食用菌母种精品文稿.ppt

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1、食用菌母种第1页，本讲稿共18页一、一、实验目的实验目的v 1 1、学习食用菌培养基的配方与制作方法、学习食用菌培养基的配方与制作方法v 2 2、掌握培养基的消毒与灭菌，母种移接的操、掌握培养基的消毒与灭菌，母种移接的操 作技术和方法。作技术和方法。第2页，本讲稿共18页二二 实验材料实验材料v 超净工作台、电热恒温培养箱超净工作台、电热恒温培养箱、玻璃漏斗、漏斗架、玻璃漏斗、漏斗架、铝锅、电炉铝锅、电炉1 000 rnJ1 000 rnJ量杯、纱布、棉塞、量杯、纱布、棉塞、18mm180 mm18mm180 mm试管、细线绳、牛皮纸、刀、马铃薯、试管、细线绳、牛皮纸、刀、马铃薯、葡萄糖或蔗糖

2、、琼脂、酒精灯、葡萄糖或蔗糖、琼脂、酒精灯、7575酒精消毒瓶、酒精消毒瓶、7575酒精消毒棉瓶、接种针、火柴、记号笔。酒精消毒棉瓶、接种针、火柴、记号笔。第3页，本讲稿共18页 三、实验内容与方法三、实验内容与方法v常用配方：常用配方：v 1 1、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA(PDA培养基培养基)：v马铃薯马铃薯(去皮去皮)100 g)100 g，蔗糖，蔗糖10 g10 g，琼脂，琼脂9 910 g10 g，水，水500ml500ml，pHpH自然。自然。v 2 2、马铃薯综合培养基：马铃薯、马铃薯综合培养基：马铃薯(去皮去皮)100 g)100 g，蔗糖，蔗糖10

3、 g10 g，琼脂，琼脂9 910 g10 g，硫酸镁硫酸镁0.8g,0.8g,磷酸二氫钾磷酸二氫钾1.5g1.5g，水，水500ml500ml，pHpH自然自然第4页，本讲稿共18页配配 制制 方方 法法v 1 1、先将马铃薯洗净，去皮，挖掉芽眼，称取、先将马铃薯洗净，去皮，挖掉芽眼，称取100 g100 g，切成，切成1cm1cm见方的见方的小块或薄片。小块或薄片。v 2 2、将切好的马铃薯块放人铝锅内或大烧杯中，加水、将切好的马铃薯块放人铝锅内或大烧杯中，加水500 mL500 mL放在电炉上放在电炉上煮沸后维持煮沸后维持151520min20min，至马铃薯熟而不烂。，至马铃薯熟而不烂

4、。v 3 3、用、用4 4层湿纱布层湿纱布(纱布需浸水后拧干纱布需浸水后拧干)过滤，由于马铃薯在煮沸过程过滤，由于马铃薯在煮沸过程中，有部分水被蒸发掉，所以过滤后的马铃薯汁，应加水补足水中，有部分水被蒸发掉，所以过滤后的马铃薯汁，应加水补足水分至分至500 mL500 mL。v4 4、将称好的琼脂加人马铃薯汁中，在电炉用文水煮，直至琼脂、将称好的琼脂加人马铃薯汁中，在电炉用文水煮，直至琼脂完全融化为止完全融化为止(边煮边搅拌边煮边搅拌)。最后加入蔗糖等可溶性物质，搅匀。最后加入蔗糖等可溶性物质，搅匀。第5页，本讲稿共18页v5 5、分装试管，培养基配好后应趁热用分装漏斗分装试管，培养基配好后应

5、趁热用分装漏斗进行分装试管，装入试管高度的进行分装试管，装入试管高度的1 15 51 14 4，分，分装时应注意不得使培养基黏在试管的口壁上，以装时应注意不得使培养基黏在试管的口壁上，以防污染杂菌。防污染杂菌。v6 6、塞棉塞，培养基分装完以后应立即塞上大小合、塞棉塞，培养基分装完以后应立即塞上大小合适的棉塞，棉塞应塞人试管内适的棉塞，棉塞应塞人试管内2 23 3，外留，外留l/3l/3。7 7、扎把，将塞好棉塞的试管、扎把，将塞好棉塞的试管7 7支或支或9 9支扎成一把，支扎成一把，在棉塞外面包一层牛皮纸，再用线绳扎紧，防止在棉塞外面包一层牛皮纸，再用线绳扎紧，防止灭菌时棉塞被冷凝水浸湿。灭

6、菌时棉塞被冷凝水浸湿。配配 制制 方方 法法第6页，本讲稿共18页灭灭 菌菌 1、先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直先在外锅加入适量的水，然后将灭菌物品直立放人内锅，试管口向上且不要贴锅边，避免冷立放人内锅，试管口向上且不要贴锅边，避免冷凝水浸人试管。灭菌物品不要装得太满，留出一凝水浸人试管。灭菌物品不要装得太满，留出一定空间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。定空间，便于蒸汽流通，否则易造成灭菌不彻底。v2 2、盖上锅盖，盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插、盖上锅盖，盖锅盖时应将锅盖上的排汽管插人锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的人锅内壁管孔内，然后对角线方向拧紧锅盖上的螺丝，并将放汽

7、阀直立打开，安全阀横向关闭。螺丝，并将放汽阀直立打开，安全阀横向关闭。v3 3、将灭菌锅加热，当锅内蒸汽大量排出时再继、将灭菌锅加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽续排汽3 35 min,5 min,关闭放气阀。关闭放气阀。第7页，本讲稿共18页v 4 4、当压力表指针指到当压力表指针指到0.1-0.15Mpa 0.1-0.15Mpa 处时处时(灭菌所需压强灭菌所需压强)开始计时，继续开始计时，继续维持该压强维持该压强202030min30min。灭菌结束待压力表指针自然回到。灭菌结束待压力表指针自然回到“0 0”位时打开放位时打开放汽阀，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到汽阀

8、，排出锅内剩余蒸汽后，打开锅盖。注意切忌在压力表未到“0 0”位时就放汽，位时就放汽，以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。以免试管内的培养基向上冲浸湿棉塞，造成以后菌种的污染。v 5 5、摆斜面，试管取出后一定要趁热摆斜面，将试管斜放在木板上，摆斜面，试管取出后一定要趁热摆斜面，将试管斜放在木板上，使试管内培养基成一斜面。斜面的长度一般为试管长度的使试管内培养基成一斜面。斜面的长度一般为试管长度的3 35 5。用于保。用于保藏菌种的试管斜面应适当短些，以减少蒸发面积。气温较低时，在摆好的斜面上面藏菌种的试管斜面应适当短些，以减少蒸发面积。气温较低时，在摆好的斜面上面覆盖一条厚

9、毛巾，以免在试管壁上产生大量水珠，影响接种和培养。当培养基冷凝覆盖一条厚毛巾，以免在试管壁上产生大量水珠，影响接种和培养。当培养基冷凝后，即可收起备用。后，即可收起备用。灭灭 菌菌第8页，本讲稿共18页接接 种种 和和 培培 养养v 1 1、左手平托两支试管，手指按住试管底部，外侧一支是供接种用的、左手平托两支试管，手指按住试管底部，外侧一支是供接种用的菌种试管，内侧一支是待接母种的试管。菌种试管，内侧一支是待接母种的试管。v 2 2、右手拿接种针，用拇指、食指和中指握住其柄部，将接种针插入、右手拿接种针，用拇指、食指和中指握住其柄部，将接种针插入7575的酒精消毒瓶中消毒，在酒精灯火焰上灼烧

10、接种针的顶端，逐渐将杆的酒精消毒瓶中消毒，在酒精灯火焰上灼烧接种针的顶端，逐渐将杆部也在火焰上慢慢通过，这样反复部也在火焰上慢慢通过，这样反复3 3次即可将接种针彻底灭菌，切记最次即可将接种针彻底灭菌，切记最后一次灼烧后不能再浸人酒精瓶中，应在火焰旁自然冷却。后一次灼烧后不能再浸人酒精瓶中，应在火焰旁自然冷却。v 3 3、将左手平托的两支试管管口靠近火焰，用右手的小指和手掌将外、将左手平托的两支试管管口靠近火焰，用右手的小指和手掌将外侧的菌种管上的棉塞拔出，再用中指和无名指拔出内侧试管口上的棉侧的菌种管上的棉塞拔出，再用中指和无名指拔出内侧试管口上的棉塞夹在手中塞夹在手中(不得放在桌子上或台面

11、上不得放在桌子上或台面上)，将两支试管口迅速移到酒精灯火，将两支试管口迅速移到酒精灯火焰旁边。焰旁边。第9页，本讲稿共18页v 4 4、将烧过并冷却的接种针伸入母种试管中，在菌丝斜面上、将烧过并冷却的接种针伸入母种试管中，在菌丝斜面上勾取火柴头大小的一块菌丝块，迅速放到待接试管斜面的中部，勾取火柴头大小的一块菌丝块，迅速放到待接试管斜面的中部，将试管口在火焰上烧一下，然后立即塞上棉塞。将试管口在火焰上烧一下，然后立即塞上棉塞。v 5 5、接种完毕，再将接种针在火焰上灼烧灭菌。以免使接种、接种完毕，再将接种针在火焰上灼烧灭菌。以免使接种的菌丝扩散，造成污染。的菌丝扩散，造成污染。v 6 6、菌种

12、接完后。贴好标签或用记号笔在试管壁上注明菌、菌种接完后。贴好标签或用记号笔在试管壁上注明菌种名称及接种日期等。种名称及接种日期等。7 7、将同类菌种扎好，送到该菌所要求的最适温度下、将同类菌种扎好，送到该菌所要求的最适温度下(恒温箱或恒恒温箱或恒温室内温室内)培养，一般培养培养，一般培养2 d2 d，检查有无杂菌生长，检查有无杂菌生长，7 715 d15 d母种菌母种菌丝即可长满斜面。丝即可长满斜面。接种和培养接种和培养第10页，本讲稿共18页母母 种种 质质 量量 检检 查查v 通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种成通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种成功

13、。若在试管斜面上出现有光泽，黏液状培养物或呈黄、绿、灰、黑功。若在试管斜面上出现有光泽，黏液状培养物或呈黄、绿、灰、黑等毛状物时，即是圬染，不能使用。优良菌种的感观应具备等毛状物时，即是圬染，不能使用。优良菌种的感观应具备“纯、正、纯、正、壮、润、香壮、润、香”的特点；的特点；“纯纯”指菌种的纯度高，无感染杂菌，无斑块，无抑指菌种的纯度高，无感染杂菌，无斑块，无抑制线，无制线，无“退菌、断菌退菌、断菌”现象；现象；“正正”指菌丝生长无异常，具有亲本正宗的指菌丝生长无异常，具有亲本正宗的特点；特点；“壮壮”指菌丝发育粗壮，长势旺盛，有力；指菌丝发育粗壮，长势旺盛，有力；“润润”指菌种含水量适中，

14、指菌种含水量适中，无干缩、松散现象；无干缩、松散现象；“香香”指具有品种特有的香味，无异味。而菌种生产指具有品种特有的香味，无异味。而菌种生产性能性能(产量高低、品质优劣、抗逆性强弱产量高低、品质优劣、抗逆性强弱)的考核，通常只有根据栽培试的考核，通常只有根据栽培试验的结果才能得出结论。验的结果才能得出结论。第11页，本讲稿共18页四、作四、作 业业v 1.1.如何获得优质的母种如何获得优质的母种?v 2.2.如何提高母种移接的成功率如何提高母种移接的成功率?第12页，本讲稿共18页实验二实验二 食用菌的组织分离技术食用菌的组织分离技术第13页，本讲稿共18页一、实验目的一、实验目的v 通过组

15、织分离实验，使同学们掌握组织分离的通过组织分离实验，使同学们掌握组织分离的方法和技术。方法和技术。第14页，本讲稿共18页二、实验材料二、实验材料v 超净工作台、恒温箱、母种试管斜面培养基、超净工作台、恒温箱、母种试管斜面培养基、75酒精消毒棉球瓶、酒精灯、镊子、解剖刀酒精消毒棉球瓶、酒精灯、镊子、解剖刀(或或剃须刀片剃须刀片)、接种针、待分离的菇种、火柴、记号、接种针、待分离的菇种、火柴、记号笔。笔。第15页，本讲稿共18页三、实验内容与方法三、实验内容与方法v 1.选择品质优良，朵形正常、肉厚、无病虫的种菇供组织选择品质优良，朵形正常、肉厚、无病虫的种菇供组织分离。分离时以幼菇分离。分离时

16、以幼菇(六七分成熟六七分成熟)为好，它的组织再生能力强。为好，它的组织再生能力强。此外，实践证明风干的子实体也可进行组织分离。此外，实践证明风干的子实体也可进行组织分离。v 2.分离时应在接种室或超净工作台内进行。先用酒精棉球将手擦分离时应在接种室或超净工作台内进行。先用酒精棉球将手擦拭消毒，再用镊子夹取酒精棉球将菇正、反面消毒。拭消毒，再用镊子夹取酒精棉球将菇正、反面消毒。v 3.用手将菌柄撕开，但手千万不得碰撕裂面，避免杂菌污染。用手将菌柄撕开，但手千万不得碰撕裂面，避免杂菌污染。第16页，本讲稿共18页三、实验内容与方法三、实验内容与方法v 4.将解剖刀经酒精灯火焰灭菌后，从菌柄和菌盖交

17、界部位切取大将解剖刀经酒精灯火焰灭菌后，从菌柄和菌盖交界部位切取大豆或绿豆粒大小的组织块。以无菌操作方法，将切取的组织块用接豆或绿豆粒大小的组织块。以无菌操作方法，将切取的组织块用接种针移至母种试管斜面培养基。此外，用接种钩直接勾取一小块组种针移至母种试管斜面培养基。此外，用接种钩直接勾取一小块组织移至母种试管斜面培养基，分离效果也很好。织移至母种试管斜面培养基，分离效果也很好。v 5.塞好棉塞，注明菇种、分离日期及地点。塞好棉塞，注明菇种、分离日期及地点。v 6.放到温度适宜的温箱中培养，放到温度适宜的温箱中培养，12 d后，检查有无污染，后，检查有无污染，发现污染及时挑出。一般发现污染及时

18、挑出。一般7lO d，菌丝即可长满斜面。如需纯，菌丝即可长满斜面。如需纯化，再挑取尖端菌丝移接到母种试管斜面培养基进行培养。化，再挑取尖端菌丝移接到母种试管斜面培养基进行培养。第17页，本讲稿共18页组织分离的质量检查组织分离的质量检查v 组织分离后的试管斜面，经过组织分离后的试管斜面，经过710 d培养后，培养后，若在斜面上或组织块周围，没有任何杂菌生长，若在斜面上或组织块周围，没有任何杂菌生长，只有从组织块上长出的洁白、粗壮纯净的菌丝体，只有从组织块上长出的洁白、粗壮纯净的菌丝体，说明组织分离成功。经过再次移接，生产试验，说明组织分离成功。经过再次移接，生产试验，性状表现优良，即可做母种使用；相反，若有其性状表现优良，即可做母种使用；相反，若有其他杂菌生长，说明组织分离时消毒不彻底或无菌他杂菌生长，说明组织分离时消毒不彻底或无菌操作不严格，使得组织分离失败。操作不严格，使得组织分离失败。第18页，本讲稿共18页