血涂片的制作及免疫细胞的形态观察精.ppt

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1、血涂片的制作及免疫细胞的形态观察第1页，本讲稿共12页一、实验目的一、实验目的掌握微量采血及血涂片的制作方法学习使用光学显微镜观察免疫细胞 第2页，本讲稿共12页二、实验原理 血涂片是临床化验中最常规的技术，也是血液学研究中的最基本技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏（Wright）染液染色后，不同免疫细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色。根据细胞中颗粒的颜色、大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将免疫细胞进行分类计数。第3页，本讲稿共12页三、实验器材三、实验器材l器材器材：医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗 净的载玻片等l试剂试剂：瑞氏（Wright）染液，瑞特氏

2、染料0.1克溶于60ml 甲醇中，过滤。贮褐色瓶中备用。（配置时，要 先将瑞特氏染料置研钵体内边研边滴加甲醇，使 染料溶液得更好。）第4页，本讲稿共12页四、实验步骤1采血采血采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹或耳垂，干后用采血针刺破指腹或耳垂的皮肤；动物采血时先将耳部剪毛，酒精消毒后，刺破动物耳部皮肤，挤去第一滴血不要（因含单核细胞较多）。第5页，本讲稿共12页第6页，本讲稿共12页2涂片涂片 挤出第二滴血置于载玻片的一端，再取另一张边缘光滑的载玻片，斜置于血涂片的前缘，先向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状，两玻片的角度以3040O为宜（角度过大血膜较厚，角度小则血膜薄），轻轻将载玻片向前推进，即涂成血液薄膜（如图），推进时速度要一致，否则血膜成波浪形，厚薄不匀。第7页，本讲稿共12页第8页，本讲稿共12页3染色染色 待涂片在空气中完全干燥后，滴加数滴瑞氏染液盖满血膜为止，染色13min。然后滴加等量的缓冲液（pH6.4）或蒸馏水冲去染液，吸水纸吸干，镜检。第9页，本讲稿共12页4封片封片经染色的涂片完全干燥后，用中性树胶封片保存。第10页，本讲稿共12页5观察观察分别用低倍、高倍和油镜观察血涂片，分辨不同的血细胞类型。第11页，本讲稿共12页五、实验报告拍摄血细胞照片，标出并分析比较各种免疫细胞类型和形态特征。第12页，本讲稿共12页