自身抗体的检测及应用课件课件精选课件.ppt

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1、关于自身抗体的检测及应用课件第一页，本课件共有53页一、自身免疫一、自身免疫【概念概念】当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫当机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包括耐受削弱或破坏时，免疫系统会对自身成份包括正常或变性的组织正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应等自身抗原产生免疫应答反应，出现自身抗体或出现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫。第二页，本课件共有53页一、自身免疫一、自身免疫v自身免疫可以是正常生理性的，例如：自身免疫可以是正常生理性的，例如：

2、针对衰老或死亡的自体细胞。针对衰老或死亡的自体细胞。v自身免疫也可以是病理性的自身免疫也可以是病理性的，引起自引起自身免疫病。身免疫病。第三页，本课件共有53页二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病 【概念概念】在内因与外因的共同作用下在内因与外因的共同作用下，机体的自身免机体的自身免疫应答失控疫应答失控，反应过度反应过度，直接或间接破坏自身组直接或间接破坏自身组织织，并引起相应器官病变，导致临床症状，则为并引起相应器官病变，导致临床症状，则为自身免疫性疾病自身免疫性疾病。分为器官特异性和全身性。分为器官特异性和全身性。第四页，本课件共有53页二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病自身免疫性疾病的

3、特点自身免疫性疾病的特点：（1）多多数数自自身身免免疫疫性性疾疾病病是是自自发发或或特特发发性性的的，感染，药物等外因可能有一定的影响。感染，药物等外因可能有一定的影响。（2）患者血清中存在有高水平的）患者血清中存在有高水平的球蛋白。球蛋白。（3）患患者者血血清清中中有有高高效效价价的的自自身身抗抗体体或或出出现现与与自身抗原反应的致敏淋巴细胞。自身抗原反应的致敏淋巴细胞。（4）病病损损部部位位有有变变性性的的免免疫疫球球蛋蛋白白沉沉积积，呈呈现现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症。以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症。第五页，本课件共有53页二、自身免疫性疾病二、自身免疫性疾病自身

4、免疫性疾病的特点自身免疫性疾病的特点：（5）病病程程一一般般较较长长，发发作作与与缓缓解解交交替替出出现现，仅仅有少数为自限性。有少数为自限性。（6）女性多男性，老年多于青少年。）女性多男性，老年多于青少年。（7）有遗传倾向。）有遗传倾向。（8）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。）应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。（9）常有其它自身免疫病同时存在。）常有其它自身免疫病同时存在。（1010）可复制出相似的动物疾病模型）可复制出相似的动物疾病模型。第六页，本课件共有53页三、自身抗体三、自身抗体 【概念概念】由各种原因造成的机体由各种原因造成的机体B细胞产生针细胞产生针对自身组织成分的抗体，称

5、为自身抗体。对自身组织成分的抗体，称为自身抗体。自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志，每每 种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱。第七页，本课件共有53页RARA自身抗体谱及临床意义自身抗体谱及临床意义RF60RA中出现，量与中出现，量与RA活活 动性及严重性呈正相关。动性及严重性呈正相关。亦在其它亦在其它CTD出现出现 抗抗CCP在在50RA中出现中出现（抗环瓜氨酸肽抗体）（抗环瓜氨酸肽抗体）特异性较高特异性较高AKA（抗角蛋白抗体）（抗角蛋白抗体）在在40RA阳性阳性APF（抗核周因子）（抗核周因子）在在52RA阳

6、性阳性抗抗RA33RA阳性率为阳性率为35抗抗Sa在部分在部分RA阳性阳性 以上抗体阳性有助于早期RA及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后第八页，本课件共有53页自身抗体与疾病的关系自身抗体与疾病的关系 某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特某些自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性异性，已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗已经成为该病的血清标记抗体或特异性抗体体。某某些些自自身身抗抗体体与与疾疾病病的的活活动动性性有有相相关关性性，少少数数自身抗体参与了免疫病病理性损伤自身抗体参与了免疫病病理性损伤。第九页，本课件共有53页特异性较强的自身抗体特异性较强的自身抗体抗抗Sm系统性红斑狼疮

7、系统性红斑狼疮抗抗Scl-70系统性硬化症系统性硬化症抗抗SSA/SSB干燥综合征干燥综合征抗抗CCP类风湿关节炎类风湿关节炎第十页，本课件共有53页抗体滴度的高低可判断疾病的活动性抗体滴度的高低可判断疾病的活动性抗双链抗双链DNASLEaCLSLE、磷脂抗体综合征磷脂抗体综合征RF类风湿关节炎类风湿关节炎第十一页，本课件共有53页预测疾病的预后及临床亚型预测疾病的预后及临床亚型抗抗Jo-1皮肌炎合并肺间质病变皮肌炎合并肺间质病变抗抗Scl-70弥漫性系统性硬化弥漫性系统性硬化抗抗rRNP狼疮脑病狼疮脑病第十二页，本课件共有53页自身抗体的意义自身抗体的意义 自身免疫性疾病的诊断；自身免疫性疾

8、病的诊断；疾病活动性的判断；疾病活动性的判断；疗效的观察及预后；疗效的观察及预后；指导临床用药等；指导临床用药等；进行不同疾病的鉴别诊断。进行不同疾病的鉴别诊断。第十三页，本课件共有53页自身抗体常用检测方法第十四页，本课件共有53页自身抗体的检测方法：自身抗体的检测方法：（1）酶联免疫吸附测定法（）酶联免疫吸附测定法（ELISA）：）：该法检该法检测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原测自身抗体快速、敏感及特异性高，但对抗原的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由的要求很高，必须使用高质量的纯化抗原，由于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检于一种抗原只能检测一种抗体，多种抗体的检测就必须

9、多种单独的抗原，因此该法在临床免测就必须多种单独的抗原，因此该法在临床免疫实验室的应用受到一定限制疫实验室的应用受到一定限制。第十五页，本课件共有53页（2）酶免疫斑点）酶免疫斑点(条带条带)实验实验 【优点优点】将经亲和层析纯化的抗原包被在固定将经亲和层析纯化的抗原包被在固定的位置的位置，每一种抗原只对应一条条带每一种抗原只对应一条条带，不会产不会产生非特异性反应条带生非特异性反应条带，结果灵敏度高结果灵敏度高、特异好特异好，判断实验结果简单判断实验结果简单，每个反应区均有质控带，每个反应区均有质控带，可以显示操作是正确可以显示操作是正确，阴性与阳性的结果明显阴性与阳性的结果明显，容易判断容

10、易判断，条带显色与抗体滴度相关条带显色与抗体滴度相关。第十六页，本课件共有53页(3)间接免疫荧光法间接免疫荧光法(IFT):检测检测ANA的金标准，的金标准，具有很高的敏感性和特异性。具有很高的敏感性和特异性。第十七页，本课件共有53页间接免疫荧光法原理将稀释的血清与生物载片（反应区内固定将稀释的血清与生物载片（反应区内固定有包被基质的生物薄片）温育，如果样本有包被基质的生物薄片）温育，如果样本是阳性的，特异性是阳性的，特异性IgG、IgA和和 IgM抗体与抗体与相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧相应的核抗原结合。在第二次温育时，荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上光素标记的抗人抗体与结

11、合在生物基质上的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的抗体反应，形成荧光显微镜下所观察到的特异性荧光模式。的特异性荧光模式。第十八页，本课件共有53页抗核抗体抗核抗体(ANA)(ANA)是以自身真核细胞成分作为是以自身真核细胞成分作为靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核靶抗原的一组自身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。第十九页，本课件共有53页抗核抗体抗核抗体(ANA)(ANA)均质型均质型与与AHA（抗组蛋白抗体（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNA有关，引起有关，引起LE形成主要见于形成主要见于SLE、药物性狼疮药物性狼疮核膜型核膜型

12、 与抗与抗ds-DNA有关，有关，多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者第二十页，本课件共有53页抗核抗体抗核抗体(ANA)(ANA)斑点型斑点型 与抗与抗ENA有关，应进一步有关，应进一步查特异性抗体查特异性抗体核仁型核仁型多见于系统性硬皮病多见于系统性硬皮病第二十一页，本课件共有53页项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、ELISA抗SM免疫印迹、ELISA抗SSA免疫印迹、ELISA抗SSB免疫印迹、ELISA抗JO-1免疫印迹、ELISA抗SCL-70免

13、疫印迹、ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(1)第二十二页，本课件共有53页(2)自身免疫肝炎七项自身免疫肝炎七项检验方法检验方法ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧光抗LKM（抗

14、肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法第二十三页，本课件共有53页ds-DNA 判断疾病活动性-ELISA 诊断疾病-IFT第二十四页，本课件共有53页自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：

15、非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性第二十五页，本课件共有53页自身免疫病自身抗体非常复杂SLE患者中存在100多种自身抗体Semin Arthritis Rheum.2004 Oct;34(2):501-37.第二十六页，本课件共有53页自身免疫病自身抗体非常复杂APS患者中存在30种自身抗体J Autoimmun,2008.30(1-2):p.74-83.第二十七页，本课件共有53页N Engl J Med 2003;349:1526-33.疾病预警自身抗体在SLE发病前9.4年出现第二十八页，本课件共有53页疾病预警AMA在在PBC发病前发病

16、前10年出现年出现第二十九页，本课件共有53页临床复杂性急性肝衰患者出现2和PBC特异性抗体第三十页，本课件共有53页临床复杂性抗CCP抗体在丙肝中8.5第三十一页，本课件共有53页指标阴性是否意味着疾病的排除？指标阳性意味着什么？第三十二页，本课件共有53页特异性的局限各指标与对应疾病之间：如 SLE 抗Sm抗体特异性99%敏感性仅为25%RA RF阳性可出现在SLE,pSS,SSc,慢性肺结核，高球蛋白血症等，5%正常人可出现低滴度的RF。第三十三页，本课件共有53页“自相矛盾”的结果ANA(间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性ANA(间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法），占10%，为客

17、观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）第三十四页，本课件共有53页特异性指标阳性，人无相应症状健康人 -一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后 复查可能转阴或者下降。貌似健康人-检测自身抗体（微观）影像-组织 表现-器官（最晚）患者 -但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴 度变化，一般会下降自身免疫性疾病-但不是指标对应的疾病 第三十五页，本课件共有53页自身抗体检测结果的解释疾病标记（志）性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体疾病前期存在检测方法及检测程序局限性检测质量:假阴性假阳性解读困难第三十六页，本课件共有53页四、常见自身抗体的

18、检测及应用四、常见自身抗体的检测及应用 自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种自身抗体种类很多，这里只是简单介绍几种常见的自身抗体的检测常见的自身抗体的检测：（1）类风湿因子类风湿因子（RF）（2）抗抗ENA抗体谱抗体谱 第三十七页，本课件共有53页类风湿因子（类风湿因子（RFRF）的检测及应用）的检测及应用 RF是一种抗人或动物是一种抗人或动物IgGIgG分子分子FcFc片段抗原决片段抗原决定簇的抗体定簇的抗体，是以变性是以变性IgGIgG为靶抗原的自身抗为靶抗原的自身抗体体，可与人或动物的变性可与人或动物的变性IgGIgG结合结合，而不与正常而不与正常IgGIgG发生凝集发生凝集，最多见于

19、类风湿性关节炎患者最多见于类风湿性关节炎患者，RFRF有有IgMIgM、IgGIgG、IgAIgA和和IgEIgE型型，IgMIgM型为主要类型。型为主要类型。第三十八页，本课件共有53页类风湿因子（类风湿因子（RFRF）检测方法检测方法：a.a.胶胶乳乳凝凝集集试试验验：只只能能定定性性或或定定量量，灵灵敏敏度度及及特特异性不变异性不变，只能检测只能检测I IgMgM型型RFRF。b.b.速速率率散散射射比比浊浊法法：定定量量检检测测，准准确确、快快速速，准准确确性性和和敏敏感感性性高高于于胶胶乳乳凝凝集集试试验验，也也只只能能检检测测I IgMgM型型RFRF。c.c.ELISAELISA

20、法法：可检出不同可检出不同I Ig g类型的类型的RFRF。第三十九页，本课件共有53页类风湿因子（类风湿因子（RFRF）临床应用临床应用RFRF在在RARA中中的的阳阳性性率率为为70%70%，是是诊诊断断RARA的的重重要标准之一。要标准之一。RFRF含含量量与与病病情情的的活活动动性性和和严严重重性性成成正正比比，持持续续高高滴滴度度的的RFRF常常提提示示RARA病病情情活活动动，骨骨侵侵蚀蚀发发生生率率高高，常常可可伴伴有有皮皮下下结结节节或或血血管管炎炎等等关关节节外外表表现现，提提示预后不良。示预后不良。第四十页，本课件共有53页RFRF并非并非RARA独有的特异性抗体，对独有的

21、特异性抗体，对RARA的诊断不的诊断不具特异性具特异性 SLE 30%SLE 30%SS 70%90%SS 70%90%SSc 20%30%SSc 20%30%MCTD 50%60%MCTD 50%60%5%5%以下的正常人以下的正常人RFRF阳性不等于一定就是阳性不等于一定就是RARARFRF阴性也不等于一定就不是阴性也不等于一定就不是RARA第四十一页，本课件共有53页抗抗ENAENA抗体谱抗体谱是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体的总称的总称，它主要包括抗它主要包括抗S Sm m、抗、抗RNPRNP、抗抗SSASSA、抗抗SSBSSB、抗抗J Jo

22、 o-1-1、抗抗S Sclcl-70-70、抗组蛋白抗体、抗核抗组蛋白抗体、抗核小体抗体、抗核糖体小体抗体、抗核糖体P-P-蛋白抗体蛋白抗体、抗着丝点抗体抗着丝点抗体,抗抗dsdsDNADNA。不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗ENAENA抗体抗体，ENAENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别具有重要意义断和鉴别具有重要意义。第四十二页，本课件共有53页抗抗ENAENA抗体谱抗体谱检测方法检测方法 免疫印迹法免疫印迹法（IBTIBT）、）、ELISAELISA法、双扩散法法、双扩散法对流免疫电流、金标法等对流免疫电流、

23、金标法等。免疫印迹技术不需要纯化抗原免疫印迹技术不需要纯化抗原，灵敏度高灵敏度高、特特异异性性强强、操操作作简简单单，是是广广泛泛采采用用检检测测抗抗ENAENA抗抗体体的的技术。技术。第四十三页，本课件共有53页临床意义临床意义nRNPSm SS-ASS-ASS-BScl-70Jo-1CENP BdsDNA核小体核小体核小体核小体组蛋白组蛋白组蛋白组蛋白核糖体核糖体P P蛋白蛋白蛋白蛋白第四十四页，本课件共有53页nRNP高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织抗体是混合性结缔组织病（病（MCTD，夏普综合征）的标志，阳性率，夏普综合征）的标志，阳性率为为95-100，抗体滴度

24、与疾病活动性相关。在，抗体滴度与疾病活动性相关。在30-40的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体。抗体。第四十五页，本课件共有53页Sm抗抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为的诊断指标，但阳性率仅为5-10。抗抗Sm抗体的检测对早期抗体的检测对早期,不典型的不典型的SLE或治疗或治疗后的回顾性诊断具有很大帮助。后的回顾性诊断具有很大帮助。第四十六页，本课件共有53页SS-A抗

25、抗SS-A抗体与各类自身免疫性疾病相关，抗体与各类自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（最常见于干燥综合征（40-80）、也见于）、也见于系统性红斑狼疮（系统性红斑狼疮（30-40）和原发性胆汁）和原发性胆汁性肝硬化（性肝硬化（20）中，偶见于慢性活动性肝）中，偶见于慢性活动性肝炎。此外，在炎。此外，在100的新生儿红斑狼疮中可的新生儿红斑狼疮中可出现抗出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞。第四十七页，本课件共有53页SS-B抗抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征（抗体几乎仅见于干燥

26、综合征（40-80）和系统性红斑狼疮（和系统性红斑狼疮（10-20）的女性患者）的女性患者中，男女比例为中，男女比例为29:1。在干燥综合征中抗。在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗抗体和抗SS-B抗体常同时出现。抗体常同时出现。第四十八页，本课件共有53页Scl-70抗抗Scl-70抗体见于抗体见于25-75的进行性系统性的进行性系统性硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾硬化症（弥散型）患者中，因实验方法和疾病活动性而异（病活动性而异（Scl=硬化症）。在局限型硬硬化症）。在局限型硬化症中不出现。化症中不出现。第四十九页，本课件共有53页Jo-1抗抗Jo-1抗体见于多肌炎，阳性率为抗体见于多肌炎，阳性率为25-35。常与合并肺间质纤维化相关。常与合并肺间质纤维化相关。第五十页，本课件共有53页dsDNA抗抗dsDNA抗体对系统性红斑狼疮具有很高的抗体对系统性红斑狼疮具有很高的特异性。除抗特异性。除抗Sm抗体外，抗抗体外，抗dsDNA抗体也抗体也可作为该病的一个血清学指标，阳性率为可作为该病的一个血清学指标，阳性率为40-90%。第五十一页，本课件共有53页1.简述免疫荧光法的原理2.抗核抗体的定义及临床意义第五十二页，本课件共有53页感谢大家观看第五十三页，本课件共有53页