实验12透射比浊法测定C反应蛋白.ppt

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1、全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）北华大学医学检验学院北华大学医学检验学院赵云冬赵云冬实验实验 12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白 1全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白实验目的实验目的 v掌握：掌握：透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白（反应蛋白（CRP）原理。）原理。v熟悉：熟悉：透射比浊法测定透射比

2、浊法测定CRP试剂成分。试剂成分。2全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白实验原理实验原理 光线通过浑浊介质溶液时，一部分被混浊颗光线通过浑浊介质溶液时，一部分被混浊颗粒吸收，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这粒吸收，吸收的多少与混浊颗粒的量成正比，这种测定光吸收量的方法称为种测定光吸收量的方法称为透射比浊法透射比浊法。免疫透射比浊法免疫透射比浊法是利用抗原和抗体的特异性是利用抗原和抗体的特异性结合形成复合物，通过测定复合物形成量的

3、多少结合形成复合物，通过测定复合物形成量的多少对抗原或抗体进行定量的方法。对抗原或抗体进行定量的方法。使用抗使用抗CRP抗体和样品中的抗体和样品中的CRP进行抗原进行抗原-抗抗体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度体反应。反应完成后，用透射比浊法检测吸光度的变化反映的变化反映CRP浓度。浓度。3全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白试剂与器材试剂与器材 1试剂试剂（R1）100 mmol/L Tris缓冲液（缓冲液（pH7.5）

4、；）；聚乙二醇；聚乙二醇；0.95g/L叠氮钠。叠氮钠。2试剂试剂（R2）100 mmol/L Tris缓冲液（缓冲液（pH8.0）；）；羊抗人羊抗人CRP抗血清；抗血清；0.95g/L叠氮钠。叠氮钠。3仪器仪器 自动生化分析仪。自动生化分析仪。4全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白操作步骤操作步骤 按表按表3-5操作操作加入物加入物(l)空白管（空白管（B）测测定管（定管（U）血清血清标标本本15生理生理盐盐水水15试剂试剂 2

5、50250混合，混合，375 min，在波，在波长长340nm，生理，生理盐盐水水调调零，零，读读各管吸光度各管吸光度(A1B，A1U)试剂试剂5050混合，混合，375 min，在波，在波长长340nm，生理，生理盐盐水水调调零，零，读读各管吸光度各管吸光度(A2B，A2U)表表3-5 免疫透射比浊法测定免疫透射比浊法测定C反应蛋白操作步骤反应蛋白操作步骤5全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白计算计算 式中式中265/315是是

6、进进行体行体积积校正参数，校正参数，265为为加加入入试剂试剂前体前体积积，315为为加入加入试剂试剂后体后体积积。按照按照试剂试剂配套配套标标准品使用要求，用准品使用要求，用5个不同个不同水平的水平的标标准液，并以生理准液，并以生理盐盐水水为为空白，空白，经经校准校准测测定，定，仪仪器自器自动对标动对标准品响准品响应应量通量通过过合适的数学模合适的数学模型如型如Logit-Log，拟拟合成校准曲合成校准曲线线。校准。校准仪仪器后，器后，仪仪器直接器直接报报告告检测结检测结果。果。6全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验

7、实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白参考范围参考范围 新生儿：血清新生儿：血清CRP0.6mg/L；出生后出生后l周至周至l个月个月婴婴儿：血清儿：血清CRP1.6mg/L；孕孕妇妇：血清：血清CRP47mg/L；成人和儿童：血清成人和儿童：血清CRP（0.0688.2）mg/L。7全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白临床意义临床意义 CRP是机体是机体对对炎性刺激或炎性刺激或

8、组织损伤发组织损伤发生的急性生的急性时时相反相反应时应时出出现现的一种急性的一种急性时时相蛋白。相蛋白。1各种各种细细菌感染菌感染 急性化急性化脓脓性炎症、肺炎、心内性炎症、肺炎、心内膜炎、尿路感染等，膜炎、尿路感染等，风风湿湿热热，传传染性染性单单核核细细胞性增胞性增多症等炎症性疾病，血清多症等炎症性疾病，血清CRP升高。升高。2组织损伤组织损伤 心肌梗塞、外心肌梗塞、外伤伤、烧伤烧伤等，等，恶恶性性肿肿瘤，瘤，风风湿性疾病，肉芽湿性疾病，肉芽肿肿，何杰金氏病，何杰金氏病，肾肾移植排移植排异反异反应应等疾病。等疾病。8全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临

9、床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白临床意义临床意义 3鉴别诊鉴别诊断断 CRP测测定在定在鉴别鉴别有明有明显显的炎症或的炎症或组组织损伤织损伤的疾病与无炎症或炎症极的疾病与无炎症或炎症极轻轻的疾病、的疾病、鉴别细鉴别细菌性或病毒性炎症菌性或病毒性炎症时时很有价很有价值值。4评评估病情及估病情及疗疗效效 CRP升高升高标标志病情志病情发发展，由展，由升高升高变为变为下降，下降，标标志病情志病情趋趋于于稳稳定，是定，是评评价价风风湿湿热热等疾病病情活等疾病病情活动动性的最佳参数之一，也是某些疾病性的最佳参

10、数之一，也是某些疾病治治疗疗有无效果的参考指有无效果的参考指标标。5用于器官移植排异反用于器官移植排异反应应的的检测检测 排异反排异反应时应时血血清清CRP水平持水平持续续升高。升高。9全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白注意事项注意事项1CRP参考参考值值范范围围随随测测定方法、定方法、试剂试剂不同而异，不同而异，请请参照不同参照不同试剂试剂盒盒说说明明书书。2不同的厂家，不同批号的不同的厂家，不同批号的试剂试剂不能混用。不能混

11、用。10全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白评价评价 1测测定定CRP的方法：的方法：灵敏度灵敏度较较低的免疫低的免疫扩扩散法、散法、火箭火箭电电泳法、胶乳凝集泳法、胶乳凝集试验试验；高灵敏度、高精密高灵敏度、高精密度的放射免疫、度的放射免疫、酶酶免疫、免疫比免疫、免疫比浊浊等定量等定量试验试验；其他方法如其他方法如ELISA、免疫、免疫发发光法和化学光法和化学发发光法，光法，虽虽然灵敏度和精确度都然灵敏度和精确度都较较高，但其成

12、本也高，但其成本也较较高。高。免疫比免疫比浊浊法法具有具有试剂稳试剂稳定、操作定、操作简简便、流程短、便、流程短、重复性和精确性好的重复性和精确性好的优势优势，适合，适合CRP定量定量测测定。定。11全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白评价评价 2前前带带限制限制 CRP浓浓度度2 000mg/L时时无前无前带现带现象。象。抗原与抗体反抗原与抗体反应时应时如果抗原抗体比例适当可形成大如果抗原抗体比例适当可形成大的抗原抗体复合物，反

13、的抗原抗体复合物，反应应体系出体系出现浑浊现浑浊；当待；当待测测物物质质（抗原）含量（抗原）含量过过高高时时，抗原与抗体的比例不适合，抗原与抗体的比例不适合，所形成的所形成的结结合物少且小，反合物少且小，反应应体系不出体系不出现浑浊现浑浊称称为为前前带现带现象。象。3特异性特异性/干干扰扰 当当样样品中品中Vc浓浓度度1 704 mol/L、胆胆红红素素浓浓度度684 mol/L、血、血红红蛋白蛋白浓浓度度5g/L、甘、甘油三油三酯浓酯浓度度22.6mmol/L时时无干无干扰扰。12全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验

14、实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白评价评价 4灵敏度灵敏度/检测检测限限 本本试剂试剂的的检测检测限限为为2mg/L。5超敏超敏C反反应应蛋白（蛋白（Hs-CRP）是根据是根据测测定方法定方法更敏感而命名。更敏感而命名。临临床床测测定定CRP的方法的方法检测线检测线性一般性一般为为2 mg/L 250mg/L，缺乏，缺乏较较高的灵敏性。胶乳增高的灵敏性。胶乳增强强的免疫比的免疫比浊浊法等技法等技术术大大提高了分析的灵敏度大大提高了分析的灵敏度（检测检测低限低限为为0.005 mg/L 0.1mg/L），可），可检测检测出低出低水平（水平（

15、0.1mg/L10mg/L）的）的CRP浓浓度。度。Hs-CRP可可作作为为一种急性炎症的一种急性炎症的标标志物，而且可区志物，而且可区别别在正常范在正常范围围内低程度炎症反内低程度炎症反应应中中CRP的水平。的水平。13全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）实验实验12 透射比浊法测定透射比浊法测定C反应蛋白反应蛋白1如果如果样样品中品中CRP浓浓度超度超过过2 000mg/L能否能否进进行行 比比浊测浊测定？定？为为什么？什么？2何何谓谓超敏超敏C反反应应蛋白？如何蛋白？如何检测检测？思考题思考题 14全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材临床生物化学检验实验指导临床生物化学检验实验指导 （第二版）（第二版）返回总目录返回总目录15