胚胎工程实验技术 (2)精选课件.ppt
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1、关于胚胎工程实验技术(2)第一页,本课件共有73页(4)(4)胚胎发育过程中胚胎发育过程中开始分化的阶段是囊胚开始分化的阶段是囊胚,可可以以移植或分割的阶段为桑椹胚和囊胚移植或分割的阶段为桑椹胚和囊胚。(5)(5)防止多精入卵的两道屏障的名称防止多精入卵的两道屏障的名称透明透明带反应带反应和和卵黄膜的封闭作用卵黄膜的封闭作用。受精标志:受精标志:在卵黄膜和透明带的间隙可以观察在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到到两个极体两个极体时。时。受精完成的标志:受精完成的标志:精卵细胞核融合形成合子精卵细胞核融合形成合子第二页,本课件共有73页2.2.对卵裂阶段物质含量和体积大小的变化模糊不清对卵裂阶段物质
2、含量和体积大小的变化模糊不清 (1)(1)卵裂阶段的细胞分裂方式卵裂阶段的细胞分裂方式有丝分裂有丝分裂。(2)(2)受卵膜制约受卵膜制约,从受精卵到囊胚阶段总体积不,从受精卵到囊胚阶段总体积不变或略有减小,所以每个细胞体积变或略有减小,所以每个细胞体积减小减小。(3)(3)伴随细胞分裂,细胞数目增多,伴随细胞分裂,细胞数目增多,总总DNADNA含量含量增多增多,但每个细胞中,但每个细胞中DNADNA含量保持相对稳定。含量保持相对稳定。(4)(4)该过程中该过程中有机物总量减少有机物总量减少,因为一直呼吸消耗,因为一直呼吸消耗但不从外界吸收。但不从外界吸收。第三页,本课件共有73页第二节第二节
3、胚胎工程实验技术胚胎工程实验技术-人工受精和胚胎体外培养人工受精和胚胎体外培养第四页,本课件共有73页 1978 1978年年7 7月月2626日,世界首例日,世界首例试管婴儿试管婴儿“路易斯布朗路易斯布朗”在英在英国诞生,现已成为母亲。国诞生,现已成为母亲。第五页,本课件共有73页19881988年年3 3月月1010日我国首例试管婴儿日我国首例试管婴儿第六页,本课件共有73页19921992年年我国首例三胞胎试管婴儿我国首例三胞胎试管婴儿第七页,本课件共有73页 1.1.试管婴儿和母亲正常怀孕,生产的过试管婴儿和母亲正常怀孕,生产的过程有何异同?程有何异同?答:答:相同相同之处:都通过有性
4、生殖产生,在母之处:都通过有性生殖产生,在母体子宫内发育形成胎儿。体子宫内发育形成胎儿。不同不同之处:受精作用在体外,并在体外发之处:受精作用在体外,并在体外发育成早期胚胎进行胚胎移植。育成早期胚胎进行胚胎移植。第八页,本课件共有73页2.2.试管婴儿用到了什么生物技术?试管婴儿用到了什么生物技术?答:包括答:包括体外受精体外受精、胚胎体外培养胚胎体外培养和和胚胎胚胎移植技术移植技术。第九页,本课件共有73页分类:分类:人工体内受精、人工体外受精、显微人工体内受精、人工体外受精、显微受精受精人工体内受精人工体内受精:人工将精子注射到雌性动物宫:人工将精子注射到雌性动物宫颈管内颈管内人工体外受精
5、人工体外受精:简称:简称体外受精体外受精,采取雌性动物采取雌性动物的(的(卵细胞卵细胞)和雄性动物的()和雄性动物的(精子精子),使其在),使其在(试管试管)中受精。)中受精。显微受精显微受精:将完整的:将完整的精子或精核精子或精核用显微操作仪用显微操作仪注入注入卵周隙卵周隙或或卵胞质卵胞质,激活卵母细胞并完成受,激活卵母细胞并完成受精精第十页,本课件共有73页显微受精显微受精显微受精过程不受显微受精过程不受精子数量、活力等精子数量、活力等因素的影响因素的影响第十一页,本课件共有73页1 1、概念:、概念:是指通过人工操作使卵子和精子在是指通过人工操作使卵子和精子在体外体外条件下条件下成熟和受
6、精成熟和受精,并通过培养发,并通过培养发育成早期胚胎后,再经移植产生后代的育成早期胚胎后,再经移植产生后代的技术。技术。第十二页,本课件共有73页2 2、目、目 的的:快速繁殖动物优良品种快速繁殖动物优良品种3 3、技术手段、技术手段:体外受精和早期胚胎培养:体外受精和早期胚胎培养4 4、过、过 程程:体外受精体外受精胚胎的早期培养胚胎的早期培养胚胎移植胚胎移植第十三页,本课件共有73页试管动物试管动物供体公牛精子供体公牛精子供体母牛的卵子供体母牛的卵子精子体外获能精子体外获能卵子的体外培养卵子的体外培养体外受精体外受精体外胚胎培养体外胚胎培养胚胎移植胚胎移植受体母牛子宫受体母牛子宫产仔产仔第
7、十四页,本课件共有73页1 1、卵母细胞的采集和培养、卵母细胞的采集和培养 (1 1)用)用促性腺激素促性腺激素处理,使其排出更多处理,使其排出更多的卵子,然后从输卵管中冲取卵子,直接的卵子,然后从输卵管中冲取卵子,直接与获能精子在体外受精;与获能精子在体外受精;第十五页,本课件共有73页1 1、卵母细胞的采集和培养、卵母细胞的采集和培养 (2 2)对大家畜或大型动物对大家畜或大型动物:从已经屠宰:从已经屠宰的卵巢中采集卵母细胞;的卵巢中采集卵母细胞;(3 3)借助超声波探测仪、内窥镜或腹)借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等工具,直接从活体动物的腔镜等工具,直接从活体动物的卵巢卵巢中吸中吸取取
8、卵母细胞卵母细胞;第十六页,本课件共有73页第十七页,本课件共有73页第十八页,本课件共有73页卵母细胞的成熟培养:卵母细胞的成熟培养:CO2培养箱培养箱第十九页,本课件共有73页卵母细胞的成熟培养:卵母细胞的成熟培养:CO2培养箱培养箱第二十页,本课件共有73页1.卵细胞的获取卵细胞的获取获取部位获取部位:卵巢,输卵管或子宫卵巢,输卵管或子宫超数排卵:超数排卵:人为注射外源促性腺激素(蛋白质),人为注射外源促性腺激素(蛋白质),促进卵巢排出比正常情况下更多的卵促进卵巢排出比正常情况下更多的卵获取方法:获取方法:手术采卵手术采卵:冲洗输卵管(中小型农畜及实验动:冲洗输卵管(中小型农畜及实验动物
9、)物)非手术采卵非手术采卵:子宫冲卵(牛等大型牲畜):子宫冲卵(牛等大型牲畜)第二十一页,本课件共有73页2、精子的获取、精子的获取采精采精:人工采集(:人工采集(假阴道法假阴道法,手握法手握法和和电刺激电刺激等)等)保存保存:加入稀释液,低温保存:加入稀释液,低温保存精子的种类精子的种类:睾丸精子,附睾精子,射出精:睾丸精子,附睾精子,射出精子,雌性生殖道内的精子子,雌性生殖道内的精子常用常用:射出精子和附睾精子:射出精子和附睾精子第二十二页,本课件共有73页第二十三页,本课件共有73页3.卵子的成熟,精子的获能卵子的成熟,精子的获能(1)卵子的成熟)卵子的成熟:由于从输卵管及卵巢中取:由于
10、从输卵管及卵巢中取出的卵子还未成熟,必须体外培养到出的卵子还未成熟,必须体外培养到减数第减数第二次分裂中期二次分裂中期才能进行受精作用才能进行受精作用(2)精子的获能方法:)精子的获能方法:培养法培养法:人工配制的:人工配制的获能液获能液中培养(啮齿动物、中培养(啮齿动物、家兔和猪等)家兔和猪等)化学法化学法:一定浓度的:一定浓度的肝素肝素或或钙离子载体钙离子载体A23187溶液溶液中,化学药物诱导(牛、羊等)中,化学药物诱导(牛、羊等)第二十四页,本课件共有73页 获能的精子获能的精子和培养成熟的卵和培养成熟的卵子,一般情况下子,一般情况下在在获能溶液获能溶液或或专专用受精溶液用受精溶液中完
11、中完成受精过程。成受精过程。4.体外受精体外受精第二十五页,本课件共有73页四、胚胎的体外培养(四、胚胎的体外培养(胚胎工程的核心技术胚胎工程的核心技术)1、概念:、概念:应用人工创造的环境,对获取的早期胚胎进应用人工创造的环境,对获取的早期胚胎进行体外培养。行体外培养。2、培养起点:、培养起点:早期胚胎早期胚胎,而不是受精卵。,而不是受精卵。3 3、目的、目的:检查受精状况和受精卵发育能力检查受精状况和受精卵发育能力 第二十六页,本课件共有73页4、培养液:、培养液:培养不同发育时期的胚胎时,培养液的培养不同发育时期的胚胎时,培养液的成分不同。成分不同。5 5、移植、移植:不同生物有不同的适
12、宜阶段:不同生物有不同的适宜阶段第二十七页,本课件共有73页 4 4、早期胚胎培养液、早期胚胎培养液成分成分 :水、无机盐、有机盐、维生素、激素、水、无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及动物血清等氨基酸、核苷酸以及动物血清等.(两盐(两盐两素两酸及血清)两素两酸及血清)第二十八页,本课件共有73页胚胎培养发育到适宜阶段时,可将其取出向受体胚胎培养发育到适宜阶段时,可将其取出向受体移植移植或或冷冻保存冷冻保存。不同动物胚胎移植时间不同不同动物胚胎移植时间不同牛、羊:牛、羊:桑椹胚或囊胚阶段桑椹胚或囊胚阶段小鼠、家兔:小鼠、家兔:卵裂期或囊胚阶段卵裂期或囊胚阶段试管婴儿:试管婴儿:8个
13、或个或16个细胞阶段个细胞阶段第二十九页,本课件共有73页思考探究思考探究1、分析超数排卵技术关键是什么?、分析超数排卵技术关键是什么?(1)时间要求:一般要求)时间要求:一般要求在卵细胞具有旺盛受精能在卵细胞具有旺盛受精能力之前冲取力之前冲取。(。(2)激素使用要求:使用)激素使用要求:使用促性腺激素促性腺激素,因为促性腺激素是因为促性腺激素是蛋白质蛋白质,所以,所以只能注射而不能口只能注射而不能口服服。2、思考从卵巢中采集的卵细胞为什么不能与精子直接受、思考从卵巢中采集的卵细胞为什么不能与精子直接受精?精?卵巢中卵细胞不成熟,需要培养到卵巢中卵细胞不成熟,需要培养到减数第二次分减数第二次分
14、裂中期时裂中期时才具有受精能力。才具有受精能力。3、根据试管动物操作过程,试管动物技术是克隆、根据试管动物操作过程,试管动物技术是克隆 吗吗?不是。不是。试管动物技术试管动物技术需要经过受精过程,属于需要经过受精过程,属于有有性生殖性生殖。而。而克隆技术是无性生殖克隆技术是无性生殖。第三十页,本课件共有73页有性生殖 无性生殖 核移植技术、胚胎移植遵循 不遵循体外受精体外受精胚胎移植胚胎移植 试管动物 克隆动物生殖方式技术手段遗传物质遗传规律比较试管动物和克隆动物比较试管动物和克隆动物来自2个个体 主要来自核供体 第三十一页,本课件共有73页二二 胚胎移植技术胚胎移植技术 胚胎移植(胚胎移植(
15、embryo transfer,ET)指从指从经济价值较高、遗传性状优良的母畜体内获经济价值较高、遗传性状优良的母畜体内获取取经激素处理超数排卵受精发育经激素处理超数排卵受精发育的胚胎,移的胚胎,移植到植到同期发情同期发情的代孕母的子宫内,经过妊娠、的代孕母的子宫内,经过妊娠、产仔的技术。产仔的技术。l提供胚胎的个体称为提供胚胎的个体称为-供体供体(donor)l接受胚胎的个体称为接受胚胎的个体称为-受体受体(recipient)第三十二页,本课件共有73页 本质本质 生产胚胎的供体和孕育胚胎的受生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体体共同繁殖后代共同繁殖后代的过程;的过程;第三十三页,本课件共有73
16、页(一)胚胎移植前的准备(一)胚胎移植前的准备1、胚胎的采集、胚胎的采集 1)采用超数排卵技术,以增加可用卵的数)采用超数排卵技术,以增加可用卵的数量量 2)利用体外授精技术培育胚胎。)利用体外授精技术培育胚胎。3)采集方法:手术法和非手术法。)采集方法:手术法和非手术法。4)检出的胚胎必须在显微镜下观察,检查)检出的胚胎必须在显微镜下观察,检查后完整的胚胎可移植到受体的后完整的胚胎可移植到受体的子宫子宫保存,保存,整个过程整个过程迅速准确迅速准确,并保持,并保持无菌操作无菌操作。第三十四页,本课件共有73页2 2、供体、受体动物的准备、供体、受体动物的准备(1)(1)选择选择供体供体:遗传性
17、能和生产性:遗传性能和生产性能优秀的个体;能优秀的个体;受体受体:生产性能低,健康:生产性能低,健康和正常繁殖能力的个体和正常繁殖能力的个体处理处理:同期发情:同期发情具体做法:具体做法:注射相关激素。注射相关激素。第三十五页,本课件共有73页供体的主要职能:供体的主要职能:只产生具有优良遗传特性的胚胎;只产生具有优良遗传特性的胚胎;受体的职能:受体的职能:繁重而漫长的繁重而漫长的妊娠妊娠和和育仔育仔的任务;的任务;第三十六页,本课件共有73页(2 2)配种或人工授精)配种或人工授精精子来源:精子来源:同种优同种优良的雄性动良的雄性动物。物。第三十七页,本课件共有73页(3 3)胚胎的收集)胚
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