大规模细胞培养与细胞工厂优秀课件.ppt

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1、大规模细胞培养与细胞工厂第1页，本讲稿共24页内容一）动物细胞培养与细胞工厂二）生物制品三）疫苗四）现代生物技术与基因工程五）单克隆抗体与抗体药物六）干细胞与体细胞治疗第2页，本讲稿共24页我们熟知的细胞培养动物细胞培养第3页，本讲稿共24页动物细胞培养技术1）无菌环境：超净台、安全柜2）生长环境：CO2培养箱3）营养环境：培养基4）贴壁环境：培养瓶（皿）等、贴壁环境：培养瓶（皿）等、细胞工厂细胞工厂第4页，本讲稿共24页动物细胞的形态贴壁细胞：细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、增殖，当细胞在该表面生长后，一般形成两种形态，即成纤维

2、样细胞型或上皮样细胞型 悬浮细胞：悬浮状态生长，如淋巴细胞、Namalwa细胞兼性贴壁细胞：中国仓鼠卵巢细胞、小鼠L929细胞 第5页，本讲稿共24页（一）贴附型：（一）贴附型：大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞贴附贴附:是大多数有机体是大多数有机体细胞细胞在体内在体内生存生存和和生长发育生长发育的的基本存在方式基本存在方式结果结果:基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须的绝大多数细胞必须贴附贴附于一于一固相表面固相表面才能才能生存生存和和生长生长。培养时：

3、培养时：这些细胞被放到体外环境中以后这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附于某一固同样需要贴附于某一固相表面才能生存和生长，因而相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞属于贴附型细胞贴附贴附(锚定或锚着锚定或锚着)依赖型依赖型(性性)细胞：细胞：唯有贴附于固相表面才能生存唯有贴附于固相表面才能生存的细胞的细胞第6页，本讲稿共24页贴附生长型细胞生长型细胞细胞培养常用的培养瓶、培细胞培养常用的培养瓶、培养皿、养皿、6孔板、孔板、96孔板孔板第7页，本讲稿共24页细胞贴附材料与表面贴附的固相表面材料：贴附的固相表面材料：玻璃、塑料（聚苯乙烯）玻璃、塑料（聚苯乙烯）玻璃：本身具有亲水性，适于细胞

4、贴壁玻璃：本身具有亲水性，适于细胞贴壁塑料：没有亲水性，不能使细胞贴壁，所以必须在塑料：没有亲水性，不能使细胞贴壁，所以必须在 塑料表面进行亲水性接枝（等离子处理）塑料表面进行亲水性接枝（等离子处理）第8页，本讲稿共24页（二）悬浮型：（二）悬浮型：见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。量繁殖。概念：概念：培养时培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长或以机械方法使

5、保持悬浮状态下生长来源：来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞特点：特点：在在悬浮中生长良好悬浮中生长良好细胞细胞圆形圆形，单个或小细胞团，单个或小细胞团优点：优点：生存空间大，生存空间大，提供数量大，传代方便提供数量大，传代方便(不需消化不需消化)，易于收获，易于收获，可获得稳定状态可获得稳定状态缺点：缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离第9页，本讲稿共24页悬浮生长型细胞悬浮生长型细胞第10页，本讲稿共24页悬浮培养磁力搅拌器第11页，本讲稿共24页大规模细胞培养细胞工厂培养技术在大规模细胞培养中的应用.

6、doc第12页，本讲稿共24页转瓶培养的缺点转瓶技术为传统的贴壁细胞培养技术，细胞接种在旋转的圆筒形培养器-转瓶中，培养过程中转瓶不断旋转，使细胞交替接触培养液和空气。缺点：劳动强度大，占地空间大，单位体积提供细胞生长的表面积小，细胞生长密度低，瓶间差异较难控制等，因而难以产业化或规模化生产。重要的是：转瓶由于不是静止培养，产品质量经常达不到要求或由于细胞易破碎而存在DNA毒性潜在危险，据称国家准备淘汰转瓶生产技术。第13页，本讲稿共24页细胞工厂用于大规模细胞培养与生产第14页，本讲稿共24页细胞工厂关键技术：贴壁处理：高真空等离子接枝表面处理（know-how:接枝材料与接枝技术）材料性能

7、：生物相容性（无细胞毒性）多层焊接技术：密封性与牢固性灭菌技术：Y射线辐照第15页，本讲稿共24页细胞工厂竞争Nunc CorningDHS 第16页，本讲稿共24页DHS 细胞工厂DHS大规模细胞培养系统 单页.pdf第17页，本讲稿共24页Nunc Cell Factory第18页，本讲稿共24页Corning CellSTACK ChamberChoice of traditional surface treatment(TC),new Corning CellBIND Surface for enhanced cell attachment,or Ultra-Low Attachmen

8、t Surface for reduced cell attachment第19页，本讲稿共24页Corning CellSTACK Chamber第20页，本讲稿共24页三种细胞工厂的比较材料：均为PS塑料表面处理：各自的Know-how顶层：DHS同Nunc,便于显微镜观察细胞生长情况焊接工艺：Nunc采用超声焊接，Corning采用特殊胶粘接，Corning的更加牢固（不易开裂），所以DHS采用Corning的粘接工艺只有DHS是可以定制任意层的细胞工厂第21页，本讲稿共24页细胞工厂的使用.easyfillNUNC_EasyFill_FINAL_WM_0510.wmv第22页，本讲稿共24页实验室应用：替代培养瓶及多层培养瓶第23页，本讲稿共24页细胞培养的评价贴壁率细胞生长密度细胞形态毒力测定第24页，本讲稿共24页