生素工业经久不衰。其中青霉素的发觉和应用具有划时代的意经久不衰。其中青霉素的发觉和应用具有划时代的意义。义。青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型青霉素发酵产生青霉素。青霉菌的新陈代谢类型是是 ，青霉素是青霉菌的，青霉素是青霉菌的 代谢产物。代谢产物。在生产和科研中，常选用处于在生产和科研中，常选用处于 期的青霉菌作期的青霉菌作为菌种或探讨材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，为菌种或探讨材料，因为此时的青霉菌代谢旺盛，和和 比较稳定。比较稳定。对青霉菌菌体生长状况的测定：取确定体积的发对青霉菌菌体生长状况的测定：取确定体积的发酵液，经离心分别、反复洗涤后，酵液，经

39、离心分别、反复洗涤后，再计算，再计算发酵罐中菌体的总重量。发酵罐中菌体的总重量。异养需氧型异养需氧型次级次级对数对数个体的形态个体的形态生理特性生理特性称菌体的湿重称菌体的湿重（称烘干后的重量）（称烘干后的重量）解析：解析：青霉菌属于真菌，其代谢类型应为异养需氧型，青霉菌属于真菌，其代谢类型应为异养需氧型，而青霉素作为它的代谢产物，并不是它生长、繁殖而青霉素作为它的代谢产物，并不是它生长、繁殖所必需的，所以青霉素应属于次级代谢产物。在测所必需的，所以青霉素应属于次级代谢产物。在测定培育基上青霉菌菌体的生长状况时，常用的方法定培育基上青霉菌菌体的生长状况时，常用的方法有两种：一种是测量青霉菌的细胞数目，另一种是有两种：一种是测量青霉菌的细胞数目，另一种是测重量，取确定体积的发酵液，经离心分别、反复测重量，取确定体积的发酵液，经离心分别、反复洗涤后，称菌体的湿重，或烘干后称干重，再由此洗涤后，称菌体的湿重，或烘干后称干重，再由此计算出其中的细胞总重量。在细菌生长的四个主要计算出其中的细胞总重量。在细菌生长的四个主要时期中，因为处于对数期的细菌代谢旺盛，个体的时期中，因为处于对数期的细菌代谢旺盛，个体的形态和生理特性比较稳定，常作为生产用的菌种和形态和生理特性比较稳定，常作为生产用的菌种和科研的材料。科研的材料。