药理学实验的基础知识40660.pdf

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1、1/76 第一章 药理学实验的基础知识 一、药理学实验课的目的和要求 药理学实验课的目的在于通过实验，使学生掌握进行药理学实验的基本方法，了解获得药理学知识的科学途径，验证药理学中的重要基本理论，更牢固地掌握药理学的基本概念。在实验课中还应培养学生科学工作的严肃的态度、严格的要求、严密的工作方法和实事求是的作风，并初步具备客观地对事物进行观察、比较、分析、综合和解决实际问题的能力。为了达到上述目的，要求做到下列事项：实验前（1）仔细阅读实验指导，了解实验目的、要求、方法和操作步骤，领会其设计原理；（2）结合实验内容，复习有关药理学和生理学、生化学等方面理论知识达到充分理解；（3）估计实验中可能

2、出现的情况和发生的问题。实验中（1）将实验器材妥善安排，正确装置；（2）严格按照实验指导书上的步骤进行操作，准确计算给药量，防止出现差错意外；（3）认真、细致地观察实验过程中出现的现象，随时记录药物反应的出时间、表现以及最后转归，联系课堂讲授内容进行思考；（4）注意节约实验材料。实验后（1）整理实验结果，经过分析思考，写出实验报告，按时交给指导教师；（2）整理实验器材，洗净擦干，妥为安放。将存活和死亡动物分别送至指定处所。做好实验室的清洁卫生工作。二、实验动物的捉持和给药法 实验 1.1 蛙和蟾蜍的捉持和给药法 目的 学习蛙和蟾蜍的捉持和淋巴囊给药法。材料 蛙或蟾蜍；注射器、针头、生理盐水。方

3、法 1.捉持法 通常以左手握持，用食指和中指夹住左前肢，用拇指压住右前肢，将下肢拉直，用无名指及小指夹住。2.淋巴囊内注射法 蛙及蟾蜍皮下有多个淋巴囊，注入药物后易于吸收。通常将药物注射于胸、腹或股淋巴囊。蛙及蟾蜍的皮肤很薄，缺乏弹性，注射后药物易自针眼漏出，故作2/76 胸部淋巴囊注射时应将针头插入口腔，由口腔底部穿过下颌肌层而达胸部皮下；作股淋巴囊注射时，应由小腿皮肤剌入，通过膝关节而达大腿部皮下。这样才可避免药液外漏。注入药液量一般为 0.25ml0.50ml 试以生理盐水作胸淋巴囊和股淋巴囊注射练习。实验 1.2 小鼠的捉持和给药法 目的 学习小鼠的捉持和各种给药法。材料 小鼠 34

4、只；鼠笼、天平、注射器、针头、灌胃针头、小鼠尾静脉注射用固定筒、生理盐水。方法.捉持法 以右手提鼠尾，将小鼠放于鼠笼或其它粗糙面上，将鼠尾向后轻拉，使小鼠固定在粗糙面上，以左手的拇指及屈成“V”状的食指捏其双耳及头颈部皮肤，无名指、小指和掌心夹其背部皮肤和尾部，这样便可将小鼠完全固定，并可保持头颈部平直。2.灌胃法 以左手捉持小鼠，使其头部朝上，颈部拉直。右手持配有灌胃针头（以 16号输血针头磨去针尖后制成）的注射器，自口角插入口腔，再从舌面紧沿上腭进入食道。如手法正确，不难成功。若遇阻力，应退出后再插，不能用力强插，以免刺破食道或误入气管，使动物致死。灌胃的药液量一般为 0.10.3ml/1

5、0g。试以生理盐水作灌胃练习。3.皮下注射 可由两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾。另一人左手捏起背部皮肤，右手持注射器（5 号或 6 号针头），将针头刺入背部皮下。如由一人操作，可按前法捉持小鼠，右手持注射器，针尖从右侧肋缘上穿入皮下，向前推至右前肢腋下部位，将药液推入即可。小鼠皮下注射的药液量一般为 0.050.2ml/10g。试以生理盐水进行练习。3/76 4肌内注射 可由两人合作。一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住鼠尾。另一人持注射器（4 号或 5 号针头），将针头刺入后肢外侧部肌肉。如一人单独操作，以左手拇指和食指抓住小鼠头部皮肤，小指、无名指和掌部夹住鼠尾及一侧后肢，

6、右手持注射器刺入后肢肌肉给药。注射器每腿不宜超过 0.1ml。试以生理盐水进行练习。5腹腔注射 以左手抓住小鼠，使腹部在上面，头部下倾，右手持注射器（5 号或 6 号针头），取 30 度角将针头从一侧下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜太高，刺入不能太深，以免伤及内脏。注射量一般为 0.10.2ml/10g。试以生理盐水进行练习。6尾静脉注射 将小鼠置特制的固定筒内（或倒置的大漏斗、乳钵下），使鼠尾露出在外。用酒精（或二甲苯）棉球涂擦尾部，或将鼠尾在 50热水中浸泡半分钟，使血管扩 X。用左手拉住尾尖，从左右两侧尾静脉中，选择一条扩 X 最明显的尾静脉，右手持注射器（4号针头），将针头刺入血管，

7、推入药液。如推注时有阻力，且局部肿胀变白，表明针头没有刺入血管，应拨出后重新穿刺。穿刺血管时宜从鼠尾末端开始，以便失败后可在第一次穿刺点的近心端重新进行。小鼠尾静脉注射的药液量一般为 0.10.2ml/10g。试以生理盐水作尾静脉注射练习。4/76 实验 1.3 家兔的捉持和给药法 目的 学习家兔的捉持和各种给药法。材料 家兔 12 只；兔固定箱、兔开口器、磅称、导尿管、注射器、生理盐水 方法 1捉持法 用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。2灌胃 需由两人合作进行。一人取坐位，用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢，另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌

8、头，并固定之。取 8 号导尿管，从开口器中部小孔插入食道，深约 1518cm。插管时易误入气管。区别方法主要在于谨慎观察插管后动物的反应。插入气管时将引起剧烈挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示已误入气管内，此时应拨出重插。在判明导尿管确定插在食道内以后，取注射器接在导尿管上，将药液推入。再推注少量空气，使导尿管中不致有药液残留。然后抽出导尿管，取出开口器。如用兔固定箱，亦可一人操作。左手将开口器固定于兔口内，右手将导尿管插入食道。家兔灌胃给药时的药液容量一般为 520ml/kg。试以生理盐水进行练习。3皮下、肌内及腹腔注射 给药方法基本上同小白鼠，唯针头可稍大（6

9、号或 7 号），给药量可稍多（皮下与肌内 0.51.0ml/kg，腹腔 1.05.0ml/kg）。4静脉注射 将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖，以食指垫在兔耳拟进针部位的下面，右手持注射器（6 号），从近耳尖处将针头刺入血管。如见到针头确在血管内，即以左手将针头固定在兔耳上，将药液推入。推注时如有阻力，局部出现肿胀，表明针头不在血管内，应立即拨针重新穿刺。家兔的静脉注射量，一般药液为 0.22.0ml/kg，等渗药液可达 10ml/kg。试以生理盐水进行练习。5/76 附：其他动物的给药法 大鼠 的捉持

10、和给药法 捉持法 将大鼠放于粗糙面上，用右手拉其尾部，左手戴保护手套，以拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背部腹部。对于身体特大或凶狠易咬人的大鼠，可先以布巾包裹全身（露出口、鼻），然后进行操作。给药法 大鼠的各种给药法基本上同小鼠，唯所用的给药工具可稍大，给药量也可稍多。豚鼠的捉持和给药法 捉持法 豚鼠性温和，一般不咬人，用手握住身体即可。皮下、肌内及腹腔注射 方法基本上同小鼠，给药量可稍多。静脉注射 可选用后脚掌外侧的静脉或外颈静脉进行注射。作后脚掌外侧静脉注射时，可由一人捉豚鼠并固定一条后腿，另一人剪去注射部位的毛，用酒精棉球涂擦后脚掌外侧的皮肤使血管显露，再将连在注射器上的小儿头皮静脉输

11、液针头刺入血管。作外颈静脉注射时需先剪去一点皮肤，使血管暴露，然后将连在注射器上的小儿头皮静脉输液针头刺入。豚鼠的静脉管壁脆弱易破，操作时需特别小心。猫的给药法 皮下、肌内及腹腔注射 方法基本上同家兔。给性情暴躁的猫注射麻醉药时，可先将猫装在布袋内，然后逐渐收缩布袋，将猫推到袋角，按住头部和躯体，隔着布层作腹腔内注射。狗的给药法 给药前处置 对于未经驯服的狗，需先以特制铁钳夹住颈部，将其按倒，以绳索捆扎狗嘴，然后才可作给药操作。但是对于已经驯养，用于慢性实验的狗，切不可用铁钳夹颈。6/76 否则狗的性情将由此变得暴躁而难以操作。灌胃、皮下、肌内和腹腔注射 方法上基本上同家兔，用具和给药量应相应

12、增大。静脉注射 常用的注射部位是后肢小隐静脉，该血管由外踝前侧走向外上侧。也可选用前肢的皮下头静脉，该血管在脚爪上方背侧的正前位。注射时先局部剪毛，以酒精涂擦皮肤，一人捏紧注射肢体的上端，阻断血液回流，使静脉充盈，以便看清其走向，另一人持注射器进行静脉穿刺，将药液注入。三、实验动物的性别鉴别、编号和处死法 (一)实验动物的性别鉴别 1小鼠和大鼠 两性的区别要点有三：雄鼠可见阴囊，站位时阴囊内睾丸下垂，热天尤为明显，成熟雌鼠的腹部可见乳头；雄鼠的尿道口与肛门距离较远，雌鼠的阴道口与肛门比较靠近；肛门和生殖器间有沟的为雌鼠，无沟的为雄鼠。2豚鼠 与小鼠和大鼠基本相同。3兔 雄兔可见阴囊，两侧各有一

13、个睾丸；用拇指和食指按压生殖器部位，雄兔可露出阴茎；雌兔的腹部可见乳头。7/76 4其它较大动物，性别特点明显，不难辨认。(二)实验动物的编号 较大的动物如猫、狗、猴等，可用牌挂在动物颈部，或将特制的铝质标牌固定在耳壳上。小鼠、大鼠及家兔一般用 1%苦味酸溶液（以稀醇配制）涂于体表不同部位的毛上。方法不尽相同，以能明显区别为原则。例如 1 号涂在左前肢，2 号涂在左后肢，3 号涂右前肢，4 号涂右后肢，5 号涂头部，6 号涂背部，7 号涂尾部，8 号涂头及背部，9 号涂头及尾部，10 号不涂色等。(三)实验动物的处死法 1蛙和蟾蜍 可以断头处死。也可用探针经枕骨大孔破坏其脑和脊髓。2 小鼠和大

14、鼠 也常以断头处死。对于小鼠，还可用颈椎脱臼法处死，即用左手的拇指和食指紧按其头部，右手捉其尾根，向后猛拉，就可使其致死。3 兔、猫及狗 静脉注射空气 10 到 30 毫升，可使动物因血管气栓而死。静脉注射大剂量戊巴比妥钠等麻醉药，则更可使动物在死前免受痛苦。四、实验动物给药量的计算 在要给动物给药的时侯，常常会遇到两个问题：（1）给予 多少剂量才恰当？（2）应配成何种浓度的药液，给予多少毫升才合适？现分述其处理方法。（一）给药剂量的决定 药物对于某种动物的适当剂量得自实践经验，不能凭空推算。在我们为了某一目的准备给某种动物用药而需要解决剂量问题时，首先应该查阅该药的有关文献（学报、文摘、手册

15、和专著等），了解前人的经验。如能查到为了同一目的，给相同种类动物用药的记录，那就可以直接照试。有时侯查不到治疗剂量，但能找到致死量（LD50或 MLD），可先用 1/51/3的致死量进行尝试。如果查不到待试动物的剂量，但知道其它动物的剂量或人用剂量，这就需要加以换算。关于不同种类动物间用药剂量的换算，一般认为不能简单的按体重比例增减，而需按单位体重所占体表面积的比值来换算，其具体方法详见附录五。但换算而得的剂量仍有可能偏大或偏小，也只能当作一个参考值。（二）药液浓度的考虑与给予药液容量的计算 决定了给药剂量以后，应该怎样考虑将要配制药液的适当浓度呢？这时侯就应当从在供试动物身上，以某种特定途径

16、给药时的最适给药容量入手，现举例加以说明：8/76 例 1 已知戊巴比妥钠给家兔静脉注射时的适当剂量为 25mg/kg，问宜将戊巴比妥钠配成何种浓度的溶液，方便于给药？解：家兔静脉注射时的药液容量以 1ml/kg 较较恰当。现在即已决定采用 25mg/kg 的剂量，这就是说每 1ml 药液中以含戊巴比妥钠 25mg 为宜。25mg/ml 的浓度如用百分浓度表示，就是 2.5%。因此当需要给家兔按 25mg/kg 静脉注射戊巴比妥钠时，宜将药液配成 2.5%的浓度。在需要按照预定剂量，利用现成药液给药的时侯，又该怎样计算每个动物应当给予的毫升数呢？现再举例说明：例 盐酸吗啡给小鼠腹腔注射时的剂量

17、为 15mg/kg。现有药液的浓度为 0.1%,17g 体重的小鼠应注射此种药液多少毫升?解：按 15mg/kg 的剂量计算，17g 体重的小白鼠应给药 0.255mg，0.1%的药液每 100ml含药 100mg，即每 1ml 含药 1mg。所以该小鼠应注射盐酸吗啡溶液 0.26ml.在某些药理试验中，也按摩尔浓度配制药液，如将 1 摩尔质量的药物溶于溶剂中，配成1L 的溶液（其它浓度依此类推），表示为 1mol/L,余类推。五、实验结果的整理和实验报告的撰写 整理实验结果和撰写实验报告就是做完每项实验以后的总结工作。通过良好的总结，可使我们在实验过程中获得的感性认识提高到理性认识，明确已经

18、取得的成果，尚未解决的问题以及工作中的优缺点。实验报告是向他人提供研究经验及供本人日后查阅的重要资料。应当充分认识在校学习期间学会做这一道科学研究工作中关键性工序的重要性。（一）实验结果的整理 实验结束以后应对原始记录进行整理和分析。药理实验结果有测量资料（如血压值、心率数、瞳孔大小、体温变化、生化测定数据和作用时间等），记数资料（如阳性反应或阴性反应数、死亡或存活数等），描记曲线、心电图、脑电图、照片和现象记录等。凡属测量资料和计数资料，均应以恰当的单位和准确的数值作定量的表示，不能笼统提示。必要时应作统计处理，以保证结论有较大的可靠性。尽可能将有关数据列成表格或绘制统计图，使主要结果有重点

19、地表达出来，以便阅读、比较和分析。作表格时，一般将观察项目列在表内左侧，由上而下逐项填写，而将实验中出现的变化，按照时间顺序，由左而右逐格填写。绘图时，应在纵轴和横轴上画出数值刻度，表明单位。一般以纵轴表示反应强度，横轴表示时间或药物剂量，并在图的下方注明实验条件。如果不是连续性变化，也可用柱形图表示。凡有曲线记录的实验，应及时在曲线图上标注说明，包括实验题目，实验动物的种类、性别、体重、给药量和其他实验条件等。对较长的曲线记录，可选取有典型变化的段落，剪下后粘贴保存。这里需要注意的是必须以绝对客观的态度来进行裁剪工作，不论预期内的结果或预期外的结9/76 果，均应一律留样。（二）实验报告的写

20、作 每次实验后应写好报告，交负责老师批阅。实验报告要求结构完整、条理分明、用词规X、详略得宜、措辞注意科学性和逻辑性。一般包括下列内容：1 实验题目 2 实验目的 3 实验方法 当完全按照实验指导上的步骤进行时，也可不再重述。如果实验方法临时有所变动，或者发生操作技术方面的问题，影响观察的可靠性时，应作简要说明。4.实验结果 实验结果是实验报告中最重要的部分，需绝对保证其真实性。应随时将实验中观察到的现象在草稿本上记录，实验告一段落后立即进行整理。不可单凭记忆或搁置了长时间之后再作整理，否则易致遗漏或差错。实验报告上一般只列经过归纳、整理的结果。但原始记录应予保存备查。5.讨论 应针对实验中所

21、观察到的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识，进行分析和讨论。不能离开实验结果去空谈理论。要判断实验结果是否为预期的。如果属于非预期的，则应该分析其可能原因。6.结论 实验结论是从实验结果归纳出来的概括性判断，也就是对本实验所能说明的问题、验证的概念或理论的简要总结。不必再在结论中重述具体结果。未获证据的理论分析不能写入结论。10/76 第二章 药理学总论 实验 2.1 药物的局部作用与吸收作用 目的观察药物对动物机体的局部作用和吸收作用 材料兔子只；兔固定箱、镊子、注射器、兔用麻醉口罩；松节油、0.1硝酸士的宁、麻醉乙醚、5%水合氯醛注射液 方法 1、取兔一只放于兔固定箱内，对光观察兔耳血管粗

22、细及颜色等情况，然后对一只兔耳涂擦松节油，待两分钟后对比两只兔耳有何不同？2、将兔称重，先观察正常活动，用镊子轻击四肢和背部，看有何反应。（1）给兔皮下注射 0.2%硝酸士的宁注射液 0.2ml/kg，用药后每隔二分钟用镊子轻击四肢，观察兔有何反应。（2）待兔出现典型的士的宁中毒症状（表现为全身痉挛，角弓反 X，呼吸暂停等）后，立即套上有麻醉乙醚的兔口罩，再观察兔的反应。（3）当兔的中毒状态消失后，除去麻醉口罩，静注水合氯醛注射液 2ml/kg。讨论题 记录实验结果，说明哪种作用是局部作用？哪种作用是吸收作用？11/76 实验 2.2 药物的协同作用和拮抗作用 目的 观察激动剂与拮抗剂之间的相

23、互作用 材料 兔子只；0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液。方法 1、取兔放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。2、在兔左眼滴入.2%毛果芸香碱 3 滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15 分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。3、滴入毛果芸香碱 20 分钟后，分别在两眼滴入 0.1%肾上腺素 3 滴，15 分钟后测量两瞳孔大小，连续 3 次，取平均值并进行比较。4、滴入肾上腺素

24、 15 分钟后，分别于两眼滴入 0.05%硫酸阿托品注射液 3 滴，15 分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续 3 次，并取平均值。记录 项 目 正 常 毛果芸香碱 肾上腺素 阿托品 瞳孔 大小 左 眼 右 眼 讨论题 从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮抗作用？实验 2.3 不同给药途径对药物作用的影响 目的 观察不同途径给药对药物效应的影响 材料 小白鼠只；注射器、小白鼠灌胃器、钟罩、电子秤、镊子、3.5%硫酸镁溶12/76 液、5%炭末阿拉伯胶混悬液、0.3%戊巴比妥钠。方法 一、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的药效比较 取禁食 12h 的 XX 种小鼠 3 只，称重，分别标为对照组、灌

25、胃组和腹腔注射组按以下给药：A：对照组：灌胃给生理盐水 0.2ml/10g；B：灌胃组：灌胃给 3.5硫酸镁溶液 0.2ml/10g；C：腹腔注射组：腹腔注射给 3.5硫酸镁溶液 0.2ml/10g。给药后注意观察动物的活动情况，是否有肌肉松弛的表现。15min 后每只小鼠均灌胃给予 5%炭末阿拉伯胶混悬液 0.2ml。炭末灌胃后 15min，将小鼠脱臼处死，剖开腹腔，取出胃肠道。剪去附着在肠管上的肠系膜,将肠管不加牵引地轻轻地平铺在玻璃板上(玻璃板上滴少许盐水)。以幽门为起点,测量炭末在肠管内的移动距离和小肠(自幽门至回盲部)的全长,计算每只小鼠炭末的移动距离占小肠全长百分率，比较 3 组动

26、物的活动状况和胃肠炭末推进率有何不同。炭末推进率计算公式：炭末的移动距离（cm）小肠推进率=100%小肠全长（cm）记录 鼠号 体重(g)药物及剂量 给药途径 动物反应 炭末推进率（%）A B C 二、灌胃、皮下注射、腹腔注射戊巴比妥钠的效应比较 取体重相近的小白鼠只，称其体重分别放入钟罩内，观察它们的正常活动及翻正反射情况，然后用 0.3%戊巴比妥钠溶液 0.1ml/10g 的量以不同途径给药,甲鼠灌胃，乙鼠皮下注射，丙鼠腹腔注射。观察小白鼠用药后的反应及活动情况，以翻正反射消失时作为麻醉开始指标。记录麻醉开始时间（从给药至翻正反射消失的时间），麻醉维持时间（即从翻正反射消失至翻正反射恢复的

27、时间），麻醉深度有何不同（用镊子夹其后肢看其反应）。13/76 记录 鼠号 给药方法 麻醉开始时间 麻醉维持时间 麻醉深度 讨论题 为什么会有这些不同的结果？实验 2.4 溶液 pH 值对某些药物吸收速率的影响 目的 通过对于不同pH值的阿托品溶液滴眼后作用快慢的比较，了解溶液的 pH值对弱碱（或弱酸）性药物穿透生物膜速率的影响。材料 家兔只；兔子固定箱、滴管、测瞳尺。方法 1、取家兔只，置箱内固定。观察二眼瞳孔大小（测量瞳孔直径），及测试对光反射是否存在。2、由两人协作，同时拉开左右眼下眼睑，在左眼内滴入 pH 值为 9.0 的 1%硫酸阿托品溶液 3滴，右眼内滴入 pH 值为 5.0 的

28、1%硫酸阿托品溶液 3 滴,让药液在结膜囊内保留 2 分钟，然后放手。3、立即同时连续观察二眼瞳孔大小的变化，并测试对光反射，直至二眼瞳孔不再扩大，对光反射完全消失为止。测量瞳孔大小。比较两种阿托品溶液产生作用的快慢，并记录结果。注意 1、测试对光反射的方法为迅速以手电筒光照射兔眼。如瞳孔能随光照而缩小，即认为对光反射存在。如不能缩小，则认为对光反射消失。2、两种药液的作用差异在滴药后分钟最为明显，应抓住这一时机进行比较。此后由于分泌物的作用，溶液的 pH 值发生变化，差别就不显著了。14/76 讨论题 已知弱碱性药物阿托品在 25时的 pKa 值为 9.65,根据 Henderson-Has

29、selbalch 二氏的pKa=pH+lg未解离弱碱解离弱碱的公式，计算溶液的 pH 值为或时以未解离形式存在于溶液中的阿托品分子占有百分率。实验 2.5 肝脏功能对药物作用的影响 目的 观察肝功能损害对药物作用的影响。材料 小白鼠只；注射器、钟罩、电子秤、0.2%戊巴比妥钠溶液、20%四氯化碳泊剂。方法 取体重近似正常的小白鼠及损坏肝脏的小鼠（实验前小时皮下注射四氯化碳.1ml10g）各两只，分别由腹腔注射.2%戊巴比妥钠 0.2ml10g，记录并比较两组小白鼠麻醉持续时间有何差别？记录 组别 鼠号 体重（g）药量（ml）注射时间 产生作用时间 醒转时间 持续时间 正 常 1 2 损坏肝组

30、3 4 实验结束后将小鼠拉断颈椎处死，剖取肝脏，比较二组动物肝脏外观之不同。四氯化碳中毒小鼠的肝脏较肿大，有的充血，有的呈灰黄色，触之有油腻感，其小叶比正常肝脏更清楚。讨论题 为什么损坏肝组织的小白鼠在注射戊巴比妥钠后作用时间长？有何意义？15/76 实验 2.6 肾功能对药物作用的影响 目的观察肾功能损害对药物作用的影响 材料小白鼠只；注射器、钟罩、电子秤；0.1%氯化高汞、5%硫酸链霉素。方法 取正常小白鼠和肾功能已被破坏的小白鼠（实验前小时腹腔注射.1%氯化高汞0.07ml/10g）各只，称其体重，分别由腹腔注射硫酸链霉素 0.15ml/10g(375mg/kg)，观察小白鼠的活动情况，

31、比较两组小白鼠的变化有何差别？记录 组别 鼠号 体重（g）药量（ml）注射时间 产生作用时间 表 现 备 注 正 常 1 2 损坏肾组 3 4 实验结束后可将小鼠处死，比较二组动物肾脏的差别。氯化高汞中毒小鼠的肾脏常明显肿大。如用小刀纵切，可见到皮质部较为苍白，髓质部有充血现象。讨论题 为什么两组小白鼠的表现不同？有何意义？实验 2.7 药物的配伍禁忌 目的 了解两种或两种以上的药物配合在一起时，可能产生的配伍禁忌。材料 小白鼠 4 只、试管架、试管、乳钵、注射器、电子秤、pH 广泛试纸、蒸馏水、液体石蜡、水合氯醛、樟脑、磺胺嘧啶钠、维生素注射液、.1%肾上腺素注射液、碳酸氢钠、0.3%戊巴比

32、妥钠、1%安钠咖、4%硫酸镁、1.25%盐酸四环素、5%氯化钙。16/76 方法 一、物理性配伍禁忌 1、樟脑醑 1ml+水 1ml混浊、析出樟脑 2、液体石蜡 3ml+水 3ml分层 3、水合氯醛 2g+樟脑 2g液化 二、化学性配伍禁忌 1、10磺胺嘧啶钠ml+维生素 B1ml磺胺嘧啶（反应前后均用 pH 广泛试纸测定pH 值）2、24 万 u 青霉素钾溶液ml1.25盐酸四环素溶液ml 3、0.1盐酸肾上腺素ml碳酸氢钠ml 三、药理性配伍禁忌 1、取小白鼠 2 只称重，其中 1 只肌内注射安钠咖注射液 0.ml/10g，待分钟后二鼠分别腹腔注射 0.戊巴比妥钠液 0.ml/g，观察二鼠

33、反应有何不同？2、取小白鼠只，均肌内注射硫酸镁 0.2ml/10g，待出现肌肉松驰现象后，一只立即腹腔注射氯化钙 0.1ml/10g，观察二鼠反应有何不同？讨论题 用以上实验结果说明药物配伍禁忌的临床实用意义。实验 2.8 药物急性 LD的测定 目的 通过实验学习测定LD的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。材料 小鼠（体重 20g 左右）；测试药物、苦味酸、注射器、小鼠饲养笼 方法（以敌百虫药物为例）、预备试验（探索剂量 X 围）取小鼠-10 只，以只为一组分成组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射敌百虫溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起和 100的死亡率（至少

34、应找出引起 2080死亡率）剂量的所在 X 围（参考剂量：最小 300mg/kg，最大 1000mg/kg）。2、正式试验（）取小鼠 50 只，用苦味酸进行编号，用区组随机法进行分组，分为组，每组只小鼠。（）在预试所获得的和 100的致死量 X 围内，选用个剂量（一般用个17/76 剂量，按等比级数增减），尽可能使半数组的死亡率都在 50以上，另半数组的死亡率都在50以下。（）完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药（最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整）。3、LD测定中应观察记录的项目（1）实验各要素：实验题目，实验日期，室温

35、，检品的批号、规格、来源、理化性状、配制方法及所用浓度等；动物品系、来源、性别、体重、给药方式及剂量（药物的绝对量与溶液的容量）和给药时间等。（2）给药后各种反应：潜伏期（从给药开始出现毒性反应的时间）；中毒现象及出现的先后顺序、开始出现死亡的时间；死亡集中时间；末只死亡时间；死前现象等。逐日记录各组死亡只数。（3）尸解及病理切片：从给药时开始记时，凡两小时以后死亡的动物，均及时尸解以观察内脏的病变，记录病变情况。若有肉眼可见变化时则需进行病理检查。整个实验一般要观察天，观察结束时，对全部存活动物称体重，尸解，同样观察内脏病变并与中毒死亡尸解情况相比较。当发现有病变时，也同样作病理检查，以比较

36、中毒后病理改变及恢复情况。4、结果记录和处理（1）结果处理 实验资料按下表列出：受试物剂量 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位 LD50（mg/kg）(X)(只)（%）(Y)及置信限(95%)（2）结果计算 用简化概率法计算 LD50；计算 lgLD50的标准误（Sx50）；计算 95%的可信限；计算回归直线斜率 b；并算出 LD10，LD90。附：戊巴比妥钠半数致死量（LD50）测定的实验示例（寇氏法）方法 取体重 20g 左右小白鼠 50 只，分为 5 组，每组 10 只，各组分别腹腔注射不同剂量戊巴比妥钠，注射后 24h 记录各组出现的死亡鼠数，结果如下所示。按公式：LD50=log-1

37、Xm-i(P0.5)计算，求50。结果 18/76 组别 剂量 D(mg/kg)logD 实验鼠数 死亡鼠数 死亡反应 百分率 P LD50（mg/kg）1 187.5 2.273 10 10 100 1 2 150 2.176 10 7 70 0.7 3 120 2.079 10 6 60 0.6 120 4 96 1.982 10 2 20 0.2 5 76.8 1.885 10 0 0 0 按公式：LD50=log-1Xm-i(P0.5)计算，求50。其中：m最大剂量对数值；动物死亡率（用小数表示）；P动物死亡率的总和；i相邻两组剂量比值的对数（高剂量作分子）。求 LD50的 95%平均

38、可信限：SLD50LD504.5 LD50i1-/nP-P2 将实验结果代入上公式：mLog187.52.273 P1.0+0.7+0.6+0.2+0=2.5 ilog1505.187log1.250.0969 LD50log-1Xm-I(p-0.5)log-12.273-0.0969*(2.5-0.5)log-1（2.273-0.1938）log-12.0792 120mg/kg 讨论题 什么叫？测定的意义和根据是什么？实验 2.9 家兔血和肝中游离磺胺嘧啶浓度的测定 目的掌握磺胺药物在动物体组织和血液中浓度测定的方法；了解磺胺嘧啶在体内的分布情况。19/76 材料家兔 1 只；烧杯，试管，

39、漏斗，滤纸，试管架，研钵，注射器，小动物手术台，手术器械，刻度吸管，721 分光光度计。磺胺嘧啶钠注射液，5三氯醋酸溶液，3三氯醋酸溶液，0.1%亚硝酸钠溶液，0.5%氨基磺胺溶液，0.1%二盐酸（萘基）乙二胺溶液，磺胺嘧啶标准品，95%乙二醇，0.1氢氧化钠，4硫酸。原理 具有游离氨基的磺胺类药物在酸介质中经重氧化后可与（萘基）乙二胺产生偶合反应，生成红色的偶氮染料，再与同样处理磺胺药标准比较，即可求得体液中磺胺类药的含量，剩余的亚硝酸影响测定，以氨基磺胺钠分解除去。方法 1、配液：(1)15%的三氯醋酸溶液；(2)空白对照液(3%三氯醋酸溶液)：取 15%三氯醋酸溶液，用蒸馏水稀释即得；(

40、3)0.1%亚硝酸钠溶液；(4)0.5%氨基磺胺溶液；(5)0.5%二盐酸（萘基）乙二胺溶液：取二盐酸（萘基）乙二胺 0.5g，溶于 95%乙醇约400ml 中，再加乙醇稀释至 500ml,置棕色玻璃瓶中冰箱保存；(6)贮存标准液：精确称取磺胺嘧啶标准品 0.125g，溶于 0.1N 氢氧化钠 25ml 中，然后加 4N 硫酸 175ml，并用蒸馏水稀释至 1000ml；(7)应用标准液：精确吸取上述贮存标准液 3.0mll，置 100ml 容量瓶中，用 3%三氯醋酸液稀释至刻度。2、取兔只，静脉注射 10%磺胺嘧啶注射液 1ml/kg，半小时后心脏采血，检查血药浓度（游离磺胺测定法）。3、记

41、录 取全血 0.5ml，加蒸馏水 15.5ml 混匀，放置 15 分钟；(1)加 15%三氯醋酸溶液 4.0ml，混匀，并过滤；(3)在试管中加上述滤液5ml作为测定管，在另一试管中加入空白对照液5ml作为空白管；在另一试管中加入应用标准液 5.0ml 作为标准管。在以上三管中各加入 0.1%亚硝酸钠液，混匀，放置分钟。(4)各加入 0.5%氨基磺胺溶液 0.5ml 混合并放置 2 分钟。(5)加入 0.1%二盐酸(1萘基)乙二胺溶液 2.5ml，充分混合，放置分钟。(6)用分光光度计或光电比色计于 550nm 波长处进行比色，以空白管校正光密度到点，读取标准管和测定管光密度，计算游离磺胺药含

42、量。样品的药物浓度样品稀释倍数应用标准浓度标准管光密度测定管光密度 例如：标准管光密度为 0.5，测定管光密度为 0.4，则 20/76%12040%375.05.04.0mgmg 3、采血后立即将兔处死，打开腹腔，称取肝组织 2g，在研钵中加蒸馏水 5ml 研磨，取上清液，残渣再加蒸馏水冲洗研钵，并回收于刻度试管，共得 16ml，然后加 15%三氯醋酸4ml，混匀，静置后过滤，待测定。测定药物浓度的方法同上。计算时样品稀释倍数为 10，若标准管光密度为 0.5，测定光密度为 0.4 时，则%310375.05.04.0mgmg 4、记录并计算 血药浓度%1075.3mgmg 肝药学浓度%10

43、75.3mgmg 讨论题 试分析磺胺血药浓度和肝药浓度的高低与临床应用的关系。实验 2.10 磺胺嘧啶药动学的生物半衰期的测定 目的 了解磺胺嘧啶（）在鸡体内的代谢动力学动态规律并计算出其生物半衰期，为临床用药提供依据。材料 动物：鸡（成年健康家鸡）。、磺胺嘧啶钠注射液、三氯醋酸、0.1亚硝酸钠（贮存冰箱可保存二周）、0.5氨基横酸铵、0.1%二盐酸（萘基）乙二胺，取本品 0.5g，用 95乙醇 400ml 溶解，再用乙醇稀释至 500ml，置于棕色瓶中，（贮存于冰箱中）。、贮存标准液：精确称取被测定的磺胺嘧啶 0.125g，溶于蒸馏水中，并稀释至 1000ml，21/76 因其不易溶于水，可

44、先溶于 0.1N 氢氧化钠 25ml 中，然后加 4N 硫酸 175ml，并用蒸馏水稀释至 1000ml。、应用标准液：精确吸取上述贮存标准液 3.0ml，置于 100ml 溶量瓶中，用 3%三氯醋酸稀释至刻度。器材：721 型分光光度计、容量瓶、刻度试管、注射器、吸管、手术器械。方法、动物准备：取健康成年家鸡一只，称体重后，通常用毛巾将鸡裹住，即可被固定。或一手握住两翼根部，一手握着两爪将鸡固定好，暴露并剥离一侧静脉，手插入一根细硬塑料胶管，固定，供采血时用。、（）在注药前，由翼下静脉采血 0.5ml，作空白管用。（）快速静脉推注 10%SD 钠（70mg/kg）,注后计时。、采血：于注药后

45、的下述时间各采一次，每次 0.5ml，分别在 5、10、15、20、30、45、60采血后立即加入 15.5ml 蒸馏水，使全部溶血，放置 15后，置冰箱保荐（）。、加 15%三氯醋酸溶液 4.0ml，并过滤。、在管中加入上述滤液 5.0ml 作为测定管，在另一管中加入空白全血滤液 5.0ml 作为空白管，在另一试管中加入应用标准液 5.0ml，混合，放置三分钟。、各管分别加入 0.5%氨基磺酸铵溶液 0.5ml，混合，并放置二分钟。、各管分别加入 0.1%二盐酸 N（萘基）乙二胺溶液 2.5ml，充分混匀，放置 10分钟。8、721 型分光光度计于 545550nm 波长处进行比色，以空白管

46、校正光密度到 0 点,读取标准管和测定管光密度,标出血液中游离磺胺嘧啶的含量(mg/100ml)。稀释倍数应用标准液浓度标准管光密度测定管光密度磺胺量 稀释倍数应用标准液浓度标准管光密度测定观光密度）血药浓度（C 、模型选择与生物半衰期（t1/2）的计算：（）模型选择：将测得不同时间的血药浓度取其自然对数为纵座标，以相应时间为横座标绘制 Inct 曲线草图，按直观法（数点法）用计算器回归，求出 n 与 b 值，再确定动力学模型（此步略）。（）按各次血液中的浓度值，求出半衰期（t1/2）：将多次血药浓度值，用直线回归法求出半衰期；设为用药后的时间（以分计算），为血液中浓度对数值（浓度 mg%计算

47、）得一座标点，各点间连成直线的斜率 b：22/76 xxxyxxyb 消除速率常数e=b2.303 Ke6930)2/1(半衰期 在未知初始浓度，而知道任意时间t1和t2时的浓度 C1和 C2时，可用下式求值：21213032lgCCttKe；KeT69302/1 实验记录 采血时间（t）号 数（）光密度（）血药浓度（）取值 标准值 取值 取值 23/76 10 取值 15 取值 20 取值 30 取值 24/76 第三章 各 论 实验 3.1 普鲁卡因与丁卡因表面麻醉作用的比较 目的 了解普鲁卡因与丁卡因作用的区别。材料 兔只；.5%盐酸普鲁卡因溶液、0.6%盐酸丁卡因溶液、兔固定箱、毛剪、

48、滴管。方法、取两眼无眼疾的健康家兔只，放入固定箱内，用毛剪剪去两眼睫毛。用同一根兔须以相等的力量轻触角膜，试验正常的角膜反射。触及部位可按上、中、下、左、右的顺序，刺激五个点。全部阳性（次都不霎眼）时记/，全部阴性（次都霎眼）时记/，其余类推。、用拇指和食指将兔下眼睑拉成囊状，再用中指压住鼻泪管（以兔药液流入鼻腔），然后在两眼滴药，左眼滴入 0.5%的普鲁卡因溶液滴；右眼滴入 0.6%的盐酸丁卡因溶液滴。轻揉眼睑，使药液与角膜充分接触，并在眼中存留分钟，然后放手。滴药后每隔分钟测试角膜反射次，到分钟为止。同时观察有无结膜充血等反应，记录并比较两药之作用。记录 25/76 兔眼 滴入药物 滴 药

49、 前 角膜反射 滴药后角膜反射 5min 10min 15min 20min 25min 30min 左 普鲁卡因 右 丁卡因 讨论题、影响药物表面麻醉效果的因素有哪些？使用中需注意什么问题？3.2 肾上腺素对普鲁卡因浸润麻醉作用的影响 目的 了解肾上腺素与普鲁卡因联合用药可延长局部麻醉作用的特点。材料 兔子只；注射器、毛剪、烧杯、酒精棉球；0.2%普鲁卡因注射液、含有/10 万 0.2ml 肾上腺素的普鲁卡因注射液。方法、取家兔只，在脊背两侧各选择相互对称，直径cm 左右的部位一块，将毛剪净装于盛水的烧杯里（以免兔毛飞扬），用酒精消毒后，用针头刺皮肤，试其痛觉反应，用手掌紧贴兔背部皮肤，感觉

50、刺激部位肌肉抽缩为痛感指标。刺激方式按左、中、右、上、中、下的顺序进行。全部阳性反应记 6/6，全部阴性反应记为 0/6，其余类推。、于两背部分别用 0.2%普鲁卡因注射液 2ml 和 0.2%普鲁卡因肾上腺素注射液 2ml 作皮下注射。注射后于min、2min、5min 分别刺激注射部位测其痛觉，然后每 5min 测试一次，并比较两种药液的麻醉作用、维持时间及注射部位皮肤颜色有何不同？记录 药 物 用药前反应 用药后反应 5min 10min 15min 20min 25min 30min 35min 普鲁卡因 26/76 普鲁卡因d 讨论题 以实验结果说明普鲁卡因与肾上腺素合用的临床意义？