污水微生物的指标检查法.docx42875.pdf

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1、 实用标准文案 污水总大肠菌群的检验方法 一、采样方法 用采水器或其他灭菌容器采取污水样 1000 毫升，放入灭菌瓶内，如果是经加氯处理的污水，需加 1.5%硫代硫酸钠 5 毫升中和余氯。二、检验方法 总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌在 37 恒温箱内，培养 24 小时，能使 乳糖发酵产酸产气。总大肠菌群数系指每升污水中，所含的总大肠菌群的数目。（一）初发酵试验：以无菌操作将各盛有 3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 5 毫升的 5 支发酵管内，各接种 污水样 10 毫升，将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约 10 毫升 5 支的发酵管内，各接种污水样 1 毫升，再 将各盛有单料乳糖蛋

2、白脏培养液约 10 毫升的 5 支发酵管内，各接种 1 10 稀释的污水样 1 毫升（相当于 原污水样 0.1 毫升）。将此 15 支管已接种的发酵管置于 37 恒温箱内，培养 24 小时。（二）平板分离：经培养 24 小时后，将产酸产气及只产酸不产气的发酵管，分别接种于伊红美兰培 养基或品红亚硫酸钠培养基上，置 37 恒温箱培养 18 24 小时，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一 小部分，进行涂片、革兰氏染色、镜检。1 伊红美兰培养基上的菌落色泽：（1）深紫黑色，具有金属光泽的菌落；精彩文档 实用标准文案 （2）紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；（3）淡紫红色、中心色较深的菌落。2 品红亚

3、硫酸钠培养基上的菌落色泽：（1）紫红色，具有金属光泽的菌落；（2）深红色，不带或略带金属光泽的菌落；（3）淡红色，中心色较深的菌落。（三）复发酵试验：涂片、镜检的菌落，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取上述典型菌落 1 3 个 接种于一支单料乳糖发酵管内，然后置于 37 恒温箱内，培养 24 小时，产酸产气者（包括小量产气）即 证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管数，查对总大肠菌群近似数（MpN）检索表（附表 1.1）即是每升 污水中的大肠菌群数。此 MPN 表中所列数值系指 100 毫升水样中的细菌数，因此需将表中的数值再乘 10、为每 1000 毫升水中的细菌数。举例：某一污水

4、样接种 10 毫升的 5 支管中有 5 管为阳性；接种 1 毫 升的 5 支管中有 2 管为阳性；接种 1 10 稀释水样 1 毫升（即原污水样 0.1 毫升）的 5 支管皆为阴性，即 结果为 5、2、0，查附表 1.1 得知 100 毫升污水中总大肠菌群数为 49 个，即 1000 毫升污水中总大肠菌 群数为 49 10 490 个。精彩文档 实用标准文案 总大肠菌群近似数（MPN）检索表附表 接种量(毫升)每 100 接种量(毫升)每 100 毫升水 毫升水 样中总 样中总 10 1 0.1 大肠菌 10 1 0.1 大肠 群近似 菌群近 数 似数 0 0 0 0 0 4 0 8 0 0

5、1 2 0 4 1 9 0 0 2 4 0 4 2 11 0 0 3 5 0 4 3 13 0 0 4 7 0 4 4 15 0 0 5 9 0 4 5 17 0 1 0 2 0 5 0 9 0 1 1 4 0 5 1 11 0 1 2 6 0 5 2 13 0 1 3 7 0 5 3 15 0 1 4 9 0 5 4 17 0 1 5 11 0 5 5 19 0 2 0 4 1 0 0 2 0 2 1 6 1 0 1 4 0 2 2 7 1 0 2 6 精彩文档 实用标准文案 0 2 3 9 1 0 3 8 0 2 4 11 1 0 4 10 0 2 5 13 1 0 5 12 0 3 0

6、6 1 1 0 4 0 3 1 7 1 1 1 6 0 3 2 9 1 1 2 8 0 3 3 11 1 1 3 10 0 3 4 13 1 1 4 12 0 3 5 15 1 1 5 14 （总接种量 55.5 毫升，其中 5 份 10 毫升水样；5 份 1 毫升水样；5 份 0.1 毫升水样）续表 1 接种量(毫升)每 100 接种量(毫升)每 100 毫升水 毫升水 样中总 样中总 10 1 0.1 10 1 0.1 大肠菌 大肠菌 群近似 群近似 精彩文档 实用标准文案 数 数 1 2 0 6 2 0 0 5 1 2 1 8 2 0 1 7 1 2 2 10 2 0 2 9 1 2 3

7、 12 2 0 3 12 1 2 4 15 2 0 4 14 1 2 5 17 2 0 5 16 1 3 0 8 2 1 0 7 1 3 1 10 2 1 1 9 1 3 2 12 2 1 2 12 1 3 3 15 2 1 3 14 1 3 4 17 2 1 4 17 1 3 5 19 2 1 5 19 1 4 0 11 2 2 0 9 1 4 1 13 2 2 1 12 1 4 2 15 2 2 2 14 1 4 3 17 2 2 3 17 1 4 4 19 2 2 4 19 1 4 5 22 2 2 5 22 1 5 0 13 2 3 0 12 1 5 1 15 2 3 1 12 1 5

8、 2 17 2 3 2 17 精彩文档 实用标准文案 1 5 3 19 2 3 3 20 1 5 4 22 2 3 4 22 1 5 5 24 2 3 5 25 （总接种量 55.5 毫升，其中 5 份 10 毫升水样；5 份 1 毫升水样；5 份 0.1 毫升水样）续表 2 接种量(毫升)每 100 毫升 接种量(毫升)每 100 毫升 水样中总大 水样中总大 10 1 0.1 肠菌群近似 10 1 0.1 肠菌群近似 数 数 2 4 0 15 3 2 0 14 2 4 1 17 3 2 1 17 2 4 2 20 3 2 2 20 2 4 3 23 3 2 3 24 2 4 4 25 3

9、2 4 27 2 4 5 28 3 2 5 31 2 5 0 17 3 3 0 17 精彩文档 实用标准文案 2 5 1 20 3 3 1 21 2 5 2 23 3 3 2 24 2 5 3 26 3 3 3 28 2 5 4 29 3 3 4 32 2 5 5 32 3 3 5 36 3 0 0 8 3 4 0 21 3 0 1 11 3 4 1 24 3 0 2 13 3 4 2 28 3 0 3 16 3 4 3 32 3 0 4 20 3 4 4 36 3 0 5 23 3 4 5 40 3 1 0 11 3 5 0 25 3 1 1 14 3 5 1 29 3 1 2 17 3 5

10、 2 32 3 1 3 20 3 5 3 37 3 1 4 23 3 5 4 41 3 1 5 27 3 5 5 45 （总接种量 55.5 毫升，其中 5 份 10 毫升水样；5 份 1 毫升水样；5 份 0.1 毫升水样）精彩文档 实用标准文案 续表 3 接种量(毫升)每 100 毫 接种量(毫升)每 100 毫 升水样中 升水样中 10 1 0.1 总大肠菌 10 1 0.1 总大肠菌 群近似数 群近似数 4 0 0 13 4 4 0 34 4 0 1 17 4 4 1 40 4 0 2 21 4 4 2 47 4 0 3 25 4 4 3 54 4 0 4 30 4 4 4 62 4

11、0 5 36 4 4 5 69 4 1 0 17 4 5 0 41 4 1 1 21 4 5 1 48 4 1 2 26 4 5 2 56 4 1 3 31 4 5 3 64 4 1 4 36 4 5 4 72 4 1 5 42 4 5 5 81 4 2 0 22 5 0 0 23 4 2 1 26 5 0 1 31 4 2 2 32 5 0 2 43 精彩文档 实用标准文案 4 2 3 38 5 0 3 58 4 2 4 44 5 0 4 76 4 2 5 50 5 0 5 95 4 3 0 27 5 1 0 33 4 3 1 33 5 1 1 46 4 3 2 39 5 1 2 63 4

12、3 3 45 5 1 3 84 4 3 4 52 5 1 4 110 4 3 5 59 5 1 5 130 （总接种量 55.5 毫升，其中 5 份 10 毫升水样；5 份 1 毫升水样；5 份 0.1 毫升水样）续表 4 接种量(毫升)每 100 毫 接种量(毫升)每 100 毫升 升水样中 水样中总大 10 1 0.1 总大肠菌 10 1 0.1 肠菌群近似 群近似数 数 5 2 0 49 5 4 0 130 5 2 1 70 5 4 1 170 精彩文档 实用标准文案 5 2 2 94 5 4 2 220 5 2 3 120 5 4 3 280 5 2 4 150 5 4 4 350 5

13、 2 5 180 5 4 5 430 5 3 0 79 5 5 0 240 5 3 1 110 5 5 1 350 5 3 2 140 5 5 2 540 5 3 3 180 5 5 3 920 5 3 4 210 5 5 4 1600 5 3 5 250 5 5 5 1600（总接种量 55.5 毫升，其中 5 份 10 毫升水样；5 份 1 毫升水样；5 份 0.1 毫升水样）精彩文档 实用标准文案 污水沙门氏菌属和志贺氏菌属的检验方法 一、样品处理 水样 500 毫升，加入灭菌的 10%无水碳酸钠溶液 2 毫升，混合后，再加入灭菌的 10%硫酸铁溶液 1.75 毫升，混合均匀。静置 1

14、小时，倾去上清液（沉淀物约为 40 毫升左右）。进行沙门氏菌属和志贺氏菌属培 养。二、增菌培养 1 沙门氏菌属：吸取样品处理后的沉淀物 20 毫升，加于 20 毫升双料亚硒酸盐（SF）增菌液内，也 可加于亚硒酸盐甘露醇（SFM）或氯化镁孔雀绿（MM）增菌液内。置于 37 或 41 恒温箱；培养 24 精彩文档 实用标准文案 小时。2 志贺氏菌属：吸取样品处理后的沉淀物 20 毫升，加于 20 毫升双料革兰氏阴性（GN）增菌液内，置于 37 恒温箱，培养 6 小时。三、平板分离 1 沙门氏菌属：取上述经培养的沙门氏菌用增菌培养液，接种沙门氏菌属志贺氏菌属（SS）平 板或海克托因（Hekto en

15、 简称 HE）平板，置于 37 恒温箱培养 24 小时。也可接种亚硫酸铋（BS）平 板，置于 37 恒温箱，培养 48 小时。2 志贺氏菌属：取上述经培养的志贺氏菌用增菌培养液，接种 SS 平板或 HE 平板，置于 37 恒温箱，培养 24 小时。四、挑选菌落 1 沙门氏菌属：挑取在 SS 平板上，呈无色透明或中间有黑心，直径 1 2 毫米的菌落；挑取在 HE 平 板上，呈蓝绿色，有或无黑心，直径 1 2 毫米的菌落；挑取在 BS 平板上，呈黑色，培养基周围具有金属 光泽的菌落。2 志贺氏菌属：挑取在 SS 平板上，呈无色透明，直径 1 1.5 毫米的菌落，挑取在 HE 平板上，呈绿 色的菌落

16、。精彩文档 实用标准文案 3 每个平板最少挑取 5 个以上可疑肠道病原菌菌落，转种三糖铁或其他鉴别培养基中，置于 37 恒 温箱；培养 18 24 小时。五、生化试验及血清学检验 1 沙门氏菌属：在三糖铁培养基中，如不发酵乳糖，葡萄糖产酸产气或只产酸不产气，一般产生硫化 氢。有动力者，先与沙门氏菌 A F 群 O 多价血清作玻璃片凝集，凡与多价 O 血清凝集者，再与 O 因子 血清凝集，以确定其所属群别，然后用 H 因子血清，确定血清型。双相菌 应证实两相的 H 抗原，有 Vi 抗原的菌型（伤寒和丙型副伤寒沙门氏菌）应用 Vi 因子血清检查。化试验：应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖、蔗糖、靛

17、基质、硫化氢、动力、尿素试验。沙门氏 菌属中除伤寒沙门氏菌和鸡沙门氏菌产气外，通常发酵葡萄糖、产气、均发酵甘露醇和麦芽糖（但猪伤寒 沙门氏菌、雏沙门氏菌不发酵麦芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基质为阴性，通常产生硫代氢。除鸡、雏沙门氏菌和伤寒沙门氏菌的 O 型菌株无动力外，通常均有动力。如遇多价 O 血清不凝集而一般 生化反应符合上述情况时，可加做侧金盏花醇、水杨素和氰化钾试验，沙门氏菌均为阴性。2 志贺氏菌属：在三糖铁培养基上，葡萄糖产酸不产气，无动力，不产生硫化氢，上层斜面乳糖不分 解。生化试验：应进行葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、乳糖，蔗糖、靛基质、硫化氢、动力、尿素试验。志贺 氏菌属能分解葡萄糖，但不产气（福氏志贺氏菌 6 型有时产生少量气体），一般不能分解乳糖及蔗糖，宋 内氏志贺氏菌对乳糖及蔗糖迟缓发酵产酸。志贺氏菌属均不产生硫化氢，不分解尿素，无动力。对甘露醇、精彩文档 实用标准文案 麦芽糖的发酵及靛基质的产生，则因菌株不同而异。如遇多价血清玻璃片凝集试验为阴性，而生化反应符合上述情况时，可加做肌醇、水杨素、V P、枸 橼酸盐、氰化钾等试验。志贺氏菌属均为阴性反应。血清学检查：志贺氏菌属分为 4 个群，先与多价血清作玻璃片凝集试验，如为阳性，再分别与 A、B、C、D 群血清凝集，并进一步与分型血清做玻璃片凝集，最后确定其血清型。精彩文档