实验五氨基酸的分离鉴定滤纸层析法精品文稿.ppt
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1、实验五氨基酸的分离鉴定滤纸层析法第1页,本讲稿共21页一、实验目的一、实验目的 通过氨基酸的分离,学习纸通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作技术。层析法的基本原理及操作技术。第2页,本讲稿共21页二、实验原理二、实验原理 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的分配法。利用不同物质在两种互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离。系数不同而得到分离。展层剂由有机溶剂与水组成。在纸上,水被吸附展层剂由有机溶剂与水组成。在纸上,水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相,当有机相沿纸流动在纤维素的纤维之间形成固定相,
2、当有机相沿纸流动经过层析斑点时,层析点上的溶质就在有机相和水相经过层析斑点时,层析点上的溶质就在有机相和水相之间进行分配。当有机相不断流动时,溶质就沿着有之间进行分配。当有机相不断流动时,溶质就沿着有机相流动方向移动,不断进行分配,溶质中各组分的机相流动方向移动,不断进行分配,溶质中各组分的分配系数不同,移动速率不同,因而彼此分开。分配系数不同,移动速率不同,因而彼此分开。第3页,本讲稿共21页 各组分由于移动速度不同,物质被分离后在层析纸各组分由于移动速度不同,物质被分离后在层析纸上的位置也不同,可用上的位置也不同,可用Rf 值来表示:值来表示:原点到层析点中心距离原点到层析点中心距离 Rf
3、 原点到溶剂前沿的距离原点到溶剂前沿的距离 在一定的条件下某物质的在一定的条件下某物质的Rf值是常数,可作为定值是常数,可作为定性分析的依据。性分析的依据。Rf 值大小与样品物质的值大小与样品物质的结构性质结构性质、溶剂溶剂系统系统、层析滤纸的质量及、层析滤纸的质量及展层方式展层方式、温度、样品溶液中的、温度、样品溶液中的 杂质等因素有关。杂质等因素有关。第4页,本讲稿共21页物质结构与性质l物质的极性大小决定了物质在水和有机物质的极性大小决定了物质在水和有机相之间的分配情况,其极性的大小主要相之间的分配情况,其极性的大小主要取决于物质所具有的极性基团的性质和取决于物质所具有的极性基团的性质和
4、数量,在极性基团不改变情况下,非极数量,在极性基团不改变情况下,非极性基团成分越多,则分子极性越低等。性基团成分越多,则分子极性越低等。第5页,本讲稿共21页展层方式展层方式l上行法上行法l下行法下行法l环形法环形法(辐射法)辐射法)第7页,本讲稿共21页三、器材 层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、层析滤纸层析滤纸第8页,本讲稿共21页四、试剂四、试剂 1、扩展剂:按体积、扩展剂:按体积4:1:3的正丁醇:冰醋酸:水的正丁醇:冰醋酸:水混合后倒入分液漏斗中,充分振荡,静置后混合后倒入分液漏斗中,充分振荡,静置后分层排出水相分层排出水相 50 ml/组组 2、平衡剂
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