叶酸检测临床意义精品文稿.ppt

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1、叶酸检测临床意义第1页，本讲稿共22页叶酸简介叶酸简介叶酸（叶酸（folic acidfolic acid）,又名碟酰谷氨酸,维生素B族中的一种,亦称为维生素BC或维生素M.1941年被米切尔（H.K.Mitchell）从菠菜叶中提取纯化出来，故而命名为叶酸。叶酸的性质：分子量 441.4 熔点 250C 淡橙黄色结晶或薄片,较易溶于乙醇,酚嘧啶,氢氧化碱,和碳酸碱溶液.微溶于甲醇,少溶于乙醇和丁醇.叶酸在空中稳定,但受紫外光照射即分解失去活力.人体不能合成叶酸，必须依靠外源性供给。第2页，本讲稿共22页 叶酸（叶酸（folic acidfolic acid ）叶酸由喋呤啶叶酸由喋呤啶,对氨基

2、苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物 存在于自然界的叶酸有二氢叶酸和四氢叶酸两种形式存在于自然界的叶酸有二氢叶酸和四氢叶酸两种形式.而而在人体中只有四氢叶酸才具有生理功能在人体中只有四氢叶酸才具有生理功能.四氢叶酸是一碳单四氢叶酸是一碳单位的传递体位的传递体,而一碳单位是指在人体新陈代谢过程中含有一个碳而一碳单位是指在人体新陈代谢过程中含有一个碳原子的基团原子的基团,例如甲基例如甲基,羟甲基等羟甲基等.正是这些活跃的一碳单位四氢正是这些活跃的一碳单位四氢叶酸叶酸,参与了许多化合物的生成和代谢参与了许多化合物的生成和代谢.叶酸是各种酶中最活跃叶酸是各种酶中最活跃的基团的

3、基团,它几乎参与了所有生命的生化代谢过程它几乎参与了所有生命的生化代谢过程.第3页，本讲稿共22页 甲硫氨酸甲硫氨酸S-adenosylmethionineCystahionine半胱氨酸半胱氨酸(生成需要生成需要 Vit B6)Vit B6)叶酸与蛋氨酸代谢的循环叶酸与蛋氨酸代谢的循环AdenosineAdenosineTetrahydrofolate Folate,B12-dependent methionine synthaseFolate,B12-dependent methionine synthase(MS,(MS,甲硫酸合成酶甲硫酸合成酶)CH3THFCH2THFRemethyl

4、ationRemethylation食物中的蛋白质B6-dependent cystathionine b-synthase(CBS,B6-dependent cystathionine b-synthase(CBS,光硫酸縮合酶光硫酸縮合酶)Trans-sulfuration Trans-sulfuration Methyl transferaseMethyl transferaseHcyHcy转甲基Folate cycle（叶酸）Methionine Cycle(甲硫氨酸)第4页，本讲稿共22页叶酸在蛋氨酸循环中的重要作用叶酸在蛋氨酸循环中的重要作用 如果叶酸缺乏如果叶酸缺乏,5-,5-甲

5、基四氢叶酸合成不足甲基四氢叶酸合成不足,导致同型半导致同型半胱氨酸在体内堆积胱氨酸在体内堆积,高浓度的同型半胱氨酸能损坏血高浓度的同型半胱氨酸能损坏血管的内皮细胞管的内皮细胞,称为重要的心恼血管致病因素称为重要的心恼血管致病因素.同型半胱同型半胱氨酸作用于敏感的胚胎神经细胞氨酸作用于敏感的胚胎神经细胞,可造成无脑畸形和脊可造成无脑畸形和脊柱柱裂等中枢神经发育不良柱柱裂等中枢神经发育不良.第5页，本讲稿共22页人体叶酸的含量人体内叶酸总量约人体内叶酸总量约70mg,70mg,其中其中1/31/3在肝脏（每克组织在肝脏（每克组织约含约含55ug55ug）.血浆血清中叶酸含量血浆血清中叶酸含量3-2

6、1ng/ml.3-21ng/ml.按红细胞比容为按红细胞比容为45%45%校正时校正时,全血平均叶酸清单全血平均叶酸清单350ng/ml(350ng/ml(范围是范围是280-791ng/ml),280-791ng/ml),新生儿水平较高新生儿水平较高,在在2 2岁内下降岁内下降.早产婴儿更高早产婴儿更高,但下降也更快但下降也更快(特别是在特别是在4-84-8周时周时)血浆或血清中的叶酸含量受近期内食物的影响可血浆或血清中的叶酸含量受近期内食物的影响可高可低高可低,而红细胞中的叶酸含量比较稳定而红细胞中的叶酸含量比较稳定,可以反映出可以反映出人体内叶酸的营养状况人体内叶酸的营养状况.红细胞叶酸

7、达到红细胞叶酸达到280ng/ml280ng/ml以以上时，即便膳食中没有叶酸的摄入上时，即便膳食中没有叶酸的摄入,也可维持也可维持2-32-3个月不出现叶酸营养缺乏个月不出现叶酸营养缺乏.第6页，本讲稿共22页 人体内叶酸的重要作用人体内叶酸的重要作用1 1、对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质、对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质 的合成起重要作用。的合成起重要作用。2 2、对巨大红芽球性贫血和口炎性腹泻有疗效、对巨大红芽球性贫血和口炎性腹泻有疗效3 3、抗肿瘤作用、抗肿瘤作用4 4、对婴幼儿的神经细胞与脑细胞发育有促进作用、对婴幼儿的神经细胞与脑细胞发育有促进作用5 5、其他作用：可

8、作为精神分裂病人的辅助治疗剂，可、其他作用：可作为精神分裂病人的辅助治疗剂，可用于慢性萎缩性胃炎、抑制支器官鳞状转化以及防治因用于慢性萎缩性胃炎、抑制支器官鳞状转化以及防治因高同型半胱氨酸血症引起的冠状动脉粥样硬化、心肌损高同型半胱氨酸血症引起的冠状动脉粥样硬化、心肌损伤、心肌梗塞等。伤、心肌梗塞等。第7页，本讲稿共22页哪些药物可引起叶酸缺乏哪些药物可引起叶酸缺乏叶酸拮抗物：此类药物中以抗癌药叶酸拮抗物：此类药物中以抗癌药氨甲喋呤最重要，抗疟药乙胺嘧啶氨甲喋呤最重要，抗疟药乙胺嘧啶也具有抗叶酸作用。也具有抗叶酸作用。抗癫痫药抗癫痫药抗结核药和其他抗结核药和其他 第8页，本讲稿共22页 叶酸缺

9、乏的危害叶酸缺乏的危害 引起巨幼红细胞血症 皮肤病变：牛皮癣、疮疹状皮炎、酒渣鼻、湿 疹、剥脱性皮炎等。产科的障碍：孕妇体内叶酸缺乏是神经管畸形发生的主要病因。此外，还可导致眼、口唇、腭、胃肠道、主动脉、肾、骨胳等器官的畸形发生率增加。此外还发现，孕妇缺乏叶酸与胎盘早剥、自发性流产、先兆子痫、胎儿发育不良和低出生体重等到疾病有关。神经病变与精神障碍：叶酸的缺乏会显示精神病症候群，人会有情绪低落等现象。第9页，本讲稿共22页 食物中叶酸的摄取量 孕妇每天吃50克左右的动物肝脏或者200克的绿叶蔬菜即可满足一天叶酸的所需。如每天吃50克的鸡肝、30克的核桃、50克的豆类、500克的新鲜蔬菜，那么一

10、天的叶酸摄取量就相当可观了，而且完全来自天然食物，对胎儿的大脑、各个器官的发育非常有好处，无任何的毒副作用。第10页，本讲稿共22页 摄入叶酸过多能导致出现老年痴呆：是摄入叶酸过多能导致出现老年痴呆：是最近美国若施大学医学中心的玛塔最近美国若施大学医学中心的玛塔毛毛里斯博士通过研究发现的，这一结论让里斯博士通过研究发现的，这一结论让欧洲关于是否要在食品中添加叶酸的讨欧洲关于是否要在食品中添加叶酸的讨论进一步升温。论进一步升温。孕妇过量服用叶酸增加患乳腺癌的几率孕妇过量服用叶酸增加患乳腺癌的几率大剂量服用叶酸可降低血清中维生素大剂量服用叶酸可降低血清中维生素B12的含量。的含量。叶酸补充过量的危

11、害第11页，本讲稿共22页叶酸补充过量的危害大量叶酸可能导致人类基因改变：来自澳大利亚大量叶酸可能导致人类基因改变：来自澳大利亚奥林巴的纽卡斯尔大学的研究人员马克奥林巴的纽卡斯尔大学的研究人员马克.勒科克以勒科克以及英国利兹大学的佐薇及英国利兹大学的佐薇.耶茨在遗传学自然评论耶茨在遗传学自然评论上撰文指出，在食物中强化叶酸的做法可能会上撰文指出，在食物中强化叶酸的做法可能会慢慢地改变人口的基因组成，从而可能导致后代慢慢地改变人口的基因组成，从而可能导致后代对于一些致命性疾病的抵抗力减弱对于一些致命性疾病的抵抗力减弱叶酸补充过多使人年老时记忆减退叶酸补充过多使人年老时记忆减退 ：第12页，本讲稿

12、共22页人体叶酸的检测方法比较人体叶酸的检测方法比较检测方法优点缺点血清血清/浆叶酸测定浆叶酸测定直接测试血清/浆叶酸浓度受饮食影响较大红细胞叶酸测定红细胞叶酸测定法法能准确定量人体叶酸含量操作时需处理全血亚胺甲基谷氨酸亚胺甲基谷氨酸（FIGLUFIGLU）排泄实排泄实验验测试尿中的FIGLUFIGLU受试者需提前服用组氨酸20g，间接测试人体叶酸含量，准确性差叶酸吸收实叶酸吸收实验验定量尿中放射剂量受试者需注射同位素标记的叶酸15mg,不能反应人体叶酸的含量叶酸治疗性叶酸治疗性实验实验受试者每日服用定量叶酸，观察临床症状受试者需现在饮食中的叶酸第13页，本讲稿共22页市场上红细胞叶酸市场上红

13、细胞叶酸检测方法比较检测方法比较检测方法优点缺点高效液相色谱法检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快 ，应用范围广价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，流动相消耗大且有毒性的居多。时间分辨法 动态检测范围广，自动化程度高 对实验室条件和操作人员条件要求较高免疫化学发光检测 灵敏度较高，对低浓度叶酸样品检测结果明显高于其他方法 受检测环境影响较大 第14页，本讲稿共22页山东优生医疗红细胞山东优生医疗红细胞叶酸检测试剂盒叶酸检测试剂盒.检测方法：免疫化学发光试剂盒包装规格：48人份/盒检测原理：先将全血样本用抗坏血酸组成的溶解剂在机外进行处理，使红细胞中多谷氨酸叶酸形式转变成血清中占多数的单谷氨酸形式。

14、这样便可以是叶酸从内生蛋白中释放出来。叶酸结合蛋白、小鼠抗叶酸结合蛋白、叶酸-碱性磷酸酶结合物和顺磁性微粒包被的羊抗鼠捕获抗体一起添加到反应管中。样本中的叶酸与叶酸-碱性磷酸酶结合物争夺一定数量叶酸结合蛋白上的结合位点。产生的复合物再通过小鼠抗叶酸结合蛋白与固相结合。第15页，本讲稿共22页 在反应管内温育完成后进行冲洗，结合在固相上的物质将在一个磁场环境内被吸附在管上，而为结合的物质被冲洗除去。然后加化学发光底物LUMI-PHOS 530添加到反应管内，由光度计对反应中所产生的光进行测定。所测定光量子值与样本内叶酸的浓度成反比。样本内分析物的量有所储存的多点校准曲线来计算。第16页，本讲稿共

15、22页小鼠抗叶酸结合蛋白 顺磁颗粒包被羊抗鼠捕获抗体叶酸-碱性磷酸酶结合物叶酸结合蛋白化学发光底物叶酸Three stepThree step第17页，本讲稿共22页山东优生医疗山东优生医疗红细胞红细胞叶酸检测试剂盒叶酸检测试剂盒.操作方便：反应时间仅需40分钟试剂盒参考值：280-791ng/ml准确性样品FA加量（ng/ml）FA测量（ng/ml）回收率（%）110095.695.62200194.297.13400405.1101.3第18页，本讲稿共22页优生医疗与美国优生医疗与美国beckman叶酸试剂测试结果比较叶酸试剂测试结果比较标本编号性别年龄（岁）Beckman结果（ng/m

16、l）优生结果(ng/ml)1女4225.80201.42女28467.55449.63女26760.73759.04女34444.12535.05女28842.6805.16女32464.94465.77女251226.6310008男42187.19152.99男48194.41165.910女35444.06429.311男65243.36221.312女46308.91186.313男39342.80286.414女30194.39225.415女41198.43294.4优生试剂与beckman试剂符合率：阴阳符合率：86.7%第19页，本讲稿共22页优生叶酸试剂盒专用机器优生叶酸试剂

17、盒专用机器 500Test/小时实现了真正意义上的人机对话 成本较低可外接计算机进行数据输出第20页，本讲稿共22页 在今后一段时间内，叶酸将会成为医学、生物和化学研究在今后一段时间内，叶酸将会成为医学、生物和化学研究共同关注的焦点。有关叶酸的研究将很可能集中在叶酸的共同关注的焦点。有关叶酸的研究将很可能集中在叶酸的慢性毒性试验、叶酸预防神经管缺陷等出生缺陷及各种疾慢性毒性试验、叶酸预防神经管缺陷等出生缺陷及各种疾病的机制、叶酸的检测以及居民每日的叶酸摄入量等。其病的机制、叶酸的检测以及居民每日的叶酸摄入量等。其中最关键的是叶酸毒理学、居民每日叶酸摄入量以及叶酸中最关键的是叶酸毒理学、居民每日叶酸摄入量以及叶酸测定方法的研究。虽然已经补充了叶酸，出生缺陷新病例测定方法的研究。虽然已经补充了叶酸，出生缺陷新病例仍不断增加，但可以相信，随着研究的进一步深入，叶酸仍不断增加，但可以相信，随着研究的进一步深入，叶酸将会对预防出生缺陷做出更大的贡献。将会对预防出生缺陷做出更大的贡献。小 结第21页，本讲稿共22页Thanks for your attention!第22页，本讲稿共22页