高中生物选修3基础知识点精要.doc
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1、第一章 基因工程第一节 基因工程概述一基因工程的概念操作环境操作对象操作水平基本过程结果生物体外基因分子水平剪切拼接导入表达人类需要的基因产物由于基因工程是在DNA分子水平上进行操作,因此又叫做重组DNA技术。二基因工程的基本工具(一)“分子手术刀”限制性核酸内切酶(简称限制酶)1来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。2功能:能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列,并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。3结果:经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式:黏性末端和平末端。 (二)“分子针线”DNA连接酶1分类:根据酶的来源不同,可分为EcoliDNA连接酶和T4
2、DNA连接酶两类2功能:恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。两种DNA连接酶(EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较:相同点:都缝合磷酸二酯键区别:EcoIiDNA连接酶来源于大肠杆菌,只能使黏性末端之间连接;T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端之间的效率较低。DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较DNA连接酶DNA聚合酶不同点连接的DNA双链单链模板不要模板要模板连接的对象2个DNA片段单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上相同点作用实质形成磷酸二酯键化学本质蛋白质(三) “分子运输车”载体1.载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存;具有一至多个限制酶切
3、割位点,供外源DNA片段插入;具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。 2.基因工程常用的载体有: 质粒 、 噬菌体 和 动、植物病毒 等。最早应用的载体是质粒,它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。三基因工程的基本过程 (一) 获得目的基因(目的基因的获取)1.获取方法主要有两种:从自然界中已有的物种中分离出来,如可从基因文库中获取。用人工的方法合成。获得原核细胞的目的基因可采取直接分离,获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。2.利用PCR技术扩增目的基因(1)PCR的含义:是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。(2)目的
4、:获取大量的目的基因(3)原理:DNA双链复制(4)过程:第一步:加热至9095DNA解链为单链;第二步:冷却到5560,引物与两条单链DNA结合;第三步:加热至7075,热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。(5)特点:指数形式扩增(二) 制备重组DNA分子(基因表达载体的构建) 1重组DNA分子的组成:除了目的基因外,还必须有标记基因。标记基因的作用:鉴定受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。2方法:同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接。(三) 转化受体细胞(将目的基因导入受体细胞)1.转化的概念:是目的基因进入受体细胞内,并且在受体
5、细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是农杆菌介导转化技术(农杆菌转化法),其次还有基因枪介导转化技术(基因枪法)和花粉管通道技术(花粉管通道法)。将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是受精卵。将目的基因导入微生物细胞:Ca处理法。(四) 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达(目的基因的检测与鉴定)1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交技术。2.其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是采用DNA分子杂交技术。3.最后检测目的基因是否翻译
6、成蛋白质,方法是采用抗原抗体杂交技术。4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如抗虫或抗病的鉴定等。第二节 基因工程的应用1运用基因工程改良动植物品种最突出的优点是:能打破常规育种难以突破的物种之间的界限。2基因工程的应用(1)植物基因工程:抗虫、抗病、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质。(2)动物基因工程:提高动物生长速度来提高产品产量、改善产品品质,用转基因动物生产药物,用转基因动物作器官移植的供体等。(3)基因诊断和基因治疗:基因诊断:又称为DNA诊断,是采用基因检测的方法来判断患者是否出现了基因异常或携带病原体。基因治疗:指利用正常基因置换或弥补缺陷基因的治疗方法。实例:ADA基因
7、缺陷症的基因治疗第三节 蛋白质工程1蛋白质工程的实质:根据蛋白质的结构与功能之间的关系,通过改造基因,以定向改造天然蛋白质,甚至创造自然界不存在的、具有优良特性的蛋白质。2蛋白质工程的基本原理预期蛋白质功能测定蛋白质三维空间结构推测应有的氨基酸序列找到对应的脱氧核苷酸序列(基因)具有预期功能的蛋白质3.蛋白质工程的应用(1)通过改造酶的结构,有目的地提高蛋白质的热稳定性。(2)合成嵌合抗体。(3)改变蛋白质的活性。蛋白质工程与基因工程区别蛋白质工程基因工程实质通过改造基因,以定向改造天然蛋白质,甚至创造自然界不存在的蛋白质将目的基因从供体转移到受体细胞,并在受体细胞中表达结果合成自然界不存在的
8、蛋白质只能生产自然界已存在的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上,延伸出的第二代基因工程细胞工程(一)植物细胞工程 1.理论基础(原理):细胞全能性全能性表达的难易程度:受精卵生殖细胞干细胞体细胞;植物细胞动物细胞2.植物组织培养技术(1)过程:离体的植物器官、组织或细胞 愈伤组织 试管苗 植物体(2)用途:微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。(3)地位:是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。3.植物细胞培养(苏教版)(1)概念:在实验室工厂化生产的条件下,将组织培养过程中形成的愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中,进行悬浮培养,
9、得到分散游离的悬浮细胞,通过继代培养使细胞增殖,从而获得大量的细胞群体的一种技术。 (2)与植物组织培养的关系 植物组织培养是基础。 目的不同:植物组织培养的目的是得到更多的植物体,植物细胞培养的目 的是获得人类所需的细胞(3)实例:成功地培养红豆杉的细胞,从中提取出重要的抗肿瘤药物紫杉醇。4.植物体细胞杂交技术(1)过程:(2)诱导融合的方法:物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇(PEG)作为诱导剂。(3)意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。(二)动物细胞工程 1. 动物细胞培养(1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中
10、,让这些细胞生长和繁殖。(2)动物细胞培养的流程:取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)剪碎用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶中进行原代培养贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。(3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。(4)动物细胞培养需要满足以下条件无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积
11、累对细胞自身造成危害。营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。温度:适宜温度:哺乳动物多是36.50.5;pH:7.27.4。气体环境:95%空气5%CO2。O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。(5)动物细胞培养技术的应用:制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。2.动物组织培养(苏教版): 动物细胞培养与动物组织培养方法类似,主要区别是动物细胞培养过程中需要用胰蛋白酶等使组织块中的细胞离散,而动物组织培养过程中不需要使用胰蛋白酶等。3.动物体细胞核移植技术和克隆动物(1)哺乳动物核移
12、植可以分为胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。(2)选用去核卵(母)细胞的原因:卵(母)细胞比较大,容易操作;卵(母)细胞细胞质多,营养丰富。(3)体细胞核移植的大致过程是: 核移植胚胎移植(4)体细胞核移植技术的应用:加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育; 保护濒危物种,增大存活数量;生产珍贵的医用蛋白; 作为异种移植的供体;用于组织器官的移植等。(5)体细胞核移植技术存在的问题:克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。4.动物细胞融合(1)动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称
13、为杂交细胞。(2)动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。(3)动物细胞融合的意义:克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。(4)动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较:比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用法植物体细胞杂交细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合离心、电刺激、振动,聚乙二醇等试剂诱导克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株动物细胞融合细胞膜的流动性使细胞分散后诱导细胞融合除应用植物细胞杂交手段外,再加灭活的病毒诱导制备
14、单克隆抗体的技术之一5.单克隆抗体(1)抗体:一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。(2)单克隆抗体的制备过程:注入小鼠细胞融合分离抗原注入小鼠体内B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养选择培养细胞培养基体内培养体外培养从腹水提取从培养液提取单克隆抗体(3)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一的抗体。(4)单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。(5)单克隆抗体的作用: 作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗癌症治疗,可制成
15、“生物导弹”,也有少量用于治疗其它疾病。生物选修三(胚胎工程)复习提纲第一节 动物的胚胎发育和胚胎工程一、哺乳动物生殖细胞的发生和受精作用1哺乳动物生殖细胞 11精子的发生 精原细胞先进行有丝分裂后进行减数分裂,最后形成4个精细胞,再经过成熟过程形成精子。产生部位:睾丸的曲细精管;储存部位:曲细精管的管腔中;营养来源:支持细胞。12卵子的发生 卵原细胞先进行 有丝分裂 后进行减数分裂,最后形成1个卵子。具体过程:卵原细胞进行有丝分裂演变成初级卵母细胞被卵泡细胞包围形成初级卵泡,经过减数第一次分裂形成第一极体和次级卵母细胞,其中,第一极体经过减数第二次分裂形成2个第二极体,而次级卵母细胞的减数第
16、二次分裂是在受精过程输卵管中完成的,形成1个卵子和1个第二极体,最终结果产生1个卵子和3个第二极体。13精子卵子形成过程的不同点项目精子的发生过程卵子的发生过程发生场所睾丸卵巢和输卵管发生时间减数分裂减数分裂和受精过程发生过程连续不连续核物质含量减半(n)减半(n)是否变形是否一个性原细胞最终产生的生殖细胞个数41细胞质分裂均等不均等2受精作用精子获能精子在附睾中成熟后必须在雌性动物生殖道内经历一段时间才能获得受精能力的过程。卵泡液、输卵管分泌物、血清等液体可使精子获能。特征(1)受精作用的定义:卵细胞和精子相互识别、融合成为受精卵的过程。(2)受精作用的场所:输卵管的壶腹部(3)受精标志:第
17、二极体的形成;受精完成标志是雌雄原核融合成合子。(4)受精作用的结果:使单倍体的精子和卵子结合形成二倍体的受精卵,染色体数目恢复到体细胞中的数目,其中一半染色体来自父方,另一半来自母方。(5)减数分裂和受精作用的意义:对于维持每种生物前后代体细胞中染色体数目的恒定,对于生物的遗传和变异,都是十分重要的。二、哺乳动物胚胎发育的基本过程受精过程的完成,标志着胚胎发育的开始。起点:受精卵;终点:幼体;包括卵裂(细胞进行有丝分裂,数量增加,胚胎总体积不增加)、囊胚(细胞开始分化,其中个体较大的细胞叫内细胞团,将来发育成胎儿的各种组织)、原肠胚、胚层分化等主要阶段。三、胚胎工程的主要技术与应用1胚胎工程
18、的概念及技术手段对动物生殖细胞、受精卵和早期胚胎细胞所进行的多种显微操作和处理技术,由体外受精技术、胚胎移植技术、胚胎分割技术、胚胎冷冻保存技术和性别控制技术等组成的现代生物技术。胚胎发育学是胚胎工程的理论基础。11体外受精技术是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。属有性生殖过程基本原理:人工模拟体内环境,包括营养、温度、pH等,使初级卵母细胞成熟,同时使精子获能,最终完成受精作用,并有计划地保存胚胎等。卵母细胞的采集和培养 对体型小的动物用促性腺激素处理,从输卵管冲取卵子(可直接受精);对体型大的动物从卵巢中采集卵母细胞(要在体外培养成熟)。体外受精技术是哺乳动物
19、胚胎移植技术、克隆技术、转基因技术和性别控制技术不可缺少的组成部分。12胚胎移植技术a概念:将雌性动物的早期胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。b优势:可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力,缩短供体本身的繁殖周期。c胚胎移植的生理学基础:同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的对供体和受体进行同期发情处理;早期胚胎形成后处于游离状态,为胚胎的收集提供可能;受体对移入子宫的外来胚胎基本不发生免疫排斥反应;移入受体的供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。d胚胎移植的程序:对供、受体母牛进行选择,用激素进行同期发情处理;对供体母牛用激素做超数排卵处理;
20、选择同种优秀公牛配种有性生殖过程;对胚胎进行收集此时胚胎处于游离状态;对胚胎进行质量检查此时胚胎应发育到桑椹胚或囊胚;胚胎移植或冷冻保存;检查受体母牛是否受孕;产下胚胎移植的犊牛。13胚胎分割技术a概念:用显微手术方法将早期胚胎切割成2、4、8等份,经体内或体外培养后植入受体,以获得同卵双生或同卵多生后代的技术可看作是动物无性繁殖或克隆。b基本过程:选择良好的桑椹胚或囊胚移入培养皿中,用分割针或分割刀片将其切开,吸出其中的半个胚胎注入透明带中或直接移植给受体。注意:内细胞团要均等分割,否则会影响胚胎的恢复和进一步发育14胚胎冷冻保存技术a概念:将动物的早期胚胎,通过特殊的保护剂和降温措施,使其
21、长期保存在超低温环境下。B优势:可以使胚胎移植不受时间和地域的限制,简化引种过程。15动物性别控制技术 指通过人为干预,使动物按照人们的愿望繁衍所需性别的后代的技术。第二节 胚胎干细胞的研究及其应用一、胚胎干细胞及其研究进展1干细胞:动物(包括人)胚胎及某些器官中具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞,是重建、修复病损或衰老组织、器官功能的种子细胞。按照分化潜能的大小,干细胞基本上可分为专能干细胞(只能分化成一种类型或功能密切相关的两种类型的细胞)、多能干细胞(具有分化成多种细胞或组织的潜能却失去发育成完全个体能力的细胞)和全能干细胞(可以分化为全身各种细胞,并进一步形成机体的所有组织、器官)。
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