05第四章微生物的营养和培养基食品微生物学江南大学.ppt
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1、1第四章第四章 微生物的微生物的营营养和培养基养和培养基2微生物的营养营营营营养养养养(nutrition)(nutrition):生物体从外部生物体从外部生物体从外部生物体从外部环环环环境中境中境中境中摄摄摄摄取其生命活取其生命活取其生命活取其生命活动动动动所必需的能量和所必需的能量和所必需的能量和所必需的能量和物物物物质质质质,以,以,以,以满满满满足其生足其生足其生足其生长长长长和繁殖需要的一种生理和繁殖需要的一种生理和繁殖需要的一种生理和繁殖需要的一种生理过过过过程。程。程。程。营营营营养物养物养物养物(nutrient)(nutrient):指具有:指具有:指具有:指具有营营营营养功
2、能的物养功能的物养功能的物养功能的物质质质质。营营营营养物养物养物养物质质质质的特点:的特点:的特点:的特点:1.1.能能能能满满满满足微生物足微生物足微生物足微生物细细细细胞生理的需要。胞生理的需要。胞生理的需要。胞生理的需要。2.2.构成微生物构成微生物构成微生物构成微生物细细细细胞胞胞胞组组组组成。成。成。成。3.3.外源性。外源性。外源性。外源性。3本章主要内容(4学时)第一节微生物细胞的化学组成第二节微生物的六种营养要素第三节微生物的营养类型第四节营养物质进入细胞的方式第五节培养基4第一第一节节微生物微生物细细胞的化学胞的化学组组成成各种生物各种生物细细胞的化学元素胞的化学元素组组成
3、都基成都基本相似,但在本相似,但在化学化学组组成的成的质质和量和量上,上,各各类类生物生物细细胞都有各自独有的特点,胞都有各自独有的特点,不同种不同种类类的微生物之的微生物之间间有一定的差有一定的差异。异。微生物微生物细细胞胞的的化学化学组组成成往往随往往随微生微生物种物种类类、菌、菌龄龄、培养基和、培养基和检测检测方法方法的的组组成而不同。成而不同。5水7090%组成微生物蛋白质细胞的物质碳水化合物干物质脂肪核酸矿物质6微生物细胞的化学组成 主要成分主要成分细细菌菌酵母菌酵母菌霉菌霉菌水分水分758570808590758570808590(占(占细细胞胞鲜鲜重的重的%)蛋白蛋白质质5080
4、32751415508032751415 占占 细细碳水化合物碳水化合物1228276374012282763740 胞胞 干干脂肪脂肪520215440520215440 重重 的的核酸核酸10206811020681%无机无机盐盐2303.876122303.876127一、水分一、水分水分是微生物水分是微生物细细胞中含量最高的物胞中含量最高的物质质(主要成分)。(主要成分)。细细胞的平均含水量胞的平均含水量 细细菌菌7585%7585%,酵母菌:酵母菌:7080%7080%,霉菌霉菌8595%8595%。影响含水量的因素:影响含水量的因素:微生物的种微生物的种类类 微生物所微生物所处处的
5、的环环境条件如:酵母菌在境条件如:酵母菌在2020时时含水量含水量91%91%,而而4343时时含含74%74%。细细胞本身的生理状胞本身的生理状态态有关。芽有关。芽孢孢含含40%40%,霉菌,霉菌孢孢子子38%38%,有些曲霉的分生有些曲霉的分生孢孢子只有子只有20%20%。8细细胞内水的形式胞内水的形式游离水:游离水:以游离的状以游离的状态态存在,微生物可利用。存在,微生物可利用。干重法可干重法可干重法可干重法可测测测测得得得得结结合水:合水:以以结结合的状合的状态态存在。存在。这这部分与其他物部分与其他物质结质结合在一起合在一起 不易不易挥发挥发;0 0下不下不冻结冻结;不具流;不具流动
6、动性、渗透性性、渗透性;不能;不能被被细细胞利用。胞利用。营营养体的游离水和养体的游离水和结结合水的比例合水的比例为为4 4:1 1,芽,芽孢孢和和孢孢子子结结合水的比例高于其他合水的比例高于其他细细胞,故芽胞,故芽孢孢有有较较强强的抗逆性。的抗逆性。9二、干物二、干物质质微生物微生物细细胞去除水分后即胞去除水分后即为为干物干物质质。其元素。其元素组组成基本上成基本上为为C、H、O、N、P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe、Mn、Cu、Co、Zn、Mo等组成。物物质组质组成:成:占细胞干重99%的蛋白质、核酸、类脂和糖类等大分子有机物,占细胞干重1%的小分子无机物和各种离子,101.蛋白蛋白质质
7、(protein)约约约约占占占占细细细细胞干物胞干物胞干物胞干物质质质质的的的的1480%1480%一般一般一般一般细细细细菌、酵母菌菌、酵母菌菌、酵母菌菌、酵母菌细细细细胞的蛋白胞的蛋白胞的蛋白胞的蛋白质质质质含量含量含量含量 霉菌。霉菌。霉菌。霉菌。蛋白蛋白蛋白蛋白质质质质种种种种类类类类:每个:每个:每个:每个细细细细菌菌菌菌细细细细胞胞胞胞约约约约有有有有30003000种不同的蛋种不同的蛋种不同的蛋种不同的蛋白白白白质质质质分子。分子。分子。分子。简单简单简单简单蛋白蛋白蛋白蛋白质质质质:清蛋白、球蛋白:清蛋白、球蛋白:清蛋白、球蛋白:清蛋白、球蛋白蛋白蛋白蛋白蛋白质质质质 化学化
8、学化学化学结结结结构构构构 复合蛋白复合蛋白复合蛋白复合蛋白质质质质:核蛋白核蛋白核蛋白核蛋白、脂蛋白、糖蛋白、脂蛋白、糖蛋白、脂蛋白、糖蛋白、脂蛋白、糖蛋白 在微生物在微生物在微生物在微生物细细细细胞中核蛋白含量特胞中核蛋白含量特胞中核蛋白含量特胞中核蛋白含量特别别别别高,可占蛋白高,可占蛋白高,可占蛋白高,可占蛋白总总总总量的量的量的量的1/31/21/31/2。112.核酸核酸(NucleicAcids)微生物的细胞除病毒外都含有两种核酸:DNA和RNA。含量:细菌、酵母菌霉菌。细细菌的菌的RNARNA占干重的占干重的20%20%,DNADNA占干重的占干重的34%34%。霉菌占干重的霉
9、菌占干重的1%1%。同一种微生物中,RNA的含量常随生长时期的变化而变化,DNA的含量却是恒定的,因而用DNA碱基比例或GC百分比值作为分类鉴定的指标。123.碳水化合物碳水化合物(Carbohydrate)微生物微生物细细胞中含有胞中含有单单糖、双糖和多糖糖、双糖和多糖,主主要要以以多糖多糖的形式存在。的形式存在。单单单单糖主要是己糖和戊糖。糖主要是己糖和戊糖。糖主要是己糖和戊糖。糖主要是己糖和戊糖。多糖有多糖有多糖有多糖有荚荚荚荚膜多糖、膜多糖、膜多糖、膜多糖、纤维纤维纤维纤维素、淀粉、糖原等不同素、淀粉、糖原等不同素、淀粉、糖原等不同素、淀粉、糖原等不同种种种种类类类类。134.脂脂类类
10、(lipoid)种种种种类类类类:脂肪、磷脂、固醇和蜡。:脂肪、磷脂、固醇和蜡。:脂肪、磷脂、固醇和蜡。:脂肪、磷脂、固醇和蜡。存在状存在状存在状存在状态态态态:细细细细胞中游离的状胞中游离的状胞中游离的状胞中游离的状态态态态存在存在存在存在 或与蛋白或与蛋白或与蛋白或与蛋白质质质质等等等等结结结结合。合。合。合。存在于存在于存在于存在于细细细细胞壁、胞壁、胞壁、胞壁、细细细细胞膜、胞膜、胞膜、胞膜、细细细细胞胞胞胞质质质质中。中。中。中。磷脂:磷脂:磷脂:磷脂:构成构成构成构成细细细细胞的膜系胞的膜系胞的膜系胞的膜系统统统统,蜡:主要在某些微生物的蜡:主要在某些微生物的蜡:主要在某些微生物的
11、蜡:主要在某些微生物的细细细细胞壁或分生胞壁或分生胞壁或分生胞壁或分生孢孢孢孢子的表面,含子的表面,含子的表面,含子的表面,含量很少,具有保量很少,具有保量很少,具有保量很少,具有保护护护护作用。作用。作用。作用。固醇:主要在酵母菌的固醇:主要在酵母菌的固醇:主要在酵母菌的固醇:主要在酵母菌的细细细细胞膜上。胞膜上。胞膜上。胞膜上。14脂肪的含量:与菌种和培养条件有密切关脂肪的含量:与菌种和培养条件有密切关系。系。如含糖量如含糖量如含糖量如含糖量较较较较高的培养基可促高的培养基可促高的培养基可促高的培养基可促进进进进脂肪的大量累脂肪的大量累脂肪的大量累脂肪的大量累积积积积,在含氮量高而缺糖的培
12、养基上,脂肪的在含氮量高而缺糖的培养基上,脂肪的在含氮量高而缺糖的培养基上,脂肪的在含氮量高而缺糖的培养基上,脂肪的积积积积累就累就累就累就少。少。少。少。155.无机无机盐类盐类无机元素无机元素无机元素无机元素约约约约占占占占细细细细胞干重的胞干重的胞干重的胞干重的10%10%左右,包括左右,包括左右,包括左右,包括P P、S S、MgMg、FeFe、KK、NaNa等。一般以磷的含量等。一般以磷的含量等。一般以磷的含量等。一般以磷的含量为为为为最高,最高,最高,最高,约约约约占全部灰分的占全部灰分的占全部灰分的占全部灰分的40%40%左右。左右。左右。左右。这这这这些无机元素在些无机元素在些
13、无机元素在些无机元素在细细细细胞中除少数以游离的状胞中除少数以游离的状胞中除少数以游离的状胞中除少数以游离的状态态态态存存存存在,大部分以无机在,大部分以无机在,大部分以无机在,大部分以无机盐盐盐盐的形式存在或的形式存在或的形式存在或的形式存在或结结结结合于有机合于有机合于有机合于有机物物物物质质质质中中中中。166.其它除上述一些主要物除上述一些主要物质质外,有些微生物外,有些微生物的的细细胞中胞中还还含有含有维维生素、抗生素、色生素、抗生素、色素、毒素等。素、毒素等。17第二第二节节 微生物的六种微生物的六种营营养要素养要素碳源碳源(carbonsource)氮源氮源(nitrogenso
14、urce)能源能源(energysource)生生长长因子因子(growthfactor)无机元素无机元素(mineralsalts)水水(water)18一、碳源凡可被用来构成凡可被用来构成细细胞物胞物质质或或代代谢产谢产物中碳素来源的物中碳素来源的营营养养物物质质。碳源功能C素构成细胞及代谢产物的骨架细胞干物质中的碳约占50%,碳的需求最大C素是大多数微生物代谢所需的能量来源19微生物的碳源谱类类类类型型型型元素水平元素水平元素水平元素水平 化合物水平化合物水平化合物水平化合物水平 培养基原料水平培养基原料水平培养基原料水平培养基原料水平有有有有机机机机碳碳碳碳C C C C H H H
15、H O O O O N N N N X X X X复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、蛋白胨、花生牛肉膏、蛋白胨、花生牛肉膏、蛋白胨、花生牛肉膏、蛋白胨、花生饼粉等饼粉等饼粉等饼粉等C C C C H H H H O O O O N N N N多数氨基酸、简单蛋多数氨基酸、简单蛋多数氨基酸、简单蛋多数氨基酸、简单蛋白质等白质等白质等白质等一般氨基酸、明胶等一般氨基酸、明胶等一般氨基酸、明胶等一般氨基酸、明胶等C C C C H H H H O O O O糖、有机酸、醇、脂糖、有机酸、醇、脂糖、有机酸、醇、脂糖、有机酸、醇、脂类等类等类等类等葡萄糖、蔗
16、糖、各种淀葡萄糖、蔗糖、各种淀葡萄糖、蔗糖、各种淀葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、糖蜜等粉、糖蜜等粉、糖蜜等粉、糖蜜等C C C C H H H H烃类烃类烃类烃类天然气、石油及其不同天然气、石油及其不同天然气、石油及其不同天然气、石油及其不同馏份、石蜡油等馏份、石蜡油等馏份、石蜡油等馏份、石蜡油等无无无无机机机机碳碳碳碳C(?)C(?)C(?)C(?)C C C C O O O OCOCOCOCO2 2 2 2COCOCOCO2 2 2 2C C C C O O O O X X X XNaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3NaHCONaHCONaHCONaHCO3 3 3 3、CaC
17、OCaCOCaCOCaCO3 3 3 3、等、等、等、等2021碳源的种类:无无机机含含碳碳化化合合物物:如如COCO2 2和和碳碳酸酸盐盐等等。只只能能被被自自养养微微生生物利用物利用有机含碳化合物:糖与糖的衍生物(多糖:如淀粉、有机含碳化合物:糖与糖的衍生物(多糖:如淀粉、麸皮、米糠等;麸皮、米糠等;饴饴糖;糖;单单糖)糖),脂脂类类、醇醇类类。有机酸、。有机酸、烃类烃类、芳香族化合物、芳香族化合物以及各种含氮的化合物。以及各种含氮的化合物。22众多碳源中,对异养微生物来说最好(适)的碳源是糖类(CHO)。几乎所有的异养微生物都能利用葡萄糖和果糖几乎所有的异养微生物都能利用葡萄糖和果糖单单
18、糖糖优优于双糖,已糖于双糖,已糖优优于戊糖于戊糖葡萄糖、蔗糖:微生物培养的主要碳源葡萄糖、蔗糖:微生物培养的主要碳源淀粉(大多数微生物)淀粉(大多数微生物)纤维纤维素(少数微生物)素(少数微生物)酚、酚、氰氰化物有机毒物(少数,化物有机毒物(少数,诺诺卡氏菌)卡氏菌)23在设计时尽量不要将CHONX和CHON当作碳源用。不同微生物利用碳源的能力不同广泛地利用不同广泛地利用不同类类型的碳源:假型的碳源:假单孢单孢菌属菌属碳源范碳源范围围极狭窄:甲极狭窄:甲烷烷氧化菌,氧化菌,纤维纤维素分解菌素分解菌24微生物工微生物工业发业发酵中用做碳源的原料酵中用做碳源的原料q传统传统种种类类:糖糖类类(单单
19、糖,糖,饴饴糖)糖)淀粉(玉米粉、山芋粉、野生植物淀粉等)淀粉(玉米粉、山芋粉、野生植物淀粉等)麸皮麸皮各种米糠等各种米糠等q代粮代粮发发酵:酵:纤维纤维素、石油、素、石油、COCO2 2、H H2 225微生物不同,利用上述含碳化合物的能力不同,微生物不同,利用上述含碳化合物的能力不同,如假如假单单胞菌属中的某些种可以利用胞菌属中的某些种可以利用9090种以上的不同种以上的不同类类型的碳源物型的碳源物质质;而某些甲基而某些甲基营营养型养型细细菌只能利用甲醇或甲菌只能利用甲醇或甲烷烷等一碳化等一碳化合物合物进进行生行生长长。26二、氮源二、氮源(nitroginsource)构成微生物细胞物质
20、如蛋白如蛋白如蛋白如蛋白质质质质、核酸、核酸、核酸、核酸或代谢产物中氮元素氮源一般不做能源,少数硝化细菌利用铵盐,亚硝酸盐作氮源,同时也作能源。凡是可以构成微生物细胞和代谢产物中氮素来源的营养物质都称为氮源。氮源功能氮源功能27微生物的氮源微生物的氮源谱谱类类类类型型型型 元素水平元素水平元素水平元素水平化合物水平化合物水平化合物水平化合物水平培养基原料水平培养基原料水平培养基原料水平培养基原料水平有有有有机机机机氮氮氮氮N N N N C C C C H H H H O O O O X X X X复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、酵母膏、饼牛肉膏
21、、酵母膏、饼牛肉膏、酵母膏、饼牛肉膏、酵母膏、饼粕粉、蚕蛹粉等粕粉、蚕蛹粉等粕粉、蚕蛹粉等粕粉、蚕蛹粉等N N N N C C C C H H H H O O O O尿素、一般氨基酸、简单蛋尿素、一般氨基酸、简单蛋尿素、一般氨基酸、简单蛋尿素、一般氨基酸、简单蛋白质等白质等白质等白质等尿素、蛋白胨、明胶尿素、蛋白胨、明胶尿素、蛋白胨、明胶尿素、蛋白胨、明胶等等等等无无无无机机机机氮氮氮氮N N N N H H H HNHNHNHNH3 3 3 3、铵盐等、铵盐等、铵盐等、铵盐等(NH4)(NH4)(NH4)(NH4)2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4等等等等N N N N O O O
22、 O硝酸盐等硝酸盐等硝酸盐等硝酸盐等KNOKNOKNOKNO3 3 3 3等等等等N N N NN N N N2 2 2 2空气空气空气空气2829氮源的种类分子分子分子分子态态态态氮:氮:氮:氮:固氮微生物以分子氮固氮微生物以分子氮为为唯一氮源唯一氮源无机氮:无机氮:无机氮:无机氮:铵盐铵盐铵盐铵盐、硝酸、硝酸、硝酸、硝酸盐盐盐盐、亚亚亚亚硝酸硝酸硝酸硝酸盐盐盐盐、尿素、尿素、尿素、尿素、氨等;氨等;氨等;氨等;硝酸硝酸盐盐、铵盐铵盐几乎所有微生物能利用几乎所有微生物能利用 有机氮:蛋白有机氮:蛋白有机氮:蛋白有机氮:蛋白质质质质及其降解及其降解及其降解及其降解产产产产物物物物 a.a.速效
23、性氮源:速效性氮源:实验实验室常用牛肉膏、蛋白室常用牛肉膏、蛋白质质、酵母、酵母膏做氮源膏做氮源b.b.迟迟效性氮源效性氮源:生:生产产用玉米用玉米浆浆、豆、豆饼饼、葵花、葵花饼饼、花花生生饼饼等。等。30能利用空气中分子能利用空气中分子N2N2作作为为氮源的微生物称作氮源的微生物称作固氮固氮微生物。微生物。有固氮能力的微生物主要是有固氮能力的微生物主要是原核微生物原核微生物固氮微生物可将分子固氮微生物可将分子态态N N转转化化为为氨氨态态氮再氮再转转化化为为氨基酸。氨基酸。当基当基质质中含有无机中含有无机N N或有机或有机N N时时,固氮微生物,固氮微生物细细胞胞的固氮的固氮酶酶系系统统被抑
24、制,固氮微生物被抑制,固氮微生物转转而利用基而利用基质质中的有机含中的有机含N N化合物作化合物作为为N N源。源。A.分子分子态态氮氮N231B.无机N:主要指主要指NONO-3 3和和NHNH4 4+。如碳酸。如碳酸铵铵、硫酸、硫酸铵铵、尿素、尿素、硝酸硝酸盐盐等。等。只有只有铵盐铵盐才能直接才能直接进进入有机分子中,硝酸入有机分子中,硝酸盐盐必必须须先先还还原成原成NH4+NH4+后才能用于生物合成,后才能用于生物合成,许许多多细细菌不能利用菌不能利用NONO-3 3,一般,一般应应用用NHNH4 4+作无机作无机N N,且其,且其虽虽能利用无机能利用无机N N,但不如有机,但不如有机N
25、 N普遍;真菌普遍;真菌大多数既可利用大多数既可利用NONO-3 3也可利用也可利用NHNH4 4+。当利用无机当利用无机N N作作为为唯一唯一N N源源时时培养基可能出培养基可能出现现生理生理碱性碱性或或生理酸性生理酸性。无机氮源或以蛋白无机氮源或以蛋白质质降解降解产产物形式存在的有机氮物形式存在的有机氮源可以直接被菌体吸收利用,源可以直接被菌体吸收利用,这这种氮源叫做种氮源叫做速效速效氮源氮源32生理酸式生理酸式盐盐和生理碱式和生理碱式盐盐(NH4)2SO42NH4+SO42-入胞入胞pHK+(Na+)+NO3-入胞入胞pHKNO3NaNO3NH4NO3NH4+(先入胞先入胞)+NO3-(
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