药物分析第十章.ppt

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1、高职高专系列教材配套电子教案高等教育出版社高等教育电子音像出版社主编 张骏（第一版）高职高专系列配套电子教案 目录绪论第一章 药物分析基础知识第二章 药物物理常数测定法第三章 药物的杂质检查方法 第四章 芳酸及其酯类药物分析 第六章 巴比妥类药物分析 第七章 杂环类药物分析 第八章 生物碱类药物分析 第九章 糖、苷类药物分析 第十章 甾体激素类药物分析 第五章 胺类药物分析 高职高专系列配套电子教案 目录第十二章 抗生素类药物分析 第十三章 药物制剂分析 第十四章 中药制剂和生化药物的分析 第十五章 质量标准的制订 第十一章 维生素类药物分析 第十章 甾体激素类药物分析甾体激素类药物的分类肾上

2、腺皮质激素雄性激素蛋白同化激素性激素孕激家雌激素各种甾体激素结构上的差异主要在于其取代基的种类、位置和数目，双键的位置和数目以及C10上有无角甲基等。一、药物结构与性质关系分析基本母核环戊烷骈多氢菲第十章 甾体激素类药物分析第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析二、鉴别试验三、杂质检查四、含量测定本本 章章 内容内容 （一）肾上腺皮质激素（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素（三）孕激素（四）雌激素（五）其它激素第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析返返 回回 （一）肾上腺皮质激素 第十章 甾体激素类药物分析本类药物的结构特点：（1）具有21个碳原子（2）A环具有4-3

3、-酮基的，-不饱和羰基结构（3）C17具有-醇酮基并多数有-羟基（4）C10、C13具有角甲基；C11具有羟基或酮基（5）其它：有些皮质激素具有1，6、9-卤素，16-羟基，6、12、16、16-甲基等。一、药物结构与性质关系分析 （一）肾上腺皮质激素 第十章 甾体激素类药物分析在结构上，肾上腺皮质激素可以认为是皮质酮的衍生物。一、药物结构与性质关系分析3皮质酮 （一）肾上腺皮质激素 第十章 甾体激素类药物分析例如，氢化可的松、醋酸地塞米松、曲按西龙、地塞米松磷酸钠等等。一、药物结构与性质关系分析氢化可的松 （一）肾上腺皮质激素 第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析返返 回回

4、（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素 第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析常用的雄性激素为睾丸素的衍生物。例如，甲睾酮（甲基睾丸素）、丙酸睾酮和苯丙酸诺龙等。（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素 第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析 第十章 甾体激素类药物分析本类药物的结构特点：（1）具有19个碳原子（2）蛋白质同化激素具18个碳原子（C10上无角甲基）（3）A环具有4-3-酮基；（4）C17上无侧链，多数是一个-羟基，有些是由该羟基形成的酯，有些具有-甲基。一、药物结构与性质关系分析（二）性激素雄性激素及蛋白同化激素返返 回回 （三）孕激素第十章 甾体激素类药物分

5、析一、药物结构与性质关系分析孕激素也称为黄体激素或孕酮，其典型药物为黄体酮。典型的药物有黄体酮、醋酸甲羟孕酮（安宫黄体酮）等。其结构如下：（三）孕激素第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析本类药物的结构特点：（1）具有21个碳原子（2）环具有4-3-酮基（3）C17上甲酮基，有些具有-羟基，与醋酸、己酸等形成酯（如醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、己酸羟孕酮等）；还有些具有6、6-甲基、6-甲基、6-氯。返返 回回 （四）雌激素第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析雌激素又称为卵泡激素。主要是雌二醇及其各种酯和炔雌醇及其衍生物。其典型药物的主要结构如下：（四）雌激素第十章

6、 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析 本类药物的结构特点：（1）具有18个碳原子（2）A环为苯环（3）C3上具有酚羟且有些形成了酯或醚（4）C10上无角甲基（5）C17具有-羟基或酮基，有些羟基形成了酯，还有些具有乙炔基。返返 回回 （五）其它激素第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析 除上述四种甾体激素外，中国药典（2005年版）还收载了口服避孕药物，如炔诺酮(norethisterone)、炔诺孕酮(norgestrel)、炔孕酮（ethisterone）等，其典型结构药物结构如下：（五）其它激素第十章 甾体激素类药物分析一、药物结构与性质关系分析 药物的结构特点：

7、（1）多数在A环上具有4-3-酮基，与黄体酮和睾酮一致（2）有的在C17具有-羟基、-乙炔基或甲酮基（3）有的在C10上无角甲基，与雌激素相同。返返 回回 返返 回回 （一）与强酸呈色反应（二）官能团的反应（三）氧化还原反应（四）沉淀反应（五）衍生物熔点第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验（六）水解反应（七）薄层色谱法（八）高效液相色谱法（九）紫外分光光度法（十）红外吸收光谱法返返 回回 （一）与强酸呈色反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验1.许多甾体激素能与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，其中以与硫酸的呈色反应应用较广。2.试剂：硫酸的呈色反应中最常用的试剂为甲醇和乙醇，而稀释反应

8、体系的试剂常为稀硫酸或水。3.应用实例：以氢化可的松的鉴别为例取本品约2mg，加硫酸2ml使溶解，放置5分钟，显棕黄色至红色，并显绿色荧光；将此溶液倾入10ml水中，即变成黄色至橙黄色，并微带绿色荧光，同时生成少量絮状沉淀。返返 回回 （二）官能团的反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验1.酮基的呈色反应：酮基的呈色反应：甾体激素分子中，大多在C3和C20位上含有酮基，能与羰基试剂肼发生呈色反应，产生有色物质腙。原理：常用的试剂：2,4二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼。H2NNHNO2NO2H2NNHCON （二）官能团的反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验2.C C1717位位 醇

9、酮基的呈色反应醇酮基的呈色反应 ：某些，C17位上具有-醇酮基（-CO-CH2OH）的甾体激素，具还原性，可与氧化剂四氮唑盐发生呈色反应，产物的颜色随所用试剂条件不同而定，多为红色或蓝色。原理：-醇羟基可以被氧化为醛、或醇酮基发生断裂。而氧化剂四氮唑盐被还原而发生呈色反应，（二）官能团的反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验3.3.甲酮基的呈色反应甲酮基的呈色反应：具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物亚硝基铁氰化纳芳香醛呈色黄体酮其他甾体亚硝基铁氰化纳蓝紫色（灵敏、专属）淡橙色或不显色 （二）官能团的反应第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验4.4.有机氟的呈色反应有机氟的呈色反应 ：

10、含氟的甾体激素药物氧瓶燃烧F茜素氟蓝硝酸亚铈显蓝紫色返返 回回 （三）氧化还原反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验1.1.碱性酒石酸铜的反应碱性酒石酸铜的反应 ：皮质激素的C17-醇 酮基具有还原性碱性酒石酸铜Cu2O（橙红色）（三）氧化还原反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验2.2.与氨制硝酸银的反应与氨制硝酸银的反应 ：皮质激素的 C17-醇酮基具有还原性氨制硝酸银Ag（黑色）返返 回回（四）沉淀反应沉淀反应 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验含炔基的甾体激素硝酸银银盐沉淀返返 回回（五）衍生物熔点衍生物熔点 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验黄体酮盐酸羟胺黄体双酮

11、肟m.p.235240m.p.200202KOH炔雌醇苯甲酰氯苯甲酸酯（五）衍生物熔点衍生物熔点 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验m.p.约182苯丙酸诺龙盐酸氨基脲苯丙酸诺龙的缩氨脲衍生物丙酸睾丸酮醇制KOH丙酸睾丸酮的水解产物m.p.150156返返 回回（六）水解反应第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及己酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物来鉴别。醋酸可的松醇制KOHH2SO4醋酸乙酯（香气）返返 回回（七）薄层色谱法 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验（八）高效液相色谱法通过比较供试品和对照品保留时间的一致性，进行鉴别（九）紫外分光光度

12、法本类药物的分子中存在共扼结构（和），具紫外吸收。如：-3-酮max240nm；苯环：280nm苯环返返 回回（十）红外吸收光谱法 第十章 甾体激素类药物分析二、鉴别试验中国药典上收载的甾体激素类药物的红外光谱图要求与对照图谱一致。返返 回回三、杂质检查（一）有关物质（二）游离磷酸盐（三）甲醇和丙酮（四）硒（五）雌酮 第十章 甾体激素类药物分析返返 回回 三、杂质检查来源：原料、中间体、异构体、降解产物。特点：结构相似、可能存在多个甾体杂质。方法（具一定的分离能力）：1.薄层色谱法（多采用高、低浓度对比法）2.高效液相色谱法（多采用不加校正因子的主成分自身对照法）TLC判定方法：规定杂质斑点数

13、目；比较杂质斑点颜色HPLC判定方法：大多规定杂质峰面积（一）有关物质 第十章 甾体激素类药物分析三、杂质检查1.薄层色谱法（多采用高、低浓度对比法）醋酸氟轻松中醋酸氟轻松中“有关物质有关物质”的检查的检查取本品，加三氯甲烷-甲醇（91）溶解并制成每1ml中约含3mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置50ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（91）稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（973）为展开剂，展开，晾干，在105干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其

14、颜色与对照溶液的主斑点比较不得更深。（一）有关物质 第十章 甾体激素类药物分析三、杂质检查2.高效液相色谱法（多采用不加校正因子的主成分自身对照法）炔诺酮中炔诺酮中“有关物质有关物质”的检查的检查 取本品，以甲醇溶解并稀释制成每1ml中含2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取3ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。用含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10l注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高度约为满量程的10%，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰面积的和不得大于对照溶液主蜂面积。（一）有关物质第十章 甾

15、体激素类药物分析返返 回回三、杂质检查地塞米松磷酸钠为地塞米松与磷酸形成的磷酸酯二钠盐，所以在其生产和贮存过程中可能引入磷酸盐，因此中国药典对地塞米松磷酸钠进行游离磷酸盐的检查。原理：方法：对照品法（二）游离磷酸盐 第十章 甾体激素类药物分析磷钼酸铵磷钼酸铵 740nm 三、杂质检查第十章 甾体激素类药物分析期律（二）游离磷酸盐地塞米松磷酸钠中游离磷酸盐的检查精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20放置3050分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理

16、的吸收度比较，不得更大。返返 回回三、杂质检查第十章 甾体激素类药物分析（三）甲醇和丙酮甲醇和丙酮为地塞米松磷酸钠生产过程中所使用的溶剂，甲醇为二类限制使用的溶剂，丙酮为三类溶剂，中国药典均采用气相色谱法测其溶剂残留的。返返 回回三、杂质检查第十章 甾体激素类药物分析（四）硒剧毒剧毒来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢原理与方法地塞米松磷酸钠氧瓶燃烧Se6+盐酸羟胺Se4+pH2.022，3-二氨基萘试液4，5-苯并苯硒二唑环己烷max378nm返返 回回三、杂质检查 原理：Zimmermann反应（五）雌酮（乙炔基）第十章 甾体激素类药物分析碱性KOH乙醇HOC C2红蓝色红蓝色 间二硝基

17、苯返返 回回四、含量测定高效液相色谱法紫外分光光度法比色法第十章 甾体激素类药物分析四、含量测定（一）高效液相色谱法特点：样品用量少、灵敏度高、分离效能好、快速固定相：为十八烷基硅烷键合硅胶流动相：大多是甲醇和水组成的混合液 检测：可采用紫外检测器于240nm或280nm波长检测，（因为大多甾体激素都具有4-3-酮及苯环等共轭结构）第十章 甾体激素类药物分析返返 回回四、含量测定（二）紫外分光光度法 4-3-酮基和苯环的共扼系统，于紫外光区有特征吸收4-3-酮基 max：240nm波长附近 肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素 苯环 max：280nm波长附近 雌激素第十章 甾体激素

18、类药物分析返返 回回四、含量测定（三）比色法 1.四氮唑比色法2.异烟肼比色法3.Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法第十章 甾体激素类药物分析四、含量测定（三）比色法 1.四氮唑比色法2.原理：3.17位-醇酮基（具还原性）第十章 甾体激素类药物分析四氮唑盐OH-有色的甲臢比色四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 1.四氮唑比色法四氮唑盐的种类：2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)，其还原产物为不溶于水的深红色三苯甲簪，max在480490nm，也称红四氮唑（RT）+2eOH-四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 1.四氮唑比色法四氮唑盐的种类：蓝四氮唑（BT

19、），即3,3-二甲氧苯基-双-4,4-93,5-二苯基)氯化四氮唑，其还原产物为暗蓝色的双甲膳，max在525nm左右。Cl-+CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3+4eOH-HCNNNNOCH3HCNNNNOCH3四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 1.四氮唑比色法倍他米松磷酸钠的含量测定倍他米松磷酸钠的含量测定精密称取倍他米松磷酸钠26.35mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取精密称取倍他米松磷酸钠对照品26.66mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶液各

20、1ml,分别置25ml量瓶中，各精密加异烟肼溶液（异烟肼75mg，盐酸0.1ml，加甲醇溶解并稀释至100ml）20ml，摇匀，置60水浴中保温1小时，冷却，加甲醇稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处测定供试品溶液与对照品溶液吸光度分别为0.654和0.663，计算倍他米松磷酸钠的百分含量。四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 1.四氮唑比色法讨论：（1）溶剂和水分的影响含水量5%反应V含水10%A含水30%几无反应 无水乙醇醛 A无醛无水乙醇(2)碱的种类及加入顺序的影响 具还原性先加四氮唑盐溶液，再加碱液为好 原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长

21、时间接触后，有部分分解。四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 1.四氮唑比色法2.讨论：(3)温度与时间的影响 3.一般说来，呈色速度随温度增高而加快。4.BP：在30反应1小时5.中国药典(2005年版)：多数在25暗处反应4045分钟。6.(4)空气中氧及光线的影响 对光敏感，在暗处显色。TTC法形成的甲臢对空气中氧敏感，使颜色强度，稳定性。BP规定：加入试剂后，要往容器中充N2。四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 1.四氮唑比色法讨论（5）基团影响 lC21：-羟基（C21-OH）21-OH酯化后较母体羟基反应速度慢，即：游离体酯类如：可的松醋酸可的松 简单

22、酯复杂酯，醋酸酯磷酸酯琥珀酸酯三甲基醋酸酯返返 回回四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 2.异烟肼比色法原理：酮基H+异烟肼缩合黄色异烟腙，比色四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 2.异烟肼比色法讨论：(1)溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度 常用HCl HCl：异烟肼=2M：1M时，获最大吸收度。四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 2.异烟肼比色法讨论：(3)水分、温度、光线和氧的影响 甾体激素与异烟肼的缩合反应为可逆反应，所以H2OA温度，逆反应加速。于密闭并不吸水的条件下，光与氧对反应不产生影响。(4)关于反应的专属

23、性在该反应条件下，对43酮具有一定的专属性，室温下，30反应完全。C20酮基反应慢，C17酮基反应慢；C11酮基不反应 返返 回回四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 3.Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法Kober反应：指雌激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后，重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收的反应。（特征反应）四、含量测定第十章 甾体激素类药物分析（三）比色法 3.Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法铁酚试剂法铁酚试剂法 铁酚试剂的组成 硫酸亚铁铵 浓硫酸 过氧化氢 苯酚浓硫酸和过氧化氢的作用是将2价铁氧化成3价铁四、含量测定第十章 甾体激素类药

24、物分析（三）比色法 3.Kober反应比色法及铁一酚试剂比色法铁酚试剂法铁酚试剂法三价铁的作用 A能够加快黄色生成的速度 B能促进黄色向红色的转变 C能增加红色的稳定性 苯酚的作用 A可消除反应产生的荧光 B能够促进红色的生成第十章 甾体激素类药物分析【课堂活动课堂活动】1.如何配制浓度为20gml的丙酸倍氯米松的乙醇溶液？2.教材284页例中，若供试品的取样量为20.22mg，而对照品和供试品的吸光度分别为0.328和0.329，请问供试品不符合规定的结论对吗？答案第十章 甾体激素类药物分析1.答：精密称取丙酸倍氯米松约10mg，置50ml 量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置50ml 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。即得。2.答：由于供试品的浓度为20.22mg25ml，折合成20mg25ml的吸收度为0.325，小于对照品的吸收度，因此供试品符合规定。主编：撰稿教师：（以姓氏为序）制作：责任编辑：电子编辑：