香菇多糖的分离提取.doc

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1、太原科技大学化学与生物工程学院生物分离原理及技术实验报告 班 级：生物工程1142班 姓 名：刘 思 学 号：5 指导教师：杨 艳 日期：2014年4月3日香菇多糖的分离提取 摘要：香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质，具有抗病毒、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种功能，在保健食品和药品开发方面具有广阔的应用前景。本实验通过有机溶剂提取，经过真空抽滤、真空旋转蒸发浓缩、离心分离多糖，并计算其产率。关键词：香菇多糖 提取 分离 糖类的研究已有百余年的历史，近20多年来，随着膜的化学功能，免疫物质的化学研究的进展以及探寻新药物资源的不断拓展和研究的深入，发现糖类在生物体中的作用不仅是作为

2、能量资源或结构材料，更重要的是还参与了生命现象中细胞的各种活动，具有多种多样的生物学功能。多糖一般由十个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成的高分子多聚物。多糖按来源大致可分为植物多糖、动物多糖、海藻多糖、微生物多糖即细菌多糖和真菌多糖等。其中，具有很强生物活性的真菌多糖的研究日益受到重视，真菌多糖从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离，是一类可以控制细胞分裂分化、调节细胞生长和衰老的活性多糖。真菌多糖作为药物研究始于20世纪50年代，在60年代以后成为免疫促进剂受到广泛关注，其中香菇多糖是研究得较透彻的多糖之一。 香菇为担子菌纲伞形科真菌，是世界名贵食用菌兼药用菌之一，而香菇多糖则具有抗肿瘤、抗病毒

3、、提高免疫和刺激干扰素形成等功能，因此已被大量应用于保健食品、制药等行业中。香菇多糖为白色或棕黄色粉末，对光和热稳定，具吸湿性，相对分子质量较大，无甜味和还原性，部分能溶于水，在水中的溶解度随分子质最增大而降低，水溶液为中性，不溶于甲醇、已醇、丙酮等有机溶剂。本实验采用香菇子实体经粉碎、浸取、除蛋白、预处理、抽滤、真空浓缩、离心、真空干燥的流程，提取香菇多糖，并计算其产率。1 试验部分1.1 试剂与仪器1.1.1 试剂原料：干香菇2g 试剂：氯仿、正丁醇、医用纱布、浓硫酸、苯酚，工业酒精、蒸馏水，葡萄糖，稀盐酸，PH试纸，复合酶（木瓜蛋白酶：纤维素酶=2：1），1.1.2 仪器100ml容量瓶

4、，6个50ml容量瓶，玻璃棒，烧杯若干，锥形瓶若干，棕色瓶一个，抽滤瓶，电子天平，真空干燥箱，恒温水浴锅，紫外分光光度计，粉碎机，循环水式真空泵，台式离心机。旋转浓缩仪。1.2 香菇多糖的提取纯化1. 2g干香菇切成小块，以1：10（重量比）加入水，用组织捣碎机进行均质；2. 取20mL均质液放入1L烧杯中，再加入30mL蒸馏水，加热至沸后，温火煮沸1小时，（注意：煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌，以免烧杯底部发生糊结；并间歇加入少量水，使杯内液体体积保持在50mL左右；3. 加热完毕后，将杯内液体用8层纱布过滤，除去残渣，上清液转入另一烧杯中；4. 将上清液倒入圆底烧瓶中，在旋转浓缩仪上进行浓缩，

5、浓缩条件为-0.1MPa 、60，浓缩液体积至100mL左右停止；5. 将浓缩液在110000g离心10min，将上清液转入另一烧杯，除去残渣；6. 上清液中加入等体积的氯仿正丁醇浓液（体积比为4：1），搅拌5min，静置30分钟；7. 将混合液体在15000g下离心20min,分离水相； 8. 在水相中加入终浓度为80%的酒精，搅拌均匀，静置20min，15000g下离心10min；9. 取出沉淀物，放入已称重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80下真空干燥；10. 干燥后，称重，计算多糖的产率；11. 准确称取干燥后多糖2mg于50ml容量瓶中，加水定容； 12. 取定容液0.2ml加入6%苯

6、酚0.1ml，混匀，再加入浓硫酸0.5ml，混匀，放置20min后，于490nm测吸光度； 13. 葡萄糖标准曲线的制定：准确称取葡萄糖2mg定容于50ml容量瓶中，分别取0.04、0.06、0.08、0.1、0.12、0.14、0.16及0.18ml，补水至0.2ml，依12步骤反应液，并分别测吸光度，根据葡萄糖浓度和吸光度绘制标准曲线； 14. 根据香菇多糖吸光度和葡萄糖标准曲线，计算多糖纯度。2 结果与讨论2.1 实验结果2.1.1 多糖含量测定标准曲线以吸光度A为横坐标，葡糖糖质量m(mg)为纵坐标绘制苯酚-硫酸法的标准曲线。根据标准曲线图经线性回归，得多糖含量测定标准曲线。2.1.2

7、 多糖产率及纯度的确定由真空干燥箱干燥后称重计算多糖产率；根据香菇多糖吸光度和葡糖糖标准曲线，计算多糖纯度。2.2 问题讨论2.2.1 多糖产率及纯度的计算公式 还原糖浓度=(A样品-O.0114)4.3125还原糖百分含量=(还原糖浓度NV)m100其中，A样品-样品在540nm处的吸光度 多糖产率=09(总糖百分含量-还原糖的百分含量) 其中，09为还原糖换算为多糖的系数多糖纯度=(多糖含量NV)M100其中，N-稀释倍数 V-提取液体积(ml) M-原料干重(g）2.2.2 多糖沉淀原理多糖的单糖基越多，所带的羟基就越多，多糖的极性也就增大。根据相似相容，将醇加到含有多糖的水溶液中，可以改变水溶液的极性，极性大的多糖最先沉淀出来，极性小得最后沉淀出来。3 参考文献1 吕国英，范雷法，张作法，潘慧娟.香菇多糖研究进展.浙江农业学报，2009，21(2):183-1882 段穗芳,郑宗坤.超滤提纯香菇子实体中的香菇多糖.深圳大学科学工程报，1999,16(4)3 韦丁，陈健.香菇多糖含量测定过程中加样回收率的比较.华南理工大学轻工与食品学院，食品研究与开发，2010,31(10)4 曾智平.高纯度香菇多糖的分离提取及其分级研究.西安建筑科技大学学位论文，2007,5