抗体免疫学精选课件.ppt

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1、关于抗体免疫学关于抗体免疫学第一页，本课件共有26页抗血清（抗血清（antiserumantiserum）机体经机体经特定抗原特定抗原免疫后含免疫后含特定抗体特定抗体的血清。的血清。第二页，本课件共有26页治疗治疗：用抗血清治疗被：用抗血清治疗被剧毒蛇咬伤的人员；抗剧毒蛇咬伤的人员；抗白喉抗血清治疗白喉病。白喉抗血清治疗白喉病。预防预防：研究人员、消防：研究人员、消防人员及战斗人员预先注人员及战斗人员预先注射抗破伤风抗体。射抗破伤风抗体。抗血清制备的目的抗血清制备的目的1 1、被动免疫预防和治疗、被动免疫预防和治疗第三页，本课件共有26页2 2、免疫学诊断及鉴定试剂、免疫学诊断及鉴定试剂 如抗

2、甲型肝炎病毒表面抗原如抗甲型肝炎病毒表面抗原AbAb、抗艾滋病毒抗血清等。、抗艾滋病毒抗血清等。E.coli E.coli、BtBt、根瘤菌等的标准抗血清，血型鉴定用的抗血清。、根瘤菌等的标准抗血清，血型鉴定用的抗血清。abcABC第四页，本课件共有26页Ag2341-含含多个抗原表位的抗原多个抗原表位的抗原免疫动物，免疫动物，可刺激体内可刺激体内多个多个B B细胞克隆细胞克隆产生针对产生针对多多种种抗原表位抗原表位的的抗体的混合物抗体的混合物多克隆抗体（多克隆抗体（Polyclonal antibody,pAbPolyclonal antibody,pAb）B1B4B3B2B1B1B1B1B

3、2B2B2B2B3B3B3B3B4B4B4B4第五页，本课件共有26页l羊羊常用于常用于较大批量较大批量地生产抗体（商品）地生产抗体（商品）l马马：常用于：常用于大批量大批量生产治疗用抗体（商品）生产治疗用抗体（商品）1 1、常用的免疫动物、常用的免疫动物l兔子（兔子（rabbitrabbit）：最常用：最常用于自制抗体，抗体量于自制抗体，抗体量较多较多。（新西兰，大耳白）（新西兰，大耳白）一、多克隆抗体一、多克隆抗体第六页，本课件共有26页l小鼠（小鼠（mousemouse）：可用于自制抗：可用于自制抗体，但抗体量很少。（体，但抗体量很少。（Balb/cBalb/c，昆明鼠）昆明鼠）l大鼠（

4、大鼠（ratrat）：可用于自制抗体，：可用于自制抗体，免疫过程要麻醉动物。（免疫过程要麻醉动物。（WistarWistar大鼠）大鼠）l豚鼠（豚鼠（guinea pigguinea pig）：国：国外实验室常用外实验室常用第七页，本课件共有26页2 2、抗原剂量选择、抗原剂量选择l兔子（兔子（rabbitrabbit）：l200g200g1 000g/1 000g/次次l小鼠（小鼠（mousemouse）：l50g50g400g/400g/次次l大鼠（大鼠（ratrat）：l100g100g1 000g/1 000g/次次第八页，本课件共有26页3 3、佐剂的应用、佐剂的应用非特异性免疫非特

5、异性免疫增强剂增强剂，当与，当与抗原抗原一起注射或预先注一起注射或预先注入机体时，可入机体时，可增强增强机体对抗原的免疫原性或机体对抗原的免疫原性或改变改变免免疫应答类型疫应答类型佐剂佐剂（adjuvantadjuvant）无机佐剂无机佐剂：氢氧化铝、明矾等：氢氧化铝、明矾等有机佐剂有机佐剂：卡介苗等：卡介苗等FreundFreund佐剂佐剂：弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂：弗氏不完全佐剂和弗氏完全佐剂l可溶性抗原？可溶性抗原？第九页，本课件共有26页4 4、免疫的基本步骤、免疫的基本步骤(1)(1)、注射途径和位点、注射途径和位点口服口服肌肉肌肉皮内皮内皮下皮下静脉静脉腹腔腹腔耳后耳后足掌足掌

6、背部背部淋巴结周围淋巴结周围第十页，本课件共有26页(2)(2)、基础免疫、基础免疫(3)(3)、加强免疫、加强免疫首次首次第第2 2次以后次以后大量抗原大量抗原完全弗式佐剂完全弗式佐剂+抗原量抗原量1/51/52/52/5多次多次，间隔，间隔2-42-4周周不完全弗式佐剂不完全弗式佐剂+第十一页，本课件共有26页加强免疫两次或三次以后的第加强免疫两次或三次以后的第7 7天取血天取血(4)(4)、抗血清效价测定、抗血清效价测定第十二页，本课件共有26页(5)(5)、制备抗血清、制备抗血清最后一次免疫后最后一次免疫后7-107-10天放血天放血放血放置，凝固，吸取血清放血放置，凝固，吸取血清离心

7、离心纯化纯化分装分装冻存冻存第十三页，本课件共有26页多多克克隆隆抗抗体体制制备备第十四页，本课件共有26页l特异性不强特异性不强5 5、制备多克隆抗体的主、制备多克隆抗体的主要局限要局限 交叉反应交叉反应l纯化相对困难纯化相对困难l无法连续生产无法连续生产抗原抗原A抗原抗原B第十五页，本课件共有26页“多克隆抗体制备多克隆抗体制备”小结小结l多克隆抗体多克隆抗体（Polyclonal antibody,pAb）：含多个抗原表位的抗原免疫动物，：含多个抗原表位的抗原免疫动物，可刺激体内多个可刺激体内多个B细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物细胞克隆产生针对多种抗原表位的抗体的混合物l基本

8、步骤基本步骤：l1、常用的免疫动物：马、羊；兔，豚鼠；大鼠，小鼠。、常用的免疫动物：马、羊；兔，豚鼠；大鼠，小鼠。l2、抗原剂量选择：、抗原剂量选择：50g1 000g/次。次。l3、佐剂的应用（可溶性抗原）：、佐剂的应用（可溶性抗原）：Freund佐剂。佐剂。l4、免疫的基本步骤：、免疫的基本步骤：l（1）、注射途径和位点；）、注射途径和位点；l（2）、基础免疫：首次，大量抗原）、基础免疫：首次，大量抗原+完全弗氏佐剂；完全弗氏佐剂；l（3）、加强免疫：第二次以后，间隔多次，少量抗原）、加强免疫：第二次以后，间隔多次，少量抗原+不完全弗氏佐剂；不完全弗氏佐剂；l（4）、抗血清效价测定：加强免

9、疫两次或三次以后的第）、抗血清效价测定：加强免疫两次或三次以后的第7天取血，测定效价；天取血，测定效价；l（5）、制备抗血清：最后一次免疫后）、制备抗血清：最后一次免疫后7-10天放血，静置，吸取血清，离心，纯化，天放血，静置，吸取血清，离心，纯化，分装，备用。分装，备用。l制备多克隆抗体的主要局限制备多克隆抗体的主要局限：特异性不强；纯化相对困难；无法连续生产：特异性不强；纯化相对困难；无法连续生产第十六页，本课件共有26页Ag2341B1B4B3B2B1B1B1B1B2B2B2B2B3B3B3B3B4B4B4B4单克隆抗体单克隆抗体：单个：单个B B细胞克隆针对一个抗原决定簇细胞克隆针对一

10、个抗原决定簇所产生的一种均一的抗体。所产生的一种均一的抗体。第十七页，本课件共有26页骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞：不不能能合合成成或或分分泌泌Ig Ig，具具有有在在体体外外长长期期连连续续继继代的特性。代的特性。细胞融合细胞融合(cell fusion)(cell fusion)，是在自发或人工诱导下，两个不同基因，是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。第十八页，本课件共有26页二、二、单克隆抗体（单克隆抗体（monoclonal Ab,mAbmonoclonal Ab,mAb）19751975年，由年，由KohlerKo

11、hler和和MilsteinMilstein建立建立19841984年，获诺贝尔奖年，获诺贝尔奖Georges J.F.Khler Csar Milstein 淋巴细胞杂交瘤技术淋巴细胞杂交瘤技术第十九页，本课件共有26页免疫的淋巴细胞免疫的淋巴细胞：具有合成分泌抗体的功能具有合成分泌抗体的功能 但不能在体外连续继代生长。但不能在体外连续继代生长。骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞：不能合成或分泌：不能合成或分泌Ig Ig。具有在体外长期连续继代的特性。具有在体外长期连续继代的特性。单克隆抗体技术的原理单克隆抗体技术的原理杂交瘤细胞杂交瘤细胞：合成抗体、能在体外长期连续传代：合成抗体、能在体外长期连续传代第

12、二十页，本课件共有26页单抗与多抗的区别第二十一页，本课件共有26页免疫治疗与药物结合的免疫免疫治疗与药物结合的免疫-化学疗法化学疗法,利用单克隆抗体与利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。单抗的应用：单抗的应用：“导弹导弹”疗法疗法因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。制的研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。单抗单抗导航系统导航系统药物药物弹头弹头第二十二页，本课件共有26页

13、鼠源抗体对人而言，具有免疫原性。可能产生抗鼠抗体的抗体。第二十三页，本课件共有26页三、基因工程抗体三、基因工程抗体三、基因工程抗体三、基因工程抗体 按不同的需要，将抗体的基因进行加工、改造和重新装配，然后按不同的需要，将抗体的基因进行加工、改造和重新装配，然后再导入到适当的受体细胞内进行表达的抗体分子，这也就是再导入到适当的受体细胞内进行表达的抗体分子，这也就是第三第三代抗体代抗体。保持单抗高特异性的优点克服单抗为鼠源性的弊端第二十四页，本课件共有26页1 1血清中含量最高的血清中含量最高的Ig Ig是是 ，含量最低的，含量最低的Ig Ig是是 。2 2在五类在五类Ig Ig中，分子量最大的是中，分子量最大的是 ；参与粘膜免；参与粘膜免疫的主要是疫的主要是 。3 3机体初次受微生物感染时，血中最先增高的免疫机体初次受微生物感染时，血中最先增高的免疫球蛋白是球蛋白是 。4 4用木瓜蛋白酶水解用木瓜蛋白酶水解IgGIgG得到两个相同的得到两个相同的 片段片段和一个和一个 片段。片段。第二十五页，本课件共有26页2023/3/1感感谢谢大大家家观观看看第二十六页，本课件共有26页