超微量分光光度计ppt课件.ppt

《超微量分光光度计ppt课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《超微量分光光度计ppt课件.ppt（21页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、K5500微量分光光度计微量分光光度计深圳市亿鑫仪器设备有限公司深圳市亿鑫仪器设备有限公司/13823202331 分光光度法的定义与应用分光光度法的定义与应用 定义定义:分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术。特点特点:灵敏、精确、快速和简便，在复杂组分系统中，不需要分离，即能检测出其中所含的极少量物质。应用应用:生物化学研究中广泛使用的方法之一，广泛用于糖，蛋白质，核酸，酶等的快速定量检测。分光光度计的分类分分光光光光度度计计的的分分类类紫外分光光度计紫外分光光度计:可见分光光度计可见分光光度计:红外分光光度计红外分光光度计:测定波长范围为测定波长

2、范围为200200380 380 nmnm的紫外光区的紫外光区测定波长范围为测定波长范围为380780 nm的可见光区的可见光区测定波长范围为测定波长范围为大于大于780 nm的红外光区的红外光区 分光光度计的光谱范围分光光度计的光谱范围 包括波长范围为380780 nm的可见光区和波长范围为200380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨钨灯灯的的发发射射光光谱谱：钨灯光源所发出的380820nm波长的光谱，光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。氘氘灯灯的的发发射射光光谱

3、谱：氘灯能发出190400 nm波长的光谱，可作为紫外光光度计的光源。氙氙气气闪闪光光灯灯的的发发射射光光谱谱：氙灯能发出200850 nm波长的光谱，可作为紫外-可见光光度计的光源。电源体积较小，采用脉冲闪光方式工作，闪光次数可达109次，寿命相对氘灯和钨灯较长。物质的吸收光谱 如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液，此如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液，此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱，它出现了几条暗线，即光源发射光谱中某些波长的光因溶液了几条暗线，即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收

4、而消失，这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱。吸收光谱。不同物质的吸收光谱是不同的。因此根据吸收光不同物质的吸收光谱是不同的。因此根据吸收光谱，可以鉴别溶液中所含的物质。谱，可以鉴别溶液中所含的物质。物质的吸收光谱物质的吸收光谱 当当光光线线通通过过某某种种物物质质的的溶溶液液时时，透透过过的的光光的的强强度度减减弱弱。因因为为有有一一部部分分光光在在溶溶液液的的表表面面反反射射或或分分散散，一一部部分分光光被组成此溶液的物质所吸收，只有一部分光可透过溶液。被组成此溶液的物质所吸收，只有一部分光可透过溶液。入射光入射光=反射光反射光 分散光分散光 吸收光吸收光 透过光透过光 如如果果我我

5、们们用用蒸蒸馏馏水水(或或组组成成此此溶溶液液的的溶溶剂剂)作作为为“空空白白”去校正反射、分散等因素造成的入射光的损失，则：去校正反射、分散等因素造成的入射光的损失，则：入射光入射光=吸收光吸收光 十十 透过光透过光 原理原理 分光光度计进行样品浓度测定的原理是根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律,A=b c 其中，A 为物质的吸光度；为物质的吸光系数；b为光路长度（光程）；c为物质的浓度。上上式式说说明明了了物物质质的的吸吸光光度度与与吸吸收收物物质质的的浓浓度度和和液液层的厚度成正比。层的厚度成正比。吸光度与浓度之间的关系吸光度与浓度之间的关系吸光度与物吸光度与物质的浓度成质的

6、浓度成正比正比 分光光度计的基本结构 分光光度计一般包括分光光度计一般包括5 5部分：光源、单色器、吸收池、部分：光源、单色器、吸收池、检测器和测量仪表。分光光度计各部件的次序如图所示检测器和测量仪表。分光光度计各部件的次序如图所示:K5500微量分光光度计是一款新型全波长（200850nm）微量分光光度计，可用来检测核酸(A260nm)、蛋白质(A280nm,以及试剂盒法)、细胞溶液、微阵列（基因芯片，同时检测核酸(或蛋白)和荧光染料）样品以及可以进行常规紫外-可见（200850nm）全波长扫描等。K5500微量分光光度计微量分光光度计仪器特点仪器特点l样品用量少（12L）！l无需比色皿！l

7、紫外-可见全波长扫描（200850nm）！l无需预热，可随时检测！l检测速度快！l直接显示浓度值！l样品无需稀释，可测样品的浓度范围是常规紫外-可见分光光度计的50倍！l数据统计软件方便容易掌握！与传统分光光度计的区别与优势与传统分光光度计的区别与优势传统分光光度计传统分光光度计 K5500K5500微量分光光度计微量分光光度计样品体积要求大，绝大部分要50L以上 所需样品体积小，仅需12L 需使用比色皿 不需要比色皿，用移液枪直接将样品滴加到检测平台上，测量时样品会自动形成液柱每次换样品时，比色杯需要清洗，工作繁重 只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可光程一般为10mm，样品需要

8、稀释，测量浓度范围小 具有1mm和0.2mm两个光程(由电磁阀调节)，样品无需稀释，测量范围可达到常规分光光度计的50倍 传统分光光度计传统分光光度计K5500K5500微量分光光度计微量分光光度计灯源一般由氘灯（紫外）和钨灯（可见）组成寿命短氙气闪光灯为灯源寿命长,性能稳定需要预热半个小时以上不需要预热，可随时检测 显示吸光度值，不显示浓度值显示吸光度值同时，程序直接给出浓度值（核酸、蛋白和荧光染料）仪器体积大，质量重体积小（21cm17cm11cm），质量轻（1.35kg）与传统分光光度计的区别与优势与传统分光光度计的区别与优势性能指标性能指标l样品体积要求：12Ll波长范围：200850

9、nml波长精度：1nml波长分辨率：3nm(FWHM at Hg 546nm)l吸光率精确度：0.003 Absl吸光率准确度：1%(0.76吸光率在350nm)l吸光率范围：0.0275（等效于10mm）l仪器外形尺寸：21cm17cm11cml仪器重量：1.35kg测量测量 在测量类型选项区选择正确的测量类型。测量样品之前，要先做空白对照。空白对照空白对照（1）打开取样臂，用移液枪吸取12L样品溶剂滴加 到检测平台上。（2）合上取样臂，液柱会在上下基座之间自动形成。（3）点击测量功能区的“Blank”按钮，软件会对溶剂自动进行测量，并自动记录空白值。（4）打开取样臂，用干净的吸水纸将上下基

10、座上的空白对照溶剂擦干净。样品测量样品测量（1）以移液枪吸取样品（12L）滴加到检测平台上。（2）放下取样臂。（3）点击软件界面上的“Measure”按钮，即可得出样品参数（吸光度和浓度）和图表。（4）以干净的吸水纸擦去上下检测平台上的空白对照用溶剂。（5）如需保存图表，可点击“Save Graph”按钮。（6）待全部样品测定结束后，点击“Show Report”按钮，已测样品的测定数据将出现在Excel表格中。仪器应用范围仪器应用范围 K5500型微量分光光度计可用于测量：l核酸：核酸：核酸样品的浓度和纯度，包括双链DNA，单链DNA和RNA。l蛋白质：蛋白质：A280测蛋白质样品浓度，包括

11、1Abs=1mg/mL，BSA，IgG，Lysozyme；试剂盒法（Lowry法、BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度，软件自动绘制标准曲线，直接给出浓度值。l常规紫外常规紫外/可见全波长扫描：可见全波长扫描：可进行紫外/可见全波长（200850nm）扫描。l细胞溶液：细胞溶液：细胞溶液密度的测定。l微阵列样品：微阵列样品：可同时检测核酸及染料浓度，且软件直接给出浓度值。测量界面及吸收光谱特征测量界面及吸收光谱特征双链DNA紫外吸收光谱图样品在260nm处吸光度为3.5213Abs，浓度值为176.07ng/L牛血清白蛋白（BSA）紫外吸收光谱图样品在280nm处吸光度为8.9425Abs，浓度值为23.7mg/mL数据输出表格数据输出表格