吸光光度法的灵敏度与准确度.ppt

《吸光光度法的灵敏度与准确度.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《吸光光度法的灵敏度与准确度.ppt（35页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、吸光光度法的灵敏度与准确度吸光光度法的灵敏度与准确度一一.灵敏度的表示方法灵敏度的表示方法:摩尔吸光系数摩尔吸光系数()A=b c =A/bc (Lmol-1cm-1)越大越大,灵敏度越高灵敏度越高:1045104 为中等灵敏度为中等灵敏度;105为高灵敏度为高灵敏度;10104 4*选择性好选择性好*显色剂在测定波长处无明显吸收。显色剂在测定波长处无明显吸收。对照性好对照性好,maxmax60 nm.60 nm.*反应生成的有色化合物反应生成的有色化合物组成恒定，稳定组成恒定，稳定。*显色条件易于控制，显色条件易于控制，重现性好重现性好。88.4.2 显色条件的确定显色条件的确定c(R)c(

2、R)c(R)1.显色剂用量显色剂用量（c(M)、pH一定）一定）Mo(SCN)32+浅红浅红Mo(SCN)5 橙红橙红Mo(SCN)6-浅红浅红Fe(SCN)n3-n92.显色反应酸度显色反应酸度（c(M)、c(R)一定）一定）pH1pHpH2pH10邻二氮邻二氮菲亚铁反应完全度与菲亚铁反应完全度与pH的关系的关系 Fe2+3RHHA柠檬酸柠檬酸c(R)R=10-4molL-131021.33FeR311pH38为适宜为适宜的酸度范围的酸度范围123.显色温度及显色时间显色温度及显色时间另外，还有介质条件、有机溶剂、另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等表面活性剂等T1()T2()t(mi

3、n)A138.4.3 8.4.3 干扰及消除干扰及消除Co2,Fe3+Co2+FeF63-Co(SCN)2(蓝蓝)NaFSCNCo2+Fe2+,Sn4+(2)Sn2+Co(SCN)2SCN测测Co2(含含Fe3+):(掩蔽法掩蔽法)1.1.化学法化学法 14Co2+,Zn2+,Ni2+,Fe2+CoR,ZnR NiR,FeRCoR,Zn2+,Ni2+,Fe2+钴试剂钴试剂RH+测测Co2:(生成络合物性质不同生成络合物性质不同)如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，如不能通过控制酸度和掩蔽的办法消除干扰，则需采取分离法。则需采取分离法。测测Fe3:(控制控制pH)Fe3+,Cu2+FeSS（

4、紫红）紫红）Cu2+pH 2.5SS152.物理法物理法 选择适当的测定波长选择适当的测定波长515655415500钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 AA络合物络合物络合物络合物试剂试剂试剂试剂16 1.1.仅络合物有吸收，仅络合物有吸收，溶剂溶剂作参比。作参比。如如 phenphenFeFe2+2+标准曲线标准曲线2.2.待测液也有吸收待测液也有吸收，被测液被测液作参比。作参比。如如 测汽水中的测汽水中的 FeFe3.3.显色剂或其他试剂也有吸收，显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液空白溶液作参比作参比 例例:邻二氮菲光度法测邻二氮菲光度法测Li2CO3中的中的 Fe，参比溶液为不含参比溶液

5、为不含Li2CO3样品的所有试剂样品的所有试剂。4.4.干扰组分与显色剂有反应干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时：又无法掩蔽消除时：1 1）掩蔽被测组分掩蔽被测组分，再加入显色剂，作参比，再加入显色剂，作参比.2 2）加入等量干扰组分加入等量干扰组分到空白溶液中到空白溶液中,作参比作参比.-选择适当的参比溶液选择适当的参比溶液178.5 吸光光度法的应用吸光光度法的应用1.单一组分测定单一组分测定1)金属离子金属离子:Fe-phen,Ni-丁二酮肟丁二酮肟,Co-钴试剂钴试剂2)磷的测定磷的测定:DNA中含中含P9.2%,RNA中含中含P9.5%,可得核酸量可得核酸量.H3PO4+12(

6、NH4)2MoO4+21HNO3=(NH4)3PO412MoO3+12NH4NO3+12H2O磷钼磷钼黄黄(小小)磷磷钼钼(V)蓝蓝(大大)Sn2+183)蛋白质测定蛋白质测定溴甲酚绿、考马司亮蓝等溴甲酚绿、考马司亮蓝等4)氨基酸测定氨基酸测定茚三酮茚三酮(紫色化合物紫色化合物)5)水质检测水质检测:NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+-6)药物含量测定药物含量测定比吸光系数定量；荷移比吸光系数定量；荷移光谱法测定光谱法测定.7)紫外吸收紫外吸收(UV):NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等

7、。苯丙氨酸、蛋白质等。192.多组多组分的测定分的测定 x 1,y 1,x 2,y 2由由x,y标液标液 在在 1,2处分别测得处分别测得a)在 1处测组分处测组分x,在 2处测组分处测组分yb)在 1处测组分处测组分x;在在 2处测总吸处测总吸收收,扣除扣除x吸收吸收,可求可求yc)x,y组分不能直接测定组分不能直接测定A1=x 1bcx+y 1bcy(在 1处测得处测得A1)A2=x 2bcx+y 2bcy(在 2处测得处测得A2)20 3.3.光度滴定光度滴定NaOH滴定滴定 对硝基酚对硝基酚 pKa=7.15 间硝基酚间硝基酚 pKa=8.39 pKa=1.24V1V2V(NaOH)/

8、mL对硝基酚对硝基酚间硝基酚间硝基酚酸形均酸形均无色无色.碱形均碱形均黄色黄色21典型的光度滴定曲线典型的光度滴定曲线依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法。Vsp滴定剂吸收滴定剂吸收Vsp被滴物被滴物吸收吸收Vsp滴定剂与待滴定剂与待测物均吸收测物均吸收Vsp产物吸收产物吸收224.4.络合物组成的测定络合物组成的测定(1)(1)摩尔比法摩尔比法:固定固定cM,改变改变c cR R 1:13:1c(R)/c(M)A1.0 2.0 3,0 23(2)(2)等摩尔连续变化法等摩尔连续变化法:M:R=1:10.50.33cM/cc

9、M/cM:R=1:224表观形成常数的测定表观形成常数的测定(设设M、R均无均无吸收吸收)0.5cM/cM:R=1:1A0Ac(M)=c(R)=cMmRn型型?255.5.一元弱酸离解常数的测定一元弱酸离解常数的测定 p330p330HL HLKaH+L/HL高酸度下，几乎全部以高酸度下，几乎全部以HL存在，可测得存在，可测得AHLHLc(HL)；低酸度下，几乎全部以低酸度下，几乎全部以L存在，可测得存在，可测得AL Lc(HL).代入整理：代入整理：HLL或配制一系列配制一系列c相同相同,pH不同的溶液不同的溶液,测测A.26MO吸收曲线吸收曲线Aa(HL)Ab(L)123456Ab6543

10、21Aa350400450500550600/nmA曲线曲线pHpH1 11.10,1.381.10,1.382 22.652.653 33.063.064 43.483.485 53.983.986 65.53,6.805.53,6.80由每份由每份溶液的一溶液的一对对pH、A，可，可求求得一个得一个Ka,取平取平均值即可均值即可.27MO离解常数的测定离解常数的测定作图法作图法AHL3.32(pKa)123456ApH=pKapHAL0.60.40.20-0.2-0.4-0.63.04.0pH3.34286.双波长分光光度法消除干扰双波长分光光度法消除干扰(不要求不要求)在 2，A 2=A

11、x2+Ay2在在 1，A 1=Ax1+Ay1 A=A 2-A 1 =Ax2+Ay2(Ax1+Ay1)=Ax2 Ax1 =AxAy2 Ay1 Ax=(x2 x1)bcx消除了消除了y的干扰的干扰X被测被测Y干扰干扰211Ay1AX1Ay2AX2A/nm29双波长分光光度法消除浑浊背景干扰双波长分光光度法消除浑浊背景干扰 1 2AA 1-A 2=A Ac例例 牛奶中微量牛奶中微量Fe的测定的测定307.导数分光光度法导数分光光度法(不要求不要求)A 图图混合物导数光谱混合物导数光谱0123431常药常药降压片中氢氯噻嗪含量的测定降压片中氢氯噻嗪含量的测定1.氢氯噻嗪氢氯噻嗪.2.硫酸双肼肽硫酸双肼

12、肽嗪嗪3.盐酸可乐定盐酸可乐定4.常药降压片常药降压片 250 290 330 412312A32肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取肝中茚满二酮类抗凝血杀鼠剂的固相萃取方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用方法：肝匀浆用乙腈浸提，浸提液用6的的HClO4稀释，然后用稀释，然后用GDX100大孔树脂萃大孔树脂萃取，用二氯甲烷取，用二氯甲烷5mL洗脱杀鼠剂，洗脱杀鼠剂，40挥干，剩余物用挥干，剩余物用0.1molL-1NaOH4mL溶溶解后，紫外导数光谱测定。解后，紫外导数光谱测定。A0.0cdabDa.空白肝普通光谱空白肝普通光谱b.2.5 mg/L敌鼠溶液的普通光谱敌鼠溶液的普通光谱c.空白肝二阶

13、导数光谱空白肝二阶导数光谱d.2.5 mg/L敌鼠溶液的二阶导数光谱敌鼠溶液的二阶导数光谱338.1 了了解解分分子子对对光光的的吸吸收收与与溶溶液液颜颜色色的的关关系系.吸吸收收曲曲线线定性分析的基础。定性分析的基础。定定量量分分析析的的基基础础朗朗伯伯-比比尔尔定定律律：A=bc=-lgT 式式中中各各参数的物理意义，定量计算。参数的物理意义，定量计算。8.2 了了解解目目视视比比色色法法、分分光光光光度度法法的的特特点点，分分光光光光度度计计的的基本部件。基本部件。8.3 灵敏度的表示灵敏度的表示摩尔吸光系数的意义和计算摩尔吸光系数的意义和计算；准确度准确度适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。8.4 显显色色反反应应及及条条件件的的确确定定:显显色色剂剂用用量量、酸酸度度、时时间间、温度、干扰及消除。温度、干扰及消除。8.5 应应用用:单单一一组组分分测测定定示示例例、多多组组分分测测定定、光光度度滴滴定定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。第八章第八章 小小 结结3435