手足口病的病原学及实验室检测精选课件.ppt
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1、关于手足口病的病原学及实验室检测第一页,本课件共有34页手足口病的病原引起手足口病的病毒属于小RNA病毒科肠道病毒属,包括:*柯萨奇病毒A组(Coxasckievirus A,CVA)的 2、4、5、7、9、10、16 型等 *B组(Coxasckievirus B,CVB)的1、2、3、4、5 型等;*肠道病毒71型(Human Enterovirus 71,EV71);*埃可病毒(Echovirus,ECHO)等。其中以EV71及CVA16型较为常见。肠道病毒适合在湿、热的环境下生存与传播,75%酒精和酒精和5%来来苏不能将其灭活,对乙醚、去氯胆酸盐等不敏感苏不能将其灭活,对乙醚、去氯胆酸
2、盐等不敏感;对紫外线和干燥敏感,各种氧化剂(高锰酸钾、漂白粉等)、甲醛、碘酒以及5630分钟可以灭活病毒。病毒在4可存活1年,-20可长期保存,在外环境中可长期存活。第二页,本课件共有34页人人肠肠道病毒感染的一般致病机制道病毒感染的一般致病机制进进入途径入途径口腔口腔/呼吸道呼吸道咽喉及下咽喉及下肠肠胃道胃道传传播播扁桃体扁桃体、深深层层淋巴淋巴结结、肠肠道淋巴道淋巴结结微病毒血症微病毒血症先天性感染先天性感染神神经经系系统统心心脏脏肝肝脏脏、胰胰脏脏、肾肾上腺上腺呼吸系呼吸系统统皮肤及黏膜皮肤及黏膜病毒血症病毒血症神神经经系系统统抗体抗体产产生生、病毒血症消失病毒血症消失,病毒感染症状改善
3、病毒感染症状改善飞飞沫、接触、沫、接触、饮饮食食肌肉肌肉第三页,本课件共有34页流行病学传染源 患者和隐性感染者患者和隐性感染者。发病前数天,感染者咽部与粪便就可检出病毒,通常以发病后一周内传染性最强。传播途径:可经胃肠道(粪粪-口途径口途径)传播,也可经呼吸道(飞沫、咳嗽、打喷嚏等)传播,亦可因接触患者口鼻分泌物、皮肤或粘膜疱疹液及被污染的手及物品等造成传播 流行:以5岁及以下儿童为主,尤以3岁及以下儿童发病率最高。一般5-7月为发病高峰 第四页,本课件共有34页实验室诊断临床诊断病例符合下列条件之一者,即可诊断为实验室确诊病例 自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子、脑脊液、疱疹液、血清以及脑、
4、肺、脾、淋巴结等组织标本中分离分离到人肠道病毒到人肠道病毒(指包括CVA16和EV71等有明确证据表明可以导致手足口病的人肠道病毒)。自咽拭子或咽喉洗液、粪便或肛拭子等标本中检测检测到到CVA16 或或EV71特异性核酸,特异性核酸,或从脑脊液、疱疹液、血清以及脑、肺、脾、淋巴结等组织标本等标本中检测到人肠道病毒(指包括CVA16和EV71等有明确证据表明可以导致手足口病的人肠道病毒)的特异性核酸。第五页,本课件共有34页实验室诊断血清标本人肠道病毒型特异性中和抗体滴度1256,或急性期与恢复期血清肠道病毒特异性中和抗体有4倍或4倍以上的升高 第六页,本课件共有34页病原学监测要求 各省区市卫
5、生行政部门要组织医疗卫生机构开展病原学监测,了解病原动态分布变化。所有重症和死亡病例均需采样。此所有重症和死亡病例均需采样。此外,以县(区)为单位,每月最少需采集外,以县(区)为单位,每月最少需采集5例首次就诊的普通例首次就诊的普通病例标本;当月县(区)病例总数少于病例标本;当月县(区)病例总数少于5例时,全部采样。例时,全部采样。以省(区、市)为单位,在手足口病流行年份中每年至少采集20对EV71 和10对CVA16感染的手足口病患儿的双份血清,以阐明和分析EV71和CVA16感染后IgG和IgM抗体的动态变化,评价血清学抗体试剂盒的敏感性和特异性。以省(区、市)为单位,每月至少从手足口病病
6、例中分离以省(区、市)为单位,每月至少从手足口病病例中分离10株毒株并做血清型别鉴定,鉴定完成后并将毒株及鉴定结果株毒株并做血清型别鉴定,鉴定完成后并将毒株及鉴定结果于于5个工作日内报送至中国疾病预防控制中心。具备测序条件的个工作日内报送至中国疾病预防控制中心。具备测序条件的省份,可开展省份,可开展VP1基因序列测定和分析基因序列测定和分析,进行基因定型,序列测定完成后将序列结果于5个工作日内报送至中国疾病预防控制中心;不具备测序条件者,将毒株送至中国疾病预防控制中心进行序列测定,中国疾病预防控制中心要于28个工作日内反馈基因定型结果。第七页,本课件共有34页 31个省级实验室个省级实验室1国
7、家实验室国家实验室331 个地级实验室个地级实验室 肠道病毒分离物基因分型肠道病毒分离物基因分型,血清流行病学检测血清流行病学检测,诊断诊断方法建立方法建立 质量控制质量控制 对省级实验室提供技术支持对省级实验室提供技术支持 肠道病毒分离和鉴定肠道病毒分离和鉴定 (PCR,ICA,PCR-RFLP,real time PCR)对地级实验室的质量控制对地级实验室的质量控制对地级实验室提供技术支持对地级实验室提供技术支持 RT-PCR,Real time PCR 采集标本采集标本 中国肠道病毒三级实验室网络中国肠道病毒三级实验室网络中国肠道病毒三级实验室网络中国肠道病毒三级实验室网络第八页,本课件
8、共有34页标本采集和检测(1)所有重症和死亡病例均要采集标本所有重症和死亡病例均要采集标本,可以采集咽拭子、粪便或肛拭子、疱疹液、脑脊液、血清等,死亡病例还可采集脑、肺、肠淋巴结等组织标本。聚集性病例至少要采集2例病例标本开展病原学检测。(2)医疗机构负责样本采集医疗机构负责样本采集,疾病预防控制机构应指导医疗机构进行相关生物学标本的采集。(3)疾病预防控制机构根据本地的技术能力,对采集的标本开展核酸检测、病毒分离;不具备技术条件时,及时送上级机构进行检测。第九页,本课件共有34页标本的选择标本的选择粪便标本、肛拭子(3日内,5-8g)咽拭子标本(3日内,维持液)血清标本(发病0-3天,14-
9、30天)疱疹液(多个疱疹作为一个标本)脑脊液标本(出现神经系统症状后3天内)第十页,本课件共有34页 采集标本的种类、保存和运输(一)粪便标本。采集病人发病3日内日内的粪便标本,用于病原检测。粪便标本采集量量5-8g/份份,采集后立即放入无菌采便管内,外表贴上带有唯一识别号码的标签,4暂暂存存12小时内小时内送达实验室,-20以下低温冷以下低温冷冻保藏,冻保藏,需长期保存的标本存于-70冰箱。第十一页,本课件共有34页 采集标本的种类、保存和运输(二)咽拭子标本。采集病人发病3日内的咽拭子标本,用于病原检测。用专用采样棉签,适度用力拭抹咽适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位,应避免触及舌部;后壁
10、和两侧扁桃体部位,应避免触及舌部;迅速将棉签放入装有3-5ml保存液(含5%牛血清维持液或生理盐水,推荐使用维持液)的15ml外螺旋盖采样管中,在靠近顶端处折断棉签杆,旋紧管盖并密封,以防干燥,外表贴上带有唯一识别号码的标签。4暂存并在12小时内送达实验室,-20以下低温冷冻保藏,需长期保存的标本存于-70冰箱。第十二页,本课件共有34页 采集标本的种类、保存和运输(三)血清标本。各省(区、市)在手足口病流行年份中均应采集EV71 和CVA16感染的手足口病患儿的双份血清。采集急性期(发病0-7d)和恢复期(发病14-30d)双份配对血清用于阐明和分析EV71和CVA16感染后IgG和IgM抗
11、体的动态变化,评价血清学抗体试剂盒的敏感性和特异性。静脉采集3-5ml全血,置于真空无菌采血管中,自凝后,分离血清,将血清移到2ml外螺旋的血清保存管中,外表贴上带有唯一识别号码的标签。将血清置于-20以下冰箱中冷冻保存。第十三页,本课件共有34页(四)疱疹液 在手足口病的实验室诊断中,从疱疹液中分离到病毒即可确诊该病毒为病因,可同时采集多个疱疹作采集多个疱疹作为一份标本为一份标本。先用75%的酒精对疱疹周围的皮肤进行消毒,然后用消毒针将疱疹挑破用棉签蘸取疱疹液,迅速将棉签放入内装有3-5ml保存液(含5%牛血清维持液或生理盐水,推荐使用维持液)的采样管中,在靠近顶端处折断棉签杆,旋紧管盖并密
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