三聚氰胺的检测液相法.ppt

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1、三聚氰胺的检测（液相法）三聚氰胺的检测（液相法）三聚氰胺三聚氰胺 物理与化学性质物理与化学性质三聚氰胺三聚氰胺分子式：分子式：C3H6N6分子量：分子量：126.15 英文名：英文名：MelamineMelamine三聚氰胺三聚氰胺-结构式结构式三聚氰胺三聚氰胺俗称蜜胺、蛋白精，又叫俗称蜜胺、蛋白精，又叫2,4,6-2,4,6-三氨基三氨基-1,3,5-1,3,5-三嗪、三嗪、1,3,5-1,3,5-三嗪三嗪-2,4,6-2,4,6-三胺、三胺、2,4,6-2,4,6-三氨基脲、三聚氰酰胺、氰脲三酰三氨基脲、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺。胺。是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，是一是一种三嗪类含氮杂环有

2、机化合物，是一种重要的有机化工原料。种重要的有机化工原料。三聚氰胺三聚氰胺三聚氰胺性状为纯白色单斜棱晶体，无味，密度三聚氰胺性状为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573g/cm3(16)1.573g/cm3(16)。在水中溶解度随温度升高而增大在水中溶解度随温度升高而增大,在在2020时，约为时，约为3.3 g/L3.3 g/L，即，即微溶于冷水，溶于热水微溶于冷水，溶于热水，极微溶于热，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。三聚氰胺三聚氰胺遇强酸或强碱水溶液水解遇强

3、酸或强碱水溶液水解，胺基，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成一酰胺，最后生成三聚氰酸三聚氰酸。三聚氰胺三聚氰胺 检测过程检测过程检测检测_ _选择方法选择方法原料乳与乳制品中三聚氰胺的检原料乳与乳制品中三聚氰胺的检测方法：测方法：GB/T22388-2008GB/T22388-2008饲料中三聚氰胺的测定：饲料中三聚氰胺的测定：NY/T1372.29-2007NY/T1372.29-2007检测检测_ _试剂试剂甲醇：色谱纯。甲醇：色谱纯。乙腈：色谱纯乙腈：色谱纯。氨水氨水:浓度浓度25%

4、-28%25%-28%。三氯乙酸溶液三氯乙酸溶液10g/L10g/L：称取：称取10g10g三氯三氯乙酸加水至乙酸加水至1L1L。乙酸铅溶液乙酸铅溶液(22g/L):(22g/L):称取称取22g22g乙酸铅乙酸铅,用约用约300mL300mL水溶解后定容至水溶解后定容至1L1L。氨水甲醇溶液：量取氨水甲醇溶液：量取5ml5ml氨水，溶解于氨水，溶解于100ml100ml甲甲醇中。醇中。20%20%甲醇溶液：甲醇溶液：200ml200ml甲醇加入甲醇加入800ml800ml一级水中，一级水中，混匀。混匀。方法所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试方法所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为蒸

5、馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。检测检测_ _标准品标准品三聚氰胺三聚氰胺标准品标准品（纯度（纯度99%99%）。）。检测检测_ _标准品标准品标准储备液标准储备液准确称取准确称取100mg100mg（精确到（精确到0.1mg0.1mg）三聚）三聚氰胺标准品于氰胺标准品于100mL100mL容量瓶中，用容量瓶中，用20%20%甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制甲醇水溶液溶解并定容至刻度，配制成浓度为成浓度为1.0mg/mL1.0mg/mL的标准储备液，于的标准储备液，于44避光保存。避光保存。检测检测_ _标准品标准品标准品中间液标准品中间液精确吸取标准

6、储备液精确吸取标准储备液5.00mL5.00mL于于50mL50mL容量瓶中，用容量瓶中，用20%20%甲醇水溶液定容甲醇水溶液定容至刻度，配制成浓度为至刻度，配制成浓度为100 g/mL 100 g/mL 的溶液，于的溶液，于44避光保存。避光保存。检测检测_ _标准品标准品标准品工作液标准品工作液精确吸取标准中间液精确吸取标准中间液0.50mL0.50mL、1.00mL1.00mL、2.00mL 2.00mL、5.00mL 5.00mL、10.0010.00mLmL于于5 5个个100 mL 100 mL 容量瓶中，容量瓶中，用用20%20%甲醇水溶液定容至刻度甲醇水溶液定容至刻度.于于4

7、4避光保存。避光保存。检测检测_ _标准品标准品三聚氰胺三聚氰胺储备液1000中间液100工作液0.51.02.05.010单位g/mL检测检测_ _标准品标准品标准工作液浓度可根据所测样品标准工作液浓度可根据所测样品中的具体含量调整。中的具体含量调整。如果只做单点标样，请选择如果只做单点标样，请选择与样与样品浓度最接近品浓度最接近的一个点。的一个点。检测检测_ _标准品谱图标准品谱图检测检测_ _标准品曲线标准品曲线检测检测_ _样品预处理样品预处理原理：原理：样品沉淀脂肪和蛋白质，调样品沉淀脂肪和蛋白质，调PHPH至至中性，过滤后进高效液相色谱仪，中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分

8、离后，根据保留时间经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。和峰面积进行定性和定量。检测检测_ _样品预处理样品预处理准确称取准确称取6 610g10g样品于样品于50ml50ml容量瓶中。容量瓶中。加入三氯乙酸溶液约加入三氯乙酸溶液约20ml20ml，要徐徐加入，要徐徐加入，并摇动容量瓶，超声提取并摇动容量瓶，超声提取10-2010-20分钟，加分钟，加入入2ml2ml乙酸铅溶液，用三氯乙酸溶液稀释乙酸铅溶液，用三氯乙酸溶液稀释至刻度。至刻度。静置静置3030分钟，用滤纸过滤，滤液分钟，用滤纸过滤，滤液（如不（如不需净化）需净化）经滤膜经滤膜(0.45m)(0.45m)过滤，滤液

9、供过滤，滤液供液相测定用。液相测定用。检测检测_ _样品预处理样品预处理如需净化，按以下步骤操作如需净化，按以下步骤操作:小柱活化：依次用小柱活化：依次用3mL3mL甲醇和甲醇和3mL3mL水活化小柱。水活化小柱。上样：准确吸取上样：准确吸取10mL10mL（可根据实（可根据实验情况调整）验情况调整）滤液转移至固相萃取滤液转移至固相萃取柱中。柱中。检测检测_ _样品预处理样品预处理净化：再用净化：再用3mL3mL水和水和3mL3mL甲醇分别甲醇分别洗涤，抽至近干。洗涤，抽至近干。洗脱：用洗脱：用6mL6mL氨化甲醇溶液洗脱，氨化甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液。收集全部洗脱液。控制流速在控制流速在

10、1mL/min1mL/min以内。以内。检测检测_ _样品预处理样品预处理洗脱液于洗脱液于5050下用氮气吹干，残下用氮气吹干，残留物用留物用1mL1mL流动相（或流动相（或20%20%甲醇水溶甲醇水溶液）溶解，涡旋混合液）溶解，涡旋混合1min1min，供液相，供液相测定用。测定用。检测检测_ _色谱条件色谱条件色谱柱：色谱柱：C18C18或或C8C8柱，或同等性能柱，或同等性能的柱子；的柱子；4.6mm250mm4.6mm250mm，5m5m。流动相：称取流动相：称取2.02g2.02g庚烷磺酸钠和庚烷磺酸钠和2.10g2.10g柠檬酸于柠檬酸于1L1L容量瓶中，用水容量瓶中，用水溶解并稀

11、释至刻度。取该溶液溶解并稀释至刻度。取该溶液900ml900ml加入加入100ml100ml乙腈，混匀。乙腈，混匀。检测检测_ _色谱条件色谱条件流速：流速：1mL/min1mL/min。进样量：进样量：10L10L。检测器：紫外检测器，波长检测器：紫外检测器，波长240nm240nm。根据保留时间定性，外标峰面积法定根据保留时间定性，外标峰面积法定量。量。检测检测_ _样品谱图样品谱图检测检测_ _调节流动相调节流动相水相水相乙腈乙腈=90=901010 适宜大多数的样品。适宜大多数的样品。适当增加水相的比例可推迟出峰适当增加水相的比例可推迟出峰时间，使分离度变大时间，使分离度变大。结果结果

12、计算计算检出限检出限结果结果_ _计算计算原理：外标法原理：外标法 C C标标AA样样DD单点法公式单点法公式：X X A A标标 m m C C样样DD多点法公式多点法公式：X X m m 结果结果_ _计算计算式中：式中：X-X-样品的含量，样品的含量，mg/kgmg/kg；C C标标 -标准使用液浓度，标准使用液浓度，gg/ml/ml；C C样样 -样品浓度，样品浓度，gg/ml/ml；D-D-样品稀释液总体积，样品稀释液总体积，mLmL；m-m-样品质量，样品质量，g g；A A样样 -样品的峰面积；样品的峰面积；A A标标 -标样的峰面积。标样的峰面积。结果结果_ _允许差允许差在重

13、复性条件下获得的两次独立在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过测定结果的绝对差值不得超过算术算术平均值的平均值的10%10%。结果结果_ _检出限检出限液相法检出限液相法检出限:2mg/kg:2mg/kg计算结果计算结果2 2时，应给出具体值；时，应给出具体值；计算结果计算结果2 2时，应标明时，应标明未检出未检出，不得给，不得给出具体数值，因为这时的数值是不准确出具体数值，因为这时的数值是不准确值。值。峰面积太小无法计算时，应标明峰面积太小无法计算时，应标明未检出未检出，不得将检验结果写为零。不得将检验结果写为零。结果结果检测结束后应将标样、样品所检测结束后应将标样、样品所有色谱图与原始记录一同存放，有色谱图与原始记录一同存放，色谱图亦为原始记录的一部份。色谱图亦为原始记录的一部份。谢谢谢谢 集团质量管理部云青2010.11.1