生物试验安全防护-铭传大学优秀PPT.ppt
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1、生物實驗室平安防護須知銘傳大學 生物科技學系張猷忠生物實驗室平安防護目的保障人身平安保障操作者本身的平安維護實驗室其他成員的平安保障實驗室外其他第三者的平安避开環境污染避开造成實驗室內環境的污染含儀器,如冰箱、離心機、微量分注器等實驗桌、門把及實驗室地面等避开造成實驗室外環境的污染如動物飼養場、河川、魚、土壤、植物或作物等生物實驗室的危險來源所操作的生物及微生物如病毒、細菌、真菌、寄生蟲和實驗動植物等。藥品和試劑如酸、鹼、致癌物、放射性同位素、毒性物質、易燃物質和危險氣體等。儀器設備如高壓蒸氣滅菌鍋、離心機、紫外光觀察箱、高熱烘箱和電泳設備等。管理制度和人如生物感染性廢棄物的處理、儀器运用教學
2、及維護、人員健康管理及監測等。在人方面,包括壓力調適、健康照護、情感處理、學術競爭、個人的責任義務和道德感等。實驗室病毒感染實例台灣(2003/12)、新加坡(2003/9)及中國(2004/7)都曾發生實驗室人員感染SARS事务:預防醫學探讨所詹姓探讨員是在卸下全身全部的隔離防護裝備後,才操作病毒器皿滅菌步驟,因突發狀況,且無平安防護裝備而感染。2005/3/26:流感病毒(H2N2)的實驗室感染。2005年2月美國病理學家協會發送含H2N2流感病毒的樣本。1968年以後诞生的人,對H2N2病毒並不具有,或僅具有有限的免疫力,H2N2病毒也不包含在目前的三價流感疫苗中。培養分離新城病病毒(N
3、ewcastle disease virus),造成大學教師及探讨生感染結膜炎。1956年,前蘇聯某實驗室,9支裝有感染了委內瑞拉馬腦炎病毒鼠腦的安瓶被打破,幾天內就造成24名工作人員感染。實驗室病毒感染實例1979年,英國Birmingham大學的一起實驗室意外,造成天花病毒散播:兩個人感染,其中一人死亡。實驗室負責人也因此自殺。1961年,莫斯科實驗人員從流行性出血熱疫區捕获到一些野鼠帶回實驗室。由於疏忽,這些野鼠被放在了室內暴露的場所。不久,實驗室有63人相繼出現發熱症狀,開始被誤診為流感,1周內又增加了30人,才開始懷疑到是流行性出血熱。1998年,中國西安某高校在运用大白鼠進行試驗時
4、,有兩名學生被大白鼠咬傷,還有一些學生給實驗老鼠放血、解剖。在實驗過程中,這些學生均未依据要求戴手套操作:結果在29名實驗人員中,有 9人感染了流行性出血熱。該病原會經由氣霧(Aerosol)傳染。實驗室細菌和原蟲感染實例北部某公立大學探讨生感染探讨中的題材,流產布氏桿菌(Brucella abortus)。美國NIH曾發生Q fever(Coxiella burnetii)實驗室感染,導致153人發病,其中1人死亡。2006/9/17:中部某大學發生實驗室博士班學生感染桿菌性痢疾(Shigella flexneri)事务。2004年,該校另一間實驗室也曾發生登革熱感染意外。後果:實驗室被關閉
5、。其他細菌之實驗室感染實例:肉毒桿菌(Clostridium botulinum type A)、沙氏桿菌(Salmonella spp.)等。1986年的一次實驗操作意外,造成南部某學校實驗室助理感染弓蟲。幾乎與隱胞子蟲(Cryptosporidium parvum)實驗有關工作者都會受到感染,尤其是以小牛下痢為卵囊來源時。證據顯示卵囊可能經由空氣傳染。病原外洩的平安隱憂操作或保存中的微生物外洩:引發人類疾病天花病毒(Small pox virus)、炭疽桿菌(Bacillus anthrax)、肺結核桿菌(Mycobacterium tuberculosis)等。前蘇聯斯維爾德洛夫斯克實驗
6、室的洩露事故:1979年4月的一天,某陶瓷廠的一些工人來到醫院。他們的病狀是發燒、咳嗽、胸痛。第一批到醫院的病人病情快速惡化。幾個小時以後,數人死亡。事後人們才得知,當地的生物武器實驗室曾發生了一次爆炸,約10公斤的炭疽芽孢粉劑洩露,爆炸釋放出大量的細菌毒霧,造成旁边1000多人發病,數百人死亡。美國州立大學布氏桿菌病實驗室的一起布氏桿菌洩露事务,共感染了45人,死亡1人。造成動物傳染病最近案例:口蹄疫病毒(FMD virus)由英國實驗室外洩。病原外洩的平安隱憂與外界病毒產生核酸重組流感病毒(Influenza virus)、輪狀病毒(Rotavirus)、Norovirus等。與外界細菌交
7、換遺傳物質抗藥性或毒素基因的散佈及交換。實驗動物攜帶病原:美聯社報導(2005/9/16):大約在兩週前,三隻感染了黑死病細菌(Yersinia pestis)的老鼠,從一個實驗室裏不見了。1967年,歐洲的三個城市為研製疫苗,從烏干達等地進口了一批黑長尾猴,而這些猴子攜帶一種特殊的病毒,引起了13名工作人員患病,並使這種疾病在德國馬堡等地區流行,馬堡病毒(Marberg virus)由此而得名。被感染人員散播病原台灣預研所SARS事务,當事人發燒後6天,始自行至診所、醫院看病,並曾到新加坡開會。後果:有70位新加坡人須被隔離,有20多名國人需作自我健康管理,被感染者差點沒命。操作核酸外洩的平
8、安隱憂實驗室操作的核酸外洩:抗除草劑基因、抗殺蟲劑基因。仍在實驗中的轉基因作物或動物。重組病原核酸。毒素和抗藥性基因。生物實驗之平安法規國科會頒有基因重組實驗室守則同時考慮重組體及生物性平安防護國內持有、保存或运用其次級以上感染性生物材料單位,為落實實驗室生物平安自主管理,避开發生實驗室感染意外,應依法成立生物實驗平安委員會或指派專責人員,確實督導實驗室各項生物平安相關事項之執行,並依相關核備程序向主管機關申報否則依傳染病防治法第63條規定,可處以新台幣9萬元至45萬元之罰鍰。生物實驗審查程序生物實驗平安委員會其次級及以上危險群微生物之實驗,必需經由探讨機構生物實驗平安委員會批准。需經由行政院
9、所屬主管機構核准後方可進行之實驗選殖產生劇毒之基因將抗藥性基因殖入病原微生物人體試驗委員會(IRB,Institutional Review Board)有關醫學實驗相關的人體試驗及檢體採樣,須先經IRB審核批准。基因重組實驗的防護物理性防護層級(Physical Containment Level)物理性防護的目的是將重組體隔離在設施或設備內,防止實驗人員和其他物品受到污染,並且防止其向外界擴散。因封閉程度的不同,區分為P1、P2、P3和P4四等級。生物性防護層級(BSL:Biosafety Level)須同時考慮重組DNA載體及宿主系統之平安性;降低在實驗室外環境中,載體在其宿主中的存活力
10、,實驗用宿主中的載體轉移到非實驗运用的宿主。分為BSL-1、BSL-2、BSL-3及BSL-4四等級或ABSL-1、ABSL-2、ABSL-3及ABSL-4四等級。生物實驗室分級P1 lab(BSL-1):可處理第一級危險群微生物之實驗室。通常這一類微生物與人類健康或成人之疾病無關。P2 lab(BSL-2):可處理其次級危險群微生物之實驗室。在人類所引起的疾病很少是嚴重的,一般來說,傳染力有限,而且通常有預防及治療的方法。P3 lab(BSL-3):可處理第三級危險群微生物之實驗室。在人類可以引起嚴重或致死的疾病,可能有預防及治療之方法。P4 lab(BSL-4):可處理第四級危險群微生物之
11、實驗室。在人類可以引起嚴重或致死的疾病,目前並無預防及治療之方法。瞭解實驗室的生物性材料要知道系上實驗室有运用到那些生物性材料。種類、來源、致病性、防護方法等。目前系上所保存的其次級危險群微生物(RG2)FungiAspergillus fumigatusVirusesNewcastle disease virus,Human rotaviruses,Noroviruses,Astroviruses,Human adenovirusesBacteriaStaphylococcus aureus,Escherichia coli O157:H7,Salmonella typhi,Salmonel
12、la typhimurium,Salmonella choleraesuis,Salmonella enteritidis,Salmonella derby,Salmonella panama,Salmonella dublin,Vibrio parahaemolyticus瞭解病原可能的感染途徑空氣或氣霧傳播SARS,Flu,TB空調、不當的實驗或儀器操作、帶病工作。有無穿帶適當的防護設備,如口罩、實驗衣等。有無在合適的生物平安操作箱操作。不慎吸入黴菌孢子、真菌、細菌或病毒培養液。食物或飲水Salmonella spp,pathogenic E.coli运用實驗用微波爐烹煮食物、食物放置實驗
13、室冰箱。皮膚或黏膜接觸NDV,parasites污染桌面或門把、不良衛生習慣、實驗意外。器械感染如針頭和刀片。生物平安等級第一級-BSL1 or P1 Lab-包含標準實驗室操作適合對操作人員及環境無或低危害的物質RG1及一般標準重組DNA的試驗環境實驗室設施:(其次道防護)要有門與外界隔開,窗戶要裝設紗窗或屏障在建築物中,實驗室無需與主通道加以區隔工作通常在開放空間的操作台上進行工作桌面要易於清潔及不透水不须要特別的隔離設備,亦不常运用平安防護設施:(第一道防護)保護衣物:實驗衣、手套人員保護裝備:面罩、眼鏡或眼罩人員訓練要求:監督管理者:具有微生物或相關學科的一般訓練實驗室人員:具有實驗室
14、操作流程的特定訓練 P1級實驗室-實驗實施要項-基因重組實驗室守則規定-進行實驗時,宜關閉實驗室的門窗。每日實驗結束時需滅菌實驗台,如實驗中發生污染,需马上加以滅菌。實驗所產生之全部生物材料廢棄物,在丟棄之前需滅菌。被污染的器具需先經滅菌後,再清洗运用或丟棄。不得用口做吸量操作。實驗室內禁止飲食、吸煙及保存食物。操作重組體之後,或離開實驗室之前要洗手。在全部操作中,應儘量避开產生氣霧。要從實驗室搬離被污染物品時,必需將其放入堅固且不漏的容器,在實驗室內密封後才可運出。防除實驗室的非實驗用生物,如昆蟲及鼠類等。若有其他方法可用,應避开运用針頭。實驗用衣物的运用,需遵從計畫主持人的指示。需遵守計畫
15、主持人所訂之其他事項。滅菌及消毒高壓蒸氣滅菌(Autoclave)滅菌方法:高壓蒸汽滅菌121,15 p.s.i.,1540 min適合全部污染物之殺菌滅菌指示帶、滅菌專用塑膠袋、滅菌用不銹鋼桶或盤紫外光滅菌無菌室或BSC运用前後,或污染區域照射至少30 min70%Ethanol or 50%Isopropanol皮膚或桌面和地面的污染次氯酸鈉(Hypochloride,高力士漂白水)120%稀釋液桌面和地面污染;器械、塑膠和玻璃器皿之殺菌處理中性肥皂或洗手乳洗手用實驗室物品的清洗一般玻璃器皿先以清潔劑(沙拉脫)浸泡刷洗,自來水洗淨,二次去離子水沖洗後,陰乾或烘乾備用有培養或污染病原微生物、
16、或其他重組DNA實驗运用的微生物時,應先將器皿滅菌後,再清洗有沾染蛋白質的器皿,應在运用後清洗前,浸泡於含清潔劑的水中有沾染微生物或病毒的器皿,在运用後清洗前,應浸泡於含次氯酸鈉(漂白水)的水中可能產生氣霧的缘由把燒熱的接種用白金環或接種針插入培養基,或燒熱的金屬板接觸生物性材料。以加熱法滅菌含生物性材料的接種環。以煮沸或微波來加熱生物性材料。用力排出吸管或針筒內之液體。快速吸排微量分注器。搖晃含生物性材料的液體,讓液面產生泡沫。以離心機、均質機、超音波破膜儀、或真空乾燥機處理生物性樣本。运用Vacuum pump時。以Shaker或Roller培養生物性材料(旋轉速度過快時)。微量分注器As
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