男科学实验室诊断进展精选课件.ppt

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1、关于男科学实验室诊断进展第一页，本课件共有52页精液分析是评价男性生育能力的最精液分析是评价男性生育能力的最基本检验手段。理论上，精液分析是一基本检验手段。理论上，精液分析是一个很简单的操作过程，只要将一滴精液个很简单的操作过程，只要将一滴精液置于玻片上，进而确定其相关参数即可。置于玻片上，进而确定其相关参数即可。然而，实际上，精液分析所得的每一个然而，实际上，精液分析所得的每一个参数都需要大量的专业知识、细致认真参数都需要大量的专业知识、细致认真的操作及必要的质量控制措施。的操作及必要的质量控制措施。第二页，本课件共有52页KeelKeel等报告了美国纽约、哥伦比亚、洛山矶、等报告了美国纽约

2、、哥伦比亚、洛山矶、明尼苏达几百家男科实验室对精子密度、形态学、明尼苏达几百家男科实验室对精子密度、形态学、活率及抗精子抗体的室间质量控制结果，精子密活率及抗精子抗体的室间质量控制结果，精子密度的结果显示，一份精液标本的精子密度差异范度的结果显示，一份精液标本的精子密度差异范围达围达3 492103 492106 6/ml/ml，手工检测的变异系数，手工检测的变异系数（CVCV）为）为30%138%30%138%，计算机辅助的精液分析，计算机辅助的精液分析（CASACASA）的）的CVCV为为24%99%24%99%。不同实验室精子密。不同实验室精子密度的较大差异提示，精子计数方法的不同、计度

3、的较大差异提示，精子计数方法的不同、计数池种类的不同以及操作的标准化对精子计数数池种类的不同以及操作的标准化对精子计数结果有着直接的影响。结果有着直接的影响。第三页，本课件共有52页一、精液常规检查 1、精液检测工具不断更新 （1 1）血细胞计数板 沿用5050余年余年 （2 2）Makler精子计数板 19781978年以色列Makler发明发明 （3 3）Macro精子计数板精子计数板 （4 4）MicrocellMicrocell计计数数池池 1990年年 Ginabury和和ArmandArmand发明发明 一次性使用一次性使用 （5 5）2004年，美国Millennium Mill

4、ennium SciencesSciences公司Cell-VUCell-VU精子记数池和Cell-VUCell-VU预染色形态载波片。第四页，本课件共有52页计算机辅助的精液分析计算机辅助的精液分析 80年代发展的新技术，除可分析精子密度、活动百分率等指标外，在分析精子运动能力方面显示了其独特的优越性。第五页，本课件共有52页第六页，本课件共有52页第七页，本课件共有52页第八页，本课件共有52页第九页，本课件共有52页第十页，本课件共有52页第十一页，本课件共有52页第十二页，本课件共有52页全自动精子分析仪（以色列）Medical Electronic Systems第十三页，本课件共有

5、52页用已知浓度的乳胶珠溶液对用已知浓度的乳胶珠溶液对目前国际上常用的种精子计数目前国际上常用的种精子计数池进行了评价。池进行了评价。种精子计数池的质量评估种精子计数池的质量评估第十四页，本课件共有52页1 1 材料与方法材料与方法1.1 1.1 实验材料实验材料 uCell-VU计数池计数池（Millennium Sciences IncMillennium Sciences Inc，New YorkNew York，USAUSA）uMakler计数池计数池（Sefi-Medical InstrumentSefi-Medical Instrument，HaifaHaifa，IsraelIsr

6、ael）u血球计数池血球计数池（上海求精生化试剂仪器有限公司）上海求精生化试剂仪器有限公司）u标准乳胶珠溶液标准乳胶珠溶液（Hamilton Thorne BiosciencesHamilton Thorne Biosciences，USAUSA）2份，浓度分别为：u（355）106/ml，（182.5）106/ml。第十五页，本课件共有52页1.1.方法方法1.2.1 Cell-VU计数法1.2.2 Makler计数法 1.2.3 血球计数池法 1.1.统计学分析统计学分析 不同计数池的计数结果以不同计数池的计数结果以xs表示，样本均数的比较采用t检验检验 第十六页，本课件共有52页2 2

7、结果结果ChamberChambern nConcentration Concentration forstandard solution 1forstandard solution 1Concentration Concentration forstandard solution 2forstandard solution 2Cell-VUCell-VU303037.634.8937.634.8918.221.7718.221.77HemacytoHemacytometermeter303042.744.9842.744.98*20.481.5620.481.56*MaklerMakler1

8、51553.526.6753.526.67*24.974.7524.974.75*表表1 不同精子计数池的乳胶珠浓度不同精子计数池的乳胶珠浓度与Cell-VU计数池相比，*：P0.001；与血球计数池相比，：P1106/ml，可诊断为白细胞精子症 白细胞可通过吞噬作用、产生活性氧（ROS）、分泌一些细胞因子等途径使精子损伤。精液中粒细胞为产生ROS的主要细胞。第二十五页，本课件共有52页精液中白细胞的检测方法；1、对、对ROSROS的检测：依赖鲁米诺的化学发光分析法2、直接镜检法 3、瑞、瑞-姬染色或巴氏染色法染色姬染色或巴氏染色法染色 4、过氧化物酶染色法（正甲苯胺兰、联苯胺及邻甲苯胺、过氧

9、化物酶染色法（正甲苯胺兰、联苯胺及邻甲苯胺过氧化物酶染色）过氧化物酶染色）5、荧光原位杂交法、荧光原位杂交法 6 6、免疫细胞化学法、免疫细胞化学法 CD45，CD4，CD8CD87、弹性蛋白酶、IL-8及溶菌酶测定 第二十六页，本课件共有52页四、免疫性不育的检测 检检测测方方法法很很多多，3 3种种类类别别的的抗抗精精子子抗抗体体均均可可测测，检检测测的的抗抗精精子子抗抗体体为为总总的的或或各各种种类类别别的的抗抗精精子子膜膜抗抗原原的的抗抗体体，而而精精子子膜膜与与人人体体其其他他器器官官组组织织的的细细胞胞膜膜有有许许多多共共同同抗抗原原，因因而而这这种种抗抗原原抗抗体体反反应应的的特

10、特异异性性不不高高。如如果果用用针针针针对对对对精精精精子子子子或或或或睾睾睾睾丸丸丸丸特特特特异异异异性性性性抗抗抗抗原原原原，或或或或针针针针对对对对与与与与透透透透明明明明带带带带识识识识别别别别和和和和结结结结合合合合有有有有关关关关的抗原作为包被抗原的抗原作为包被抗原的抗原作为包被抗原的抗原作为包被抗原来检测来检测AsAbAsAb，其临床意义就会很大。，其临床意义就会很大。NazNaz等等用用现现代代分分子子生生物物学学技技术术确确定定，受受精精抗抗原原FA-1FA-1和和YLPYLP（1212）具具有有此此特特性性，并并且且它它们们的的抗抗体体存存在在于于不不育育男男性性的的精精浆

11、浆和和血血清清中建立这种特异性诊断方法是今后取代总中建立这种特异性诊断方法是今后取代总AsAbAsAb检测的唯一途径。检测的唯一途径。第二十七页，本课件共有52页五、生殖道感染的检测生殖道感染的检测 大大肠肠杆杆菌菌、葡葡萄萄球球菌菌、链链球球菌菌、绿绿脓脓杆杆菌菌、淋淋球球菌菌、肺肺炎炎克克雷雷伯伯氏氏菌菌、结结核核杆杆菌菌、衣衣原原体体、支支原原体体、单单纯纯疱疱疹疹病病毒毒、人人乳乳头头瘤瘤病病毒毒、腺腺相相关关病病毒毒、阴阴道道毛毛滴滴虫虫等等皆皆可可感感染染生生殖殖道道，而而且可致不育。且可致不育。各各种种细细菌菌感感染染，往往往往通通过过菌菌体体本本身身及及其其释释放放出出的的毒毒

12、素素、酶类等影响精子质量酶类等影响精子质量 病病毒毒的的感感染染更更为为隐隐蔽蔽临临床床实实验验室室多多用用ELISAELISA法法检检测测各各种种病病毒毒的抗体，通过抗体的分型可粗略判断病毒的感染时期的抗体，通过抗体的分型可粗略判断病毒的感染时期 第二十八页，本课件共有52页衣原体和支原体感染被认为是最常见的性传播疾病（STD）病原与与男男性性不不育育密密切切相相关关的的衣衣原原体体为为沙眼衣原体（CTCT），其其可可引引起起急急性性附附睾睾炎炎和和慢慢性性前前列列腺腺炎炎等等。目目前前，检检测测沙沙眼眼衣衣原原体体感感染染的的方方法法主主要要有有金金标标法法、ELISAELISA法及培养法

13、，尤以ELISA法最为常用法最为常用与与男男性性不不育育密密切切相相关关的的支支原原体体为为解解脲脲支支原原体体临床实验室多采用培养法检测。第二十九页，本课件共有52页六、精浆生化的检测精浆生化的检测 精精浆浆中中的的一一些些生生化化标标志志可可反反映映男男性性附附属属性性腺腺、附附睾睾及及睾睾丸生精功能等，有利于综合评价不育的发病原因和机制。丸生精功能等，有利于综合评价不育的发病原因和机制。例例如如，柠柠檬檬酸酸、锌锌、镁镁、谷谷氨氨酰酰转转肽肽酶酶和和酸酸性性磷磷酸酸酶酶可可反反映映前前列列腺腺功功能能，其其中中的的酸酸性性磷磷酸酸酶酶检检测测已已成成为为男男科科实实验验室室的常规检查，常

14、用磷酸苯二钠法；的常规检查，常用磷酸苯二钠法；果果糖糖与与前前列列腺腺素素可可反反映映精精囊囊腺腺功功能能，常常用用间间苯苯二二酚酚法法检检测果糖；测果糖；游游离离左左旋旋肉肉毒毒碱碱、甘甘油油磷磷酸酸胆胆碱碱和和-葡葡糖糖苷苷酶酶可可反反映映附睾功能。附睾功能。第三十页，本课件共有52页精浆总精浆总-葡糖苷酶检测中应注意葡糖苷酶检测中应注意3 3点点离心速度不同，精浆总-葡糖苷酶活性有所差异 精浆总精浆总-葡糖苷酶活性与禁欲时间的长短密切相关 精浆总精浆总-葡糖苷酶活性的检测应进行质量控制葡糖苷酶活性的检测应进行质量控制 第三十一页，本课件共有52页不同速度离心后的精浆中不同速度离心后的精浆

15、中葡糖苷酶水平葡糖苷酶水平第三十二页，本课件共有52页禁欲时间对精浆葡糖苷酶的影响Abstinence Abstinence time(day)time(day)n nAlpha-glucosidase(U/ml)Alpha-glucosidase(U/ml)Seminal plasma(1 000 g for 10 min)Seminal plasma(3 000 g for 15 min)Seminal plasma(1 000 g for 10 min)Seminal plasma(3 000 g for 15 min)2 32 3121236.4712.2436.4712.2434.0

16、411.2234.0411.224 54 5161649.6216.8649.6216.86*47.7317.3747.7317.37*6 76 7141451.1419.7651.1419.76*46.7617.7046.7617.70*8 89 968.7014.1068.7014.10*#*#63.8613.6363.8613.63*#*#第三十三页，本课件共有52页精浆果糖检测中应注意4点：果糖标准液配制后应放置果糖标准液配制后应放置2周后使用，而使用2周 后出现吸光度降低时应立即更换新的果糖标准液 离心速度不同精浆果糖浓度稍有差异精液液化后应立即离心将精子和精浆分离，否则会精液液化后

17、应立即离心将精子和精浆分离，否则会影响精浆果糖检测结果影响精浆果糖检测结果 精浆果糖测定中应引入质量控制体系精浆果糖测定中应引入质量控制体系第三十四页，本课件共有52页果糖标准液吸光度的监测果糖标准液吸光度的监测第三十五页，本课件共有52页精液精液 放置时间对果糖浓度的影响放置时间对果糖浓度的影响 GroupnFructose(mmol/L)0 h4815.736.562 h4815.076.56a a4 h4814.736.51b,cb,c第三十六页，本课件共有52页精浆稀释后放置时间对酸性磷酸酶活精浆稀释后放置时间对酸性磷酸酶活性的影响性的影响 随机选取随机选取随机选取随机选取101010

18、10例精浆，例精浆，例精浆，例精浆，110 000110 000110 000110 000稀释后稀释后稀释后稀释后立即检测立即检测立即检测立即检测ACPACPACPACP活性或稀释活性或稀释活性或稀释活性或稀释后后后后放置放置放置放置30 min30 min30 min30 min再次检测再次检测再次检测再次检测ACPACP活性，两者比较有活性，两者比较有活性，两者比较有活性，两者比较有极显著性差异极显著性差异极显著性差异极显著性差异（t t t t 3.7703.7703.7703.770，P P P P 0.0010.0010.0010.001）。）。）。）。第三十七页，本课件共有52页

19、 抑制素抑制素B B被认为是男性精子发生的血清标志物。被认为是男性精子发生的血清标志物。成年男性血清中维持可检测的抑制素成年男性血清中维持可检测的抑制素B B水平需要生精细胞水平需要生精细胞的存在，唯支持细胞综合征（的存在，唯支持细胞综合征（SCOSCO）男性血清抑制素）男性血清抑制素B B水平极低。水平极低。Brugo-OlmedoBrugo-Olmedo等认为血清抑制素等认为血清抑制素B B在预言非阻塞性无精子症在预言非阻塞性无精子症病人的睾丸精子存在时比血清病人的睾丸精子存在时比血清FSHFSH更准确。更准确。除此之外，抑制素除此之外，抑制素B B还可用于儿童隐睾、性早熟的诊断，监测还可

20、用于儿童隐睾、性早熟的诊断，监测放、化疗对男性生精功能的损伤等。放、化疗对男性生精功能的损伤等。目前，抑制素目前，抑制素B B的检测通常使用的检测通常使用双抗体夹心双抗体夹心ELISAELISA法。法。第三十八页，本课件共有52页七、精浆细胞因子的检测精浆细胞因子的检测 精精浆浆细细胞胞因因子子由由男男性性泌泌尿尿生生殖殖道道内内的的各各种种细细胞胞分分泌泌，包包括括转转化化生生长长因因子子（TGFTGF）、表表皮皮生生长长因因子子（EGFEGF）、肿瘤坏死因子（TNFTNF）、各各种种白白细细胞胞介介素素（IL）及及某某些些可可溶溶性性受受体体等等。目目前前认认为为，与与男男性性不不育育有有

21、关关的的细细胞胞因因子子主主要要有有IL-6IL-6和和IL-8IL-8，不不育育病病人人精精浆浆中中IL-6和IL-8IL-8水平明显高于生育力正常的男性。测测定定IL-6IL-6和IL-8的方法有：生物学方法、分子生物学方法和免疫学方法，以免疫学方法多用，尤以ELISA和RIA常用。常用。第三十九页，本课件共有52页 八、精子发生相关基因的检测精子发生相关基因的检测 与与精精子子发发生生相相关关的的基基因因很很多多，无无精精子子病病人人的的基基因因缺缺失失均均发发生生于于Y Y染染色色体体的的长长臂臂,主主要要位位于于Yq11.23Yq11.23中中，而而且且并并非非是是单单一一基基因，可

22、能含有整个基因大家族。因，可能含有整个基因大家族。19961996年年，VogtVogt等等人人在在更更大大范范围围对对无无精精子子、少少精精子子病病人人进进行行了了研研究究，认认为为在在3 3个个区区域域均均存存在在AZFAZF，分分别别为为AZFaAZFa，AZFbAZFb，AZFcAZFc，对对这这些些病病人人睾睾丸丸活活检检发发现现，睾睾丸丸的的病病理理改改变变与与AZFAZF的缺失部位有显著相关性的缺失部位有显著相关性。AZFaAZFa：Sy84,Sy86 Sy84,Sy86 AZFb AZFb：Sy124Sy124，Sy127Sy127，Sy132,Sy134Sy132,Sy134

23、 AZFc AZFc：Sy152Sy152，Sy157Sy157，Sy239Sy239，Sy242Sy242，Sy254Sy254，Sy255Sy255 第四十页，本课件共有52页AZF检测：SRY存在于基因组中，Yq上的AZFa,b,c 区域的位点全部丢失 病人 正常男性 正常女性 空白对照第四十一页，本课件共有52页九、遗传学检测遗传学检测 男性不育的遗传学检测主要是检测精子染色体的异常。常常规规使使用用染色体显带技术，如如G带带、Q带等技术，然而其敏感度不及FISHFISH技术 FISHFISH技术可用于研究复杂染色体突变如性染色体异常、未知的小标志物、环状染色体、嵌合体及易位等 Y Y

24、染色体长臂特异区的微缺失与不育相关 第四十二页，本课件共有52页病例：46，XX/46,XY异源嵌合体导致真两性畸形腹腔镜检查发现：腹腔镜检查发现：子宫正常大小，发育良好子宫正常大小，发育良好左右性腺均约432cm，中中间间均均为为黄黄色色组组织织，两两端端为为白白色色组组织织。未未见见排排卵卵痕痕迹迹。双双侧侧输输卵卵管管发发育育好好，均均有游离伞端有游离伞端术中探察阴道深度约7cm.7cm.腹股沟管内未见睾丸及其它男性性器官腹股沟管内未见睾丸及其它男性性器官第四十三页，本课件共有52页卵睾和输卵管，白色组织为睾丸组织，黄色为卵巢组织第四十四页，本课件共有52页核型分析：46，XX第四十五页

25、，本课件共有52页核型分析：46，XY第四十六页，本课件共有52页外周血淋巴细胞:FISH（X/Y着丝粒探针）：有XX和XY 的细胞第四十七页，本课件共有52页皮肤成纤维细胞:FISH（X/Y着丝粒探针）：有XX和XY 的细胞第四十八页，本课件共有52页睾丸成纤维细胞FISH:（X/Y着丝粒探针）：有XX和XY 的细胞第四十九页，本课件共有52页卵巢成纤维细胞卵巢成纤维细胞:FISHX/Y着丝粒探针）：有XXXY 的细胞第五十页，本课件共有52页结结 论论 男男男男性性性性不不不不育育育育是是是是最最最最常常常常见见见见的的的的而而而而且且且且可可可可以以以以鉴鉴鉴鉴定定定定的的的的人人人人类

26、类类类生生生生育育育育失失失失败败败败的的的的原原原原因因因因之之之之一一一一。尽尽尽尽管管管管对对对对精精精精子子子子生生生生理理理理学学学学和和和和精精精精子子子子与与与与配配配配子子子子相相相相互互互互作作作作用用用用的的的的生生生生物物物物学学学学过过过过程程程程的的的的研研研研究究究究已已已已取取取取得得得得很很很很大大大大进进进进展展展展，各各各各种种种种各各各各样样样样的的的的检检检检测测测测方方方方法法法法层层层层出出出出不不不不穷穷穷穷，但但但但目目目目前前前前更更更更多多多多的的的的工工工工作作作作应应应应着着着着重重重重于于于于确确确确定定定定那那那那些些些些预预预预言言

27、言言精精精精子子子子特特特特征征征征十十十十分分分分准准准准确确确确、与与与与配配配配子子子子受受受受精精精精能能能能力力力力密密密密切切切切相相相相关关关关的的的的临临临临床床床床男男男男科科科科诊诊诊诊断断断断实实实实验验验验，并并并并应应应应对对对对这这这这些些些些实实实实验验验验的的的的客客客客观观观观性性性性进进进进行行行行评评评评价价价价，这这这这些些些些实实实实验验验验应应应应简简简简便便便便、经经经经济济济济实实实实用用用用、并并并并提提提提供供供供一一一一致致致致的的的的结结结结果果果果，而而而而且且且且应应应应对它们标准化对它们标准化对它们标准化对它们标准化。第五十一页，本课件共有52页感谢大家观看第五十二页，本课件共有52页