实验动物的生理病理检测.ppt
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1、试验动物的生理病理检测 第一节第一节 一般体征的检查与测量方法一般体征的检查与测量方法 一、一、体重的测量方法体重的测量方法动物体重借助称量仪器测量动物体重借助称量仪器测量 小鼠、大鼠:称重可用带游码的一般天平或电小鼠、大鼠:称重可用带游码的一般天平或电 子秤称重。子秤称重。兔、豚鼠:可干脆放在婴儿秤上称重,从婴儿兔、豚鼠:可干脆放在婴儿秤上称重,从婴儿 秤圆形刻度盘上读取动物体重。秤圆形刻度盘上读取动物体重。犬:经训练后可干脆放在磅秤上称重。未经驯犬:经训练后可干脆放在磅秤上称重。未经驯 服的犬,先将犬嘴绑好,由试验员把犬抱服的犬,先将犬嘴绑好,由试验员把犬抱 起站在磅秤上称重,登记读数,减
2、去试验起站在磅秤上称重,登记读数,减去试验 员体重,即为动物体重。员体重,即为动物体重。二、体温的测定方法 动物体温测定是动物试验中最常用的检测指标之一。在测定前应先固定好动物。一般测大鼠或小鼠体温时,左手带上布手套,将鼠抓起,并将鼠固定于试验者手心,同时用环指和小指把鼠尾固定;兔则可用左臂夹住兔体,左手提起尾巴,犬可固定在台上,然后右手持头瑞涂上少许凡士林的肛表,由肛门插入直肠确定深度。测量时间3min。测定体温除了用肛表外,还可用半导体点温度计可马上从温度表上读取温度数。各种成年动物的正常体温各种成年动物的正常体温动物种类体温变动范围()平均体温()动物种类体温变动范围()平均体温()猿猴
3、 38.3-38.9 38.6大鼠 38.5-39.539.0犬38.5-39.5 39.0小鼠 37.0-39.038.0猫38.0-39.5 38.7鸡41.6-41.841.7兔38.5-39.5 39.0鸽41.5-42.542.0豚鼠 37.8-39.5 38.6猪38.0-40.039.0三、脉搏的检查方法 检查脉搏较为重要,可以依据脉搏频率和性质,推断动物心脏和血液循环状态以诊断动物的疾病及判定其预后。检查犬、猫、兔等较大动物的脉搏时,先将动物略加固定,待其安静后,用右手伸入动物股部内侧,食指和中指压于血管上左右滑动,可感觉到血管象富有弹性的橡皮管在指下滑动。按脉的大小、强弱和软
4、硬,分别施以轻压、中压和重压,体会脉搏的性质和节律。小动物的脉搏可干脆在动物左侧胸部用手触及心跳最明显处,计数确定时间,算出每分钟心跳次数。四、呼吸频率的测定方法 动物呼吸频率和呼吸深度的变更是试验时常见的症状之一,对阐明药物作用的机制具有重要意义。因此在试验前后必需留意检查动物的呼吸节律、频率、深度的变更。这些变更可标记出呼吸器官的功能状态。频而表浅的呼吸是肺通气量不足的症状。动物呼吸频率的测定方法特别简洁:首先使动物处于相对安静状态,以肉眼视察并记录呼吸的次数,一般要求记录1min的呼吸次数。其次节其次节 血液及造血功能常用血液及造血功能常用 指标的检查方法指标的检查方法一、血液常用指标的
5、检查(一)红细胞计数 动物红细胞计数可用一般的血细胞计数器,也可用光电比浊法。方法(试管法):用血红蛋白吸管吸取静脉血20mm3,挤入盛有4mL红细胞 稀释液的华氏小试管中摇匀,滴入计数池,静置3min,在高 倍镜下数中心大方格中的5个中方格中红细胞数量,相加,计算(5格的总和10000即为每1/2mm3 内的红细胞数)。(二二)白细胞计数白细胞计数 与红细胞计数一样,可用一般的血细胞计数器,也可用电子血细胞计数机计数。计数方法:用血红蛋白吸管吸取动物静脉血至20mm3处,马上挤入盛有0.4ml白细胞稀释液的小试管内,充分摇匀,将混悬液滴一小滴入计数池,静置3min,在低倍镜下数四角4个大方格
6、的白细胞数,计算(4格白细胞总数 50=1mm3 的白细胞总数。(三三)白细胞分类计数白细胞分类计数 采血采血 推片推片 干燥干燥 染色染色 计数计数形态鉴别:(1)嗜中性粒细胞:)嗜中性粒细胞:10-12um,有嗜中性颗粒。(2)嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞:略大于嗜中性粒细胞,颗粒大,位于核外,粉红色,核明显,常分两叶。(3)嗜碱性粒细胞:)嗜碱性粒细胞:略大于嗜中性粒细胞,颗粒粗大压在核上,呈紫色,核不明显。(4)淋巴细胞:)淋巴细胞:8-15um,一般圆的多,核偏一边,一般圆的多,核偏一边,核染色质排列成斑块状,较致密。核与胞浆比例为核染色质排列成斑块状,较致密。核与胞浆比例为9:1或或8
7、:2。胞浆呈浅蓝色,有时有灰青颗粒。胞浆呈浅蓝色,有时有灰青颗粒。核的形态以圆形最多。核的形态以圆形最多。(5)单核细胞:)单核细胞:15-20um,胞浆浅淡,核肾形多有,胞浆浅淡,核肾形多有压迹核染色质疏松,核两端常切断胞浆。压迹核染色质疏松,核两端常切断胞浆。(四四)血小板计数血小板计数 计数方法:计数方法:(1)小试管内加血小板稀释液小试管内加血小板稀释液0.4mL,取动物静脉血,取动物静脉血20mm3,快速挤于稀释液内,马上充分摇匀。,快速挤于稀释液内,马上充分摇匀。(2)放置放置410min,待溶液呈透亮红色,说明红细胞已,待溶液呈透亮红色,说明红细胞已经充分溶解,充分摇匀,取经充分
8、溶解,充分摇匀,取l小滴加入计数池。小滴加入计数池。(3)放置放置10一一15min,待血小板完全下沉后,先将中心大,待血小板完全下沉后,先将中心大方格移至低倍镜视野内,再转以高倍镜,数方格移至低倍镜视野内,再转以高倍镜,数5个中方格个中方格内的血小板数。内的血小板数。(4)血小板大小形态不一样,但均呈折光的发亮淡蓝色小血小板大小形态不一样,但均呈折光的发亮淡蓝色小点,大小约红细胞的点,大小约红细胞的1712,呈不规则圆形或长,呈不规则圆形或长圆形。在计数时必需来回扭动显微镜微调,不要遗漏计圆形。在计数时必需来回扭动显微镜微调,不要遗漏计数。数。(5)计算:计算:5个中方格的总和个中方格的总和
9、l 000=1mm3血液的血小血液的血小板数。板数。(五五)血细胞比容容量及红细胞血细胞比容容量及红细胞 降率降率(血沉血沉)测定测定 1血细胞比容容量测定血细胞比容容量测定 常用Wintrobe测定法:测定时,以EDTA二钠作为抗凝剂,5mL静脉血加1滴EDTA二钠,以细而长的吸管吸取抗凝血,插入Wintrobe管底部,自上而下轻轻地把血液注入至刻度10处,不能夹有气泡,在校准过的离心机内以3000rmin的速度离心30min,压紧的红细胞的高度(mm)即为血细胞比容容量数值,常以百分率表示。2红细胞沉降率的测定红细胞沉降率的测定 以干燥草酸钾和草酸铵或EDTA二钠作为抗凝剂,将抗凝血加入W
10、introbe管内到刻度10处,垂直放置,记录1h红细胞沉降的毫米数。测定时应在2227之间的室温下进行。二、造血功能常用指标的检查 1骨骨髓髓细细胞胞计计数数 将小鼠颈椎脱位处死,取l根股骨,用10mL 3醋酸溶液冲出骨髓细胞,在血细胞计数器上计数4个大方格的细胞数,所得细胞数乘以2.5X100000,即为l根股骨中骨髓有核细胞数。2骨骨髓髓细细胞胞分分类类 将小鼠解剖后,取l或2节胸骨作骨髓涂片,经甲醇固定后,用瑞氏或姬姆染液染色:分类计数500个骨髓有核细胞。3骨髓粒细胞分裂指数骨髓粒细胞分裂指数 小鼠腹腔注射0.1mL(50ug)秋水仙碱溶液,5h后,取作骨髓涂片,经甲醇固定,用瑞氏或
11、姬姆染液染色,计数每1000个粒细胞中分裂的粒细胞数。4白细胞计数和分类白细胞计数和分类 切开小鼠腹股沟,切断股动脉,取0.02mL全血加在15.9mL的生理盐水中,加入0.1mL1%皂素溶解红细胞,利用电子血细胞计计数白细胞。同时取1滴全血作涂片,经甲醇固定后,用瑞氏或姬姆染液染色,分类计数100个白细胞。5白白体体在在脾脾脏脏和和骨骨髓髓中中的的掺掺人人试试验验 每每只只小小鼠鼠腹腹腔腔注注射射含含有有59Fe的的枸枸橼橼酸酸盐盐缓缓冲冲液液0.2mL(pH6.1),6h后后取取出出脾脾脏脏和和两两根根骰骰骨骨,分分别别置置于于玻玻璃璃胶胶布布内内,应应用用Fricarb 1700型定标器
12、测定放射性强度。型定标器测定放射性强度。6白白体体在在四四周周血血细细胞胞中中的的掺掺人人试试验验 每每只只小小鼠鼠腹腹腔腔注注入入含含有有59Fe的的枸枸橼橼酸酸盐盐缓缓冲冲液液0.2mL(pH6.1),3d后后切切开开股股动动脉脉,取取全全血血02mL滴滴人人脱脱脂脂棉棉球球内内,用用玻璃胶布包好后,测定放射性强度。玻璃胶布包好后,测定放射性强度。73H胸胸腺腺嘧嘧啶啶核核苷苷的的掺掺人人试试验验 小鼠腹腔注入1mL3HTdR,2h后取出脾脏,用生理盐水冲出股骨和胫骨中的骨髓细胞,分别测定DNA含量和放射性强度。8胸胸腺腺和和脾脾脏脏重重量量测测定定 动物活杀后取出脾脏和胸腺,用扭力天平称
13、重,分别计算出占动物体重的百分比。脾脏占体重的百分比反映动物骨髓外造血功能,正常小鼠脾脏占体重的181左右。第三节第三节 血压的测定与记录方法血压的测定与记录方法 一、干脆描记法 动物血压干脆描记法是动物试验中最常用的方法,将套管干脆插入动物动脉或静脉内,套管的另一端连接血压换能器,血压换能器并与生理记录仪相连。动物动脉血压测定常接受颈总动脉或股动脉。分别出一侧颈总动脉后,用缝线将动脉离心端扎紧,再用动脉夹在近心端夹住。在近扎线处下方,用眼科剪向心端将动脉剪一小口,将预先充溢抗凝剂的换能器插管从剪口向心方向插入颈总动脉,然后用预先备好的缝线连同套管及动脉一起扎牢,并固定于动物体上。松开动脉夹,
14、动脉压力信号由换能器转换变为电信号后输入生理记录仪,描记出动脉血压曲线。二、间接测压法 在慢性性试验进行长期反复的血压视察时,接受此种方法。(一)犬1股动脉测压法 测量方法基本同一般人体血压测量,但血压计的压力袋规格不同。2颈部皮桥测压法 狗的间接测压法多按 Von Leesum法将颈动脉引至皮瓣内,然后测量该动脉血压。皮桥手术后10一12d,皮桥变松软,试诊时脉搏良好,即可进行测压。此时用一般听诊器可测知收缩压和舒张压。(二二)兔兔1颈颈部部皮皮桥桥测测压压法法 基基本本和和狗狗一一样样。但但兔兔皮皮瓣瓣必必需需保保留留保保留留较较多多的的皮皮下下组组织织,以以防防止止手手术术后皮瓣干枯。后
15、皮瓣干枯。2腹腹主主动动脉脉测测压压法法 将将兔兔背背卧卧固固定定在在手手术术台台上上,把把血血压压计计和和橡橡皮皮压压力力袋袋缠缠于于兔兔的的下下腹腹部部,松紧适当,与测人血压相同。松紧适当,与测人血压相同。(三)大鼠(三)大鼠 多用鼠尾动脉测压,也可用下肢动脉测压。多用鼠尾动脉测压,也可用下肢动脉测压。第四节第四节 尿液与粪便的检查方法尿液与粪便的检查方法 一、尿液的检查方法 尿液的性状与组成,可反应机体的代谢状况。特殊是泌尿系统本身的疾病,对尿液成分影响更大。尿液检查是泌尿系统疾病的诊断和视察疗效的重要方法。尿液的采集,参照试验动物各种体液收集方法。一般用清洁容器收集簇新尿液,以晨尿为好
16、,因晨尿浓度较高,易发觉病理成分。作细菌培育时,应消毒外阴后留中段尿,必要时进行导尿。化学定量检查时,应收集24h全部尿液,并加入适当的防腐剂(按尿量的0.5一1加入甲苯)。1、尿量检查、尿量检查常用试验动物的尿量见下表(1)尿量增多尿量增多 一昼夜尿量超过正常值范围,称为多尿。生理性尿一昼夜尿量超过正常值范围,称为多尿。生理性尿量增多见于大量饮水或食含水分过多的蔬菜所致。病理量增多见于大量饮水或食含水分过多的蔬菜所致。病理性尿量增多,见于糖尿病、尿崩症等。性尿量增多,见于糖尿病、尿崩症等。(2)尿量削减尿量削减 一昼夜尿量少于正常值范围称少尿,见于急性肾炎、一昼夜尿量少于正常值范围称少尿,见
17、于急性肾炎、急性肾功能衰竭等急性肾功能衰竭等。2尿色检查尿色检查 正常簇新尿液多为黄色或淡黄色,尿的颜色多受食物或药物的影响。(1)血尿 呈洗肉水样或混有血凝块。(2)血红蛋白尿 呈浓茶色或酱油色,镜检无红细胞,隐血试验为阳性。(3)胆红素尿 呈深黄色,振荡后泡沫亦呈黄色。(4)乳糜尿 为乳白色尿液,有时混有少量血液。3、尿酸碱试验、尿酸碱试验 正常一昼夜混合尿液呈弱酸性,正常一昼夜混合尿液呈弱酸性,pH值为值为5.48.4。食肉类动物尿液多呈酸性,素食类。食肉类动物尿液多呈酸性,素食类动物尿液可呈中性或弱碱性,在酸中毒、发热动物尿液可呈中性或弱碱性,在酸中毒、发热时,尿液可呈较强酸性,可用时
18、,尿液可呈较强酸性,可用pH试纸测定。试纸测定。4、尿比密、尿比密 尿液比密与其中所含溶质的浓度成正比,尿液比密与其中所含溶质的浓度成正比,一般用尿比密计进行测定,比密计上的刻度是一般用尿比密计进行测定,比密计上的刻度是以尿温在以尿温在15时制定的,当被检尿温每增加时制定的,当被检尿温每增加3加加0.00l,每削减,每削减3减减0.001。大量饮水。大量饮水时尿量增加,其比密降低;体内缺水时,尿量时尿量增加,其比密降低;体内缺水时,尿量削减,比密增高。削减,比密增高。5尿蛋白定性试验尿蛋白定性试验 加加热热醋醋酸酸法法:取取小小试试管管一一支支,加加尿尿液液至至2/3高高度度,手手持持试试管管
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