基础分子生物学复习题及答案11527.pdf

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1、根底分子生物学复习题及参考答案 一、填空题 1.核酸分子中糖环与碱基之间为 型的糖苷键，核苷与核苷之间通过磷酸二酯键连接成多聚体。2.DNA 变性后，紫外吸收增加，粘度下降，浮力密度升高，生物活性丧失。3.DNA 双螺旋直径为 2 nm，每隔 3.4nm 上升一圈，相当于 10 个碱基对。4.Z-DNA 为左手螺旋。5.hn-RNA 是真核生物 mRNA 的前体。6.用 Sanger 的链末端终止法测定 DNA 一级构造时，链终止剂是双脱氧核苷三磷酸。7.维系 DNA 双螺旋构造稳定的力主要有氢键和碱基堆积力。8.在碱性条件下，核糖核酸比脱氧核糖核酸更容易降解，其原因是因为核糖核酸的每个核苷酸

2、上-OH 的缘故。9.DNA 复制时，连续合成的链称为 前导 链；不连续合成的链称为 随从链。10.DNA 合成的原料是 四种脱氧核糖核苷三磷酸 ；复制中所需要的引物是 RNA 。11.DNA 合成时，先由引物酶合成 RNA 引物 ，再由 DNA 聚合酶在其 3端合成 DNA 链，然后由 DNA 聚合酶切除引物并填补空隙，最后由 DNA 连接酶 连接成完整的链。12.细菌的 DNA 连接酶以 NAD 为能量来源，动物细胞和 T4 噬菌体的 DNA连接酶以 ATP 为能源。13.大肠杆菌 RNA 聚合酶的全酶由2组成，其核心酶的组成为2。14.RNA 转录过程中识别转录启动子的是因子，协助识别转

3、录终止部位的是因子。15.真核细胞 mRNA 合成后的成熟过程包括 戴帽 、加尾 、剪接、甲基化修饰 。16.遗传信息由 RNA 传递到 DNA 的过程称为逆转录，由逆转录酶催化。17.反密码子第 1 位碱基和密码子第 3 碱基的配对允许有一定的摆动，称为变偶性。18.在原核细胞翻译起始时，小亚基 16SrRNA 的 3端与mRNA5端的 SD序列 之间互补配对，确定读码框架，fMet-tRNAf占据核糖体的 P 位点 位置。19.细胞多肽链合成的方向是从 N 端到 C 端，而阅读 mRNA 的方向是从 5端到 3端。20.在形成氨酰-tRNA 时，由氨基酸的 羧 基与 tRNA3末端的 羟

4、基形成酯键。为保证蛋白质合成的正确性，氨酰 tRNA 合成酶除了对特定氨基酸有很强的 专一性 之外，还能将“错误氨基酸从氨酰化-tRNA复合物上 水解 下来。21.转肽酶催化生成的化学键是 肽键 ，该酶还具有 酯酶 活性。22.肽链延伸包括：进位、成肽 、和 移位 。23.翻译延长阶段的进位，是指 氨酰-tRNA 进入 A 位。翻译延长阶段的转位是指 mRNA 与 核糖体 做相对运动。24.体大多数蛋白质形成正确的构象需要 分子伴侣 的帮助，*些蛋白质的折叠还需要 二硫键 互换酶和 脯氨酰肽酰 异构酶的催化。25.正调控和负调控是基因表达的两种最根本的调节形式，其中原核细胞常用负调控模式，而真

5、核细胞常用正调控模式。26.在原核细胞中，由同一调控区控制的一群功能相关的构造基因组成一个基因表达调控单位，称为启动子，其调控区包括启动基因和操纵基因。27.有些基因的表达较少受环境的影响，在一个生物体的几乎所有细胞中持续表达，因此被称为管家基因；另有一些基因表达极易受环境的影响，在特定环境信号刺激下，相应的基因被激活，基因表达产物增加，这种基因是可诱导的基因，相反，如果基因对环境信号应答时被抑制，这种基因是可阻遏的基因。28.在基因重组技术中，切割 DNA 用限制性核酸切酶，连接 DNA 用 DNA 连接酶 。29.除噬菌体外，质粒和病毒也是分子克隆的常用载体。30.用动物病毒 DNA 改造

6、的基因载体有腺病毒载体和反转录病载体。用于植物基因工程的常用载体是 Ti 质粒。31.将重组质粒导入细菌称转化，将噬菌体 DNA 转入细菌称转导。32.Southern印迹法、Northern印迹法和Western印迹法是分别用于研究 DNA、RNA 和蛋白质转移和鉴定的几种常规技术。二、选择题 1.有关核酸的杂交 A,C,D A.DNA 变性的方法常用加热和碱变性 B.一样来源的核酸才能通过变性而杂交 C.不同来源的核酸复性时，假设全部或局部碱基互补就可以杂交 D.杂交可以发生在 DNA 与 DNA 之间，RNA 与 DNA，RNA 与 RNA 之间 E.把待测 DNA 标记成探针进展杂交

7、2.DNA 的复性速度与以下哪些有关E A.温度 B.分子的重复序列 C.pH D.变性 DNA 的起始浓度 E.以上全部 3.*DNA 分子中腺嘌呤的含量为 15%，则胞嘧啶的含量应为(D)A15%B30%C40%D35%E70%4.DNA 变性是指(D)A分子中磷酸二酯键断裂 B多核苷酸链解聚 CDNA 分子由超螺旋双螺旋 D互补碱基之间氢键断裂 EDNA 分子中碱基丧失 5.寡聚 dT-纤维素柱层析用于(D)A.从总 DNA 中别离纯化质粒 DNA B.从总核蛋白中别离 DNP C.除去杂蛋白 D.从总 RNA 中纯化 mRNA 6.关于双螺旋构造学说的表达哪一项为哪一项错误的(C)A.

8、由两条反向平行的脱氧多核苷酸链组成 B.碱基在螺旋两侧，磷酸与脱氧核糖在外围 C.两条链间的碱基配对非常严格，A 与 T 间形成三个氢键，G 与 C 间形成两个氢键 D.碱基对平面垂直于中心轴，碱基对之间的作用力为德华力 E.螺旋每转一圈包含 10 个碱基对 7.以下关于双链 DNA 碱基含量关系，哪一个是错误的(B)A A=T，G=C B A+T=G+C C A+G=C+T D A+C=G+T 8.以下是几种 DNA 分子的碱基组成比例。哪一种的 Tm 值最高(A)A A+T=15%B G+C=25%C G+C=40%D A+T=80%9DNA 复制时，以下哪一种酶是不需要的(E)ADNA

9、指导的 DNA 聚合酶 BDNA 连接酶 C拓朴异构酶 D解链酶 E限制性切酶 10.DNA 复制中的引物是(C)A由 DNA 为模板合成的 DNA 片段 B由 RNA 为模板合成的 RNA 片段 C由 DNA 为模板合成的 RNA 片段 D由 RNA 为模板合成的 RNA 片段 E引物仍存在于复制完成的 DNA 链中 11.DNA 复制时，子链的合成是(C)A.一条链 53，另一条链 35 B两条链均为 35 C两条链均为 53 D两条链均为连续合成 E两条链均为不连续合成 12.在E.coli细胞中 DNA 聚合酶的作用主要是(C)A.DNA 复制 B.E.coliDNA 合成的起始 C.

10、切除 RNA 引物 D.冈崎片段的连接 13.需要 DNA 连接酶参与的过程有(A)ADNA 复制 BDNA 体外重组 CDNA 损伤的切除修复 DRNA 逆转录 14.DNA 损伤的光修复作用是一种高度专一的修复方式，它只作用于紫外线引起的(A)A.嘧啶二聚体 B.嘌呤二聚体 C.嘧啶-嘌呤二聚体 D.为两个单独的嘧啶碱基 15.真核细胞 RNA 聚合酶催化合成的是(B)A18SRNA BmRNA CtRNA D5SRNA ErRNA 16.转录指以下哪一过程(B)A.以 RNA 为模板合成 DNA B.以 DNA 为模板合成 RNA C.以 RNA 为模板合成蛋白质 D.以 DNA 为模板

11、合成 DNA 17.hnRNA 是(B)A.存在于细胞核的 tRNA 前体 B.存在于细胞核的 mRNA 前体 C.存在于细胞核的 rRNA 前体 D.存在于细胞核的 snRNA 前体 18.基因有两条链,与 mRNA 序列一样(T 代替 U)的链叫做(A)A.有义链 B.反义链 C.重链 D.cDNA 链 19.以下关于逆转录酶的表达哪一个是错误的(D)A.它以 RNA 为模板指导 DNA 的合成 B.它也可以 DNA 为模板指导 DNA的合成 C.它具有 RNase H 活性 D.逆转录酶的作用不需要引物 20.多肽链的氨基酸序列取决于(D)AtRNA B.18S rRNA C.28S r

12、RNA DmRNA E.氨基酰-mRNA 合成酶 21.密码 GGC 的对应反密码子是A AGCC B.CCG C.CCC D.CGC E.GGC 22.关于密码子，错误的表达是(C)A每一密码子代表一种氨基酸 B.*些密码子不代表氨基酸 C一种氨基酸只有一种密码子 D.甲硫氨酸只有一种密码子 E.密码子有种族特异性 23.一个 N 端为丙氨酸的 20 肽，其开放的阅读框架至少应该由多少个核苷酸残基组成？(C)A60 个 B.63 个 C.66 个 D.57 个 E.69 个 24.氨基酰-tRNA 中，tRNA 与氨基酸的结合键是(E)A盐键 B.磷酸二酯键 C.肽键 D.糖苷键 E.酯键

13、25.原核生物和真核生物翻译起始不同之处(B)A真核生物的 Shine-Dalgarno 序列使 mRNA 与核糖体结合 B真核生物帽子结合蛋白是翻译起始因子之一 CIF 比 eIF 种类多 D原核生物和真核生物使用不同起始密码 E原核生物有 TATAAT 作为翻译起始序列，真核生物则是 TATA 26.关于核蛋白体转肽酶，错误的表达是(C)A转肽不需要 GTP B.转肽不需要 ATP C活性中心在小亚基 D.活性中心在大亚基 E活性中心与 rRNA 有关 27.一个氨基酸参入多肽链，需要(B)A两个 ATP 分子 B一个 ATP 分子，两个 GTP 分子 C一个 ATP 分子，一个 GTP

14、分子 D两个 ATP 分子，一个 GTP 分子 E两个 GTP 分子 28.信号肽段的作用是(C)A指导 DNA 合成的启动 B指导多肽链糖基化 C引导多肽进入质网 D指导 RNA 合成的启动 E指导蛋白质合成的启动 29.多肽链合成后，其 Ser 可(B)A乙酰化 B糖基化 C磷酸化 D甲基化 E硫酸化 30.蛋白质合成后加工不包括(D)A蛋白质的磷酸化 B信号肽的切除 C蛋白质的糖基化 D酶的构像变化 E蛋白质的乙酰化 31.以下哪一种抑制剂只能抑制真核生物的蛋白质合成(C)A氯霉素 B.红霉素 C放线菌酮 D嘌呤霉素 E四环素 32一个操纵子通常含有B A.一个启动序列和一个编码基因 B

15、.一个启动序列和数个编码基因 C.数个启动序列和一个编码基因 D.数个启动序列和数个编码基因 E 两个启动序列和数个编码基因 33有关操纵子学说的论述，正确的选项是B A.操纵子调控系统是真核生物基因调控的主要方式 B.操纵子调控系统是原核生物基因调控的主要方式 C.操纵子调控系统由调节基因、操纵基因、启动子和构造基因组成 D.诱导物与阻遏蛋白结合启动转录 E.诱导物与启动子结合而启动转录 34转录因子是C A.调节 DNA 结合活性的小分子代效应物 B.调节转录延伸速度的蛋白质 C.调节转录起始速度的蛋白质 D.调节转录产物分解速度的蛋白质 E.促进转录产物加工的蛋白质 35阻遏蛋白阻抑蛋白

16、识别操纵子中的C A.启动基因 B.构造基因 C.操纵基因 D.含子 E.调节基因 36.在以下哪种情况下，乳糖操纵子的转录活性最高A A.高乳糖，低葡萄糖 B.高乳糖，高葡萄糖 C.低乳糖，低葡萄糖 D.低乳糖，高葡萄糖 E.不一定 37.顺式作用元件是指E A.基因的5侧翼序列 B.基因的3侧翼序列 C.基因的5和3侧翼序列 D.基因的 5和 3侧翼序列以外的序列 E.具有转录调节功能的特异 DNA序列 38.反式作用因子是指E A.具有激活功能的调节蛋白 B.具有抑制功能的调节蛋白 C.对自身基因具有激活功能的调节蛋白 D.对另一基因具有激活功能的调节蛋白 E.对另一基因有调节功能的蛋白

17、质因子 39.以下关于限制性切酶的表达哪一项为哪一项错误的C A.它能识别 DNA 特定的碱基顺序，并在特定的位点切断 DNA B.切割点附近的碱基顺序一般呈回文构造 C.它能专一性降解经甲基化修饰的 DNA D.是重组 DNA 的重要工具酶 E.主要从细菌中获得 40.基因工程中，不常用到的酶是C A.限制性核酸切酶 B.DNA 聚合酶 C.DNA 解链酶 D.DNA 连接酶 E.反转录酶 41 以下哪项不能作为表达载体导入真核细胞的方法？D A.磷酸钙转染 B.电穿孔 C.脂质体转染 D.氯化钙转染 E.显微注射 42.重组体的筛选方法有A A.抗药标志筛选 B.标记补救 C.分子杂交 D

18、.免疫化学 E.酶联免疫检测 43.cDNA 是指D A.在体合成的与病毒 DNA 或 RNA 互补的 DNA B.在体外经反转录合成的与 DNA 互补的 DNA C.在体外经转录合成的与 DNA 互补的 RNA D.在体外经反转录合成的与 RNA 互补的 DNA E.在体经转录合成的与 DNA 互补的 RNA 44建 cDNA 文库时，首先需别离细胞的C A.染色体 DNA B.线粒体 DNA C.总 mRNA D.tRNA E.rRNA 三、判断题()1.生物体，天然存在的 DNA 分子多为负超螺旋。()2.RNA 分子可以发生热变性，并有增色效应。()3.水分子可以插入天然 DNA 分子

19、双螺旋空隙中。()4.从构造基因中的 DNA 序列可以推出相应的蛋白质序列。()5.提高盐浓度可使 DNA 分子的熔点Tm升高。()6.RNA 的局部螺旋区中，两条链之间的方向也是反向平行的。()7.在E.coli细胞和真核细胞中都是由 DNA 聚合酶切除 RNA 引物。()8.逆转录酶催化 RNA 指导的 DNA 合成不需要 RNA 引物。()9.RNA 病毒不含 DNA 基因组，根据中心法则它必须先进展反转录，才能复制和增殖。()10.原核细胞和真核细胞的 RNA 聚合酶都能够直接识别启动子。()11.大肠杆菌染色体 DNA 由两条链组成，其中一条链充当模板链，另外一条链充当编码链。()1

20、2由于遗传密码的通用性，用原核生物表达真核基因不存在技术障碍。表达出的蛋白质通常是有功能的。()13.氨酰-tRNA 合成酶可以通过合成反响的逆反响切除误载的氨基酸。()14.所有氨酰-tRNA 合成酶的作用都是把氨基酸连接在 tRNA 末端核糖的 3-羟基上。()15.在核糖体上形成肽链所需的能量，由水解 GTP 来提供。()16.生物合成蛋白质时，A 位的氨基酸转移到 P 位，使 P 位的肽链延长，A 位空载的-tRNA 随后便脱落。()17.蛋白质能够折叠成何种三维构造，主要是由分子伴侣决定的。()18.高等真核生物的大局部 DNA 是不为蛋白质编码的。()19.大多数管家基因编码低丰度

21、的 mRNA.()20.乳糖可以诱导乳糖操纵子的表达，所以乳糖对乳糖操纵子的调控属于正调控系统。()21.*些蛋白质既可以作为阻遏蛋白又可以作为激活蛋白参与基因表达的调控。()22.准备用原核生物表达真核基因时，最好通过 cDNA 获取目的基因。()23.用原核生物表达真核生物的糖蛋白，其表达产物不会有正常的生物学功能。()24.Ti 质粒可以随土壤农杆菌进入植物细胞。()25.用 噬菌体作克隆载体时，外源 DNA 片断越小，克隆的成功率越高。()26.基因克隆选择的宿主细胞必须无限制性核酸切酶。()27.采用蓝白斑选择法时，蓝色菌落或噬菌斑是含有重组载体的克隆。()28假设 1 个氨基酸有

22、3 个遗传密码，则这 3 个遗传密码的前两个核苷酸通常是一样的。四、名词解释每题 2 分，共 20 分 1.增色效应(hyperchromic effect)；核酸从双链变为单链的无规则卷曲状态时，在 260nm 处的吸光度增加，称“增色效应。2.分子杂交molecular hybridization；不同的 DNA 片段之间，DNA 片段与 RNA 片段之间，如果彼此间的核苷酸排列顺序互补也可以复性，形成新的双螺旋构造。这种按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程称为分子杂交。3.聚合酶链式反响PCR；聚合酶链式反响PCR是扩增样品中的 DNA 量和富集众多 DNA 分子中

23、的一个特定的 DNA 序列的一种技术。在该反响中，使用与目的 DNA 序列互补的寡核苷酸作为引物，进展多轮的 DNA 合成。其中包括 DNA 变性，引物退火和在 Tap DNA聚合酶催化下的 DNA 合成。4.DNA 的变性与复性denaturation and renaturation of DNA；DNA 的变性是指 DNA 双螺旋区的氢键断裂，变成单链并不涉及共价键的断裂。DNA 的复性是指变性 DNA 在适当条件下，又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋构造。5.Tm；通常把加热变性DNA使增色效应到达最大增量一半时的的温度称为该DNA的熔点或熔解温度，用 Tm 表示。6.含子与外显

24、子 含子是指构造基因中存在于外显子之间的非编码序列，也是基因中不表达的序列，属插入序列。外显子是指基因中编码蛋白质的序列。7.半保存复制；DNA 复制的一种方式。每条链都可用作合成互补链的模板，合成出两分子的双链 DNA，每个分子都是由一条亲代链和一条新合成的链组成。8.冈崎片段；相比照拟短的 DNA 链大约 1000 核苷酸残基，是在 DNA 的滞后链的不连续合成期间生成的片段，这是 Reiji Okazaki 在 DNA 合成实验中添加放射性的脱氧核苷酸前体观察到的。9.复制体；一种多蛋白复合体，包含 DNA 聚合酶，引发酶，解旋酶，单链结合蛋白和其它辅助因子。复制体位于每个复制叉处，进展

25、染色体 DNA 复制的聚合反响。10.编码链；双链 DNA 中，不能进展转录的那一条 DNA 链，其核苷酸序列与转录生成的RNA 的序列一致在 RNA 中是以 U 取代了 DNA 中的 T。11.含子；在转录后的加工中，从最初的转录产物除去的部的核苷酸序列。术语含子也指 DNA中编码相应 RNA 的区域。12.外显子e*on 既存在于最初的转录产物中，也存在于成熟的 RNA 分子中的核苷酸序列。术语外显子也指 DNA 中编码相应 RNA 的区域。13.遗传密码；DNA 编码链或 mRNA 上的核苷酸，以 3 个为一组三联体决定 1 个氨基酸的种类，称为三联体密码。mRNA 的三联体密码是连续排

26、列的，因此，mRNA 的核苷酸序列可以决定蛋白质的一级构造。14.摆动假说；mRNA 上的密码子与 tRNA 上的反密码子相互辩认，大多数情况是遵从碱基配对规律的。但也可出现不严格的配对，这种现象就是遗传密码的摆动性，tRNA 分子上有相当多的稀有碱基，例如次黄嘌呤inosine,I常出现于三联体反密码子的 5端第一位，它和 mRNA 密码子第 3 位的 A、C、U 都可以配对。15.SD 序列；位于 mRNA 分子 AUG 起始密码子上游约 813 个核苷酸处，由 46 个核苷酸组成的富含嘌呤的序列，以-AG-GA-为核心。SD 序列同 16S rRNA 近 3-末端的序列互补，在核糖体与

27、mRNA 的结合过程中起重要作用。16.信号肽；是未成熟的分泌性蛋白质中可被细胞转运系统识别的特征性氨基酸序列。有碱性 N-末端区、疏水核心区及加工区三个区段。蛋白质被转运到细胞的一定部位后，信号肽即被切除。17.多聚核糖体 是由 1 个 mRNA 分子与一定数目的单个核糖体结合而成的串珠状排列。每个核糖体可以独立完成一条肽链的合成，所以多个核糖体上可以同时进展多条肽链的合成，可以加速蛋白质的合成速度，提高模板 mRNA 的利用率。18.操纵子；原核生物的几个功能相关的构造基因往往排列在一起，转录生成一个 mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化*一代过程的酶，或共同完成*

28、种功能。这些构造基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。19.启动子；是 RNA 聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。在真核基因中增强子和启动子常交织覆盖或连续。有时，将构造密切联系而无法区分的启动子、增强子样构造统称启动子。20.增强子；是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在 SV40 病毒中发现的长约200bp 的一段 DNA，可使旁侧的基因转录提高 100 倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占 100200bp 长度，也和启动子一样由假设干组件构成，根本核心组件常为 812bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式

29、存在。21.衰减子；在原核生物的 Trp 操纵子构造中，第一个构造基因与启动子 P 之间有一个区域含 Trp 密码子，称衰减子。当环境中 Trp 浓度很高时，它可通过编码并翻译，使正在转录的 mRNA 形成终止信号，从而终止 Trp 操纵子的表达。这种转录衰减实质上是转录与一个前导肽翻译过程的偶联，它是原核生物特有的一种基因调控机制。22.反式作用因子；大多数真核转录调节因子由*一基因表达后，通过与特异的顺式作用元件相互作用DNA-蛋白质相互作用，或通过与基它调节因子的相互作用蛋白质-蛋白质相互作用，反式激活另一基因的转录，故称反式作用蛋白或反式作用因子。23.顺式调控元件：指可影响自身基因表

30、达活性的真核 DNA 序列。根据顺式作用元件在基因中的位置、转录激活作用的性质及发挥作用的方式，分为启动子、增强子及沉默子等。24.降解物基因活化蛋白；也就是 cAMP 受体蛋白cAMP receptor protein,CRP，它与 cAMP 的复合物可以促进*些原核操纵子如乳糖操纵子的转录。25.克隆技术；“克隆作为名词指一样的分子或细胞构成的群体，或一个共同的祖先通过无性繁殖所得到的群体，作为动词指获取“克隆的过程。克隆技术特指获取“克隆的过程，包括分子克隆，细胞克隆等技术。26.限制性核酸切酶；就是识别 DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链 DNA 的一类核酸切酶。限制性核

31、酸切酶存在于细菌体，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制、修饰体系，限制外源 DNA，保护自身 DNA，对保持细菌遗传物质的稳定具有重要意义。限制性核酸切酶分为三类，其中的类酶能特异性在一定的核苷酸序列处切割双链 DNA，因而在基因工程中得到广泛的应用。27.基因组 DNA 文库；利用限制性核酸切酶将染色体 DNA 切割成一定大小的片段，将这些片段分子与适当的克隆载体拼接成重组 DNA 分子，继而转入受体菌，使每个细菌都携带一种重组 DNA 分子。不同细菌中的重组 DNA 分子可能包含不同的染色体 DNA 片段，这样，只要得到的转化细菌所携带的重组 DNA 分子种类足够多，则全部转化细菌所携

32、带的各种染色体片段就代表了染色体的整个基因组。存在于转化细菌，由克隆载体所携带的所有基因组 DNA 片段的集合称基因组 DNA 文库。基因组 DNA 文库涵盖了基因组的全部基因信息。28.cDNA 文库 以 mRNA 为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成 cDNA，与适当的载体 常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段 cDNA，并能繁殖扩增，这样包含着细胞全部 mRNA 信息的 cDNA 克隆集合称为该组织细胞的 cDNA文库。基因组含有的基因在特定的组织细胞中只有一局部表达，而且处在不同环境条件、不同分化时期的细胞其基因表达的种类和强度也不尽一样，所以 cDNA 文库具有

33、组织细胞特异性。cDNA 文库显然比基因组 DNA 文库小得多，能够比拟容易从中筛选克隆得到细胞特异表达的基因。另外，对真核细胞来说，从基因组 DNA 文库获得的基因与从 cDNA 文库获得的不同，基因组 DNA 文库所含的是带有含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接，去除了含子的cDNA。一般来说，从 cDNA 文库获得的基因，因不含含子而片段较小，更适合于用作基因工程的目的基因。由于原核生物不存在将 hnRNA 加工成 mRNA 的酶系统，假设用原核生物表达真核基因，则目的基因一定要通过 cDNA 获取。五、分析计算题 1.简述 B-DNA 的构造特征。1两条反向平

34、行的多核苷酸链围绕同一中心轴相互缠绕形成右手螺旋；2嘌呤和嘧啶碱位于双螺旋的侧，磷酸和核糖在外侧，彼此通过 3，5磷酸二酯键相连接，形成 DNA 分子的骨架。碱基平面和纵轴垂直，糖环的平面则和纵轴平行；3双螺旋的平均直径为 2nm，两个相邻的碱基对之间相距的高度，碱基堆积距离为 0.34nm，两个核苷酸之间的夹角为 36 度；4两条核苷酸链依靠彼此碱基之间形成的氢键相联系而结合在一起；5碱基在一条链上的排列顺序不受任何限制。2.何谓 Tm？影响 Tm 大小的因素有哪些？在实验中如何计算 Tm 值？DNA 的变性从开场解链到完全解链，是在一个相当窄的温度围完成的，在这一围，紫外线吸收值的增加量到

35、达最大增加量的 50%时的温度为 DNA 的解链温度 溶解温度，melting temperature,Tm。Tm 值大小主要与 GC 含量有关，GC 含量越高，Tm 值越大；另外核酸分子越大，Tm 值也越大，溶液 pH 值大于 11.3，核酸完全变性，小于 5.0 则核酸容易脱嘌呤。降低溶液的离子强度会使 Tm 值下降，尿素等变性剂也会使 Tm 值下降。在实验中，Tm 值计算公式：Tm=69.3+0.41(G+C%),小于 20bp的寡核苷酸：Tm=4G+C+2A+T。3.如果人体有 1014个细胞，每个体细胞的 DNA 含量为 6.4109个碱基对。试计算人体 DNA 的总长度是多少？是太

36、阳-地球之间距离2.2109公里 的多少倍？双链 DNA 每 1000 个核苷酸重 110-18g，求人体的 DNA 的总质量。每个体细胞的 DNA 的总长度为：6.41090.34nm=2.176109 nm=2.176m，3.人体所有体细胞的 DNA 的总长度为：2.176m1014=2.1761011km 这个长度与太阳-地球之间距离2.2109公里相比为：2.1761011/2.2109=99倍，每个核苷酸重 110-18g/1000=10-21g，所以，总DNA 6.4102310-21=6.4102=640g 4.什么是 DNA 变性？DNA 变性后理化性有何变化？DNA 双链转化

37、成单链的过程成变性。引起 DNA 变性的因素很多，如高温、超声波、强酸、强碱、有机溶剂和*些化学试剂如尿素，酰胺)等都能引起变性。DNA变性后的理化性质变化主要有：1天然 DNA 分子的双螺旋构造解链变成单链的无规则线团，生物学活性丧失；2天然的线型 DNA 分子直径与长度之比可达 1：10，其水溶液具有很大的黏度。变性后，发生了螺旋-线团转变，黏度显著降低；3在氯化铯溶液中进展密度梯度离心，变性后的 DNA 浮力密大大增加；4沉降系数 S 增加；5DNA 变性后，碱基的有序堆积被破坏，碱基被暴露出来，因此，紫外吸收值明显增加，产生所谓增色效应。6DNA 分子具旋光性，旋光方向为右旋。由于 D

38、NA 分子的高度不对称性，因此旋光性很强，其a=150。当 DNA 分子变性时，比旋光值就大大下降。5.什么是核酸杂交？有何应用价值？热变性后的 DNA 片段在进展复性时，不同来源的变性核酸DNA 或 RNA只要有一定数量的碱基互补不必全部碱基互补，就可形成杂化的双链构造。此种使不完全互补的单链在复性的条件下结合成双链的技术称为核酸杂交。用被标记的碱基序列的单链核酸小分子作为探针，可确定待检测的 DNA，RNA 分子中是否有与探针同源的碱基序列。用此原理，制作探针，再通过杂交，可用于细菌，病毒，肿瘤和分子病的诊断基因诊断。也可用于基因定位，目的基因筛选，基因表达状况的分析等研究工作。6.假设使

39、15N 标记的大肠杆菌在14N 培养基中生长三代，提取 DNA，并用平衡沉降法测定DNA密度，其14N-DNA 分子与14N15N杂合 DNA 分子之比应为多少？15N 标记的大肠杆菌利用培养基中的14N 合成 DNA，第一代 DNA 双链都是14N15N 杂合 DNA 分子。第二代分别是以第一代中的14N 和15N 链作为母链合成新的DNA，所以14NDNA 分子与14N15N 杂合 DNA 分子之比为 1：1。第三代中的14N和15N 母链的分子之比是 3：1，所以14NDNA 分子与14N15N 杂合 DNA 分子之比应为 3：1。7.真核生物 DNA 聚合酶有哪几种？它们的主要功能是什

40、么？真核生物的 DNA 聚合酶有、五种，均具有 5 3聚合酶活性，DNA 聚合酶、和有 35外切酶活性，DNA 聚合酶 和 无外切酶活性。DNA 聚合酶 用于合成引物，DNA 聚合酶用于合成细胞核 DNA，DNA 聚合酶 和主要起修复作用，DNA 聚合酶用于线粒体 DNA 的合成。8.真核细胞中有几种 RNA 聚合酶？它们的主要功能是什么？真核生物的 RNA 聚合酶，按照对-鹅膏蕈碱的敏感性不同进展分类：RNA 聚合酶根本不受-鹅膏蕈碱的抑制，在大于 10-3mol/L 时才有轻微的抑制。RNA 聚合酶对-鹅膏蕈碱最为敏感，在 10-8mol/L 以下就会被抑制。RNA 聚合酶对-鹅膏蕈碱的敏

41、感性介于聚合酶和聚合酶之间，在 10-5mol/L 到 10-4mol/L 才会有抑制现象。RNA聚合酶存在于核仁中，其功能是合成5.8SrRNA、18 S rRNA和28 SrRNA。RNA 聚合酶存在于核质中，其功能是合成 mRNA、snRNA。RNA 聚合酶也存在于核质中，其功能是合成 tRNA 和 5 SrRNA 及转录 Alu 序列。9.真核生物三类启动子各有何构造特点？真核生物三类启动子分别由 RNA 聚合酶 I、II、III 进展转录。类别 I 启动子包括核心启动子和上游控制元件两局部，需要 UBF1 和 SL1 因子参与作用。类别 II 启动子包括四类控制元件：根本启动子、起始

42、子、上游元件和应答元件。识别这些元件的反式作用因子由通用转录因子、上游转录因子和可诱导的因子。类别 III 启动子有两类：上游启动子和基因启动子，分别由装配因子和起始因子促进转录起始复合物的形成和转录。10论述遗传密码的特点。1遗传密码为三联体：模板从 mRNA5端的起始密码子开场，到 3端的终止密码称为开放读码框架。在框架每 3 个碱基组成 1 个密码子，决定 1 个氨基酸。2遗传密码的种类：遗传密码共 64 个，其中 61 个密码子分别代表各种氨基酸。3 个为肽链合成的终止信号。位于 5端的 AUG，除了代表甲硫蛋氨酸外，还是肽链合成的起始信号。3遗传密码的连续性：对 mRNA 分子上密码

43、子的阅读方法叫读码。正确读码是每 3 个相邻碱基一组，不连续地连续读下去，直到出现终止密码为止。mRNA 上碱基的插入和缺失，可导致框移突变。4遗传密码的简并性：有61 个密码子代表 20 种氨基酸，每个密码子只代表一种氨基酸，而多数氨基酸都有 24 个密码子，这种由几个密码子编码同一氨基酸的现象称为简并性。从密码表上可看出密码子的第 3 位碱基通常是简并的。5遗传密码的摆动性：指密码子与反密码子配对不遵从碱基配对规律，此不严格的配对关系称为摆动性。如丙氨酰-tRNA反密码子的第 1 位碱基 I 可以与密码子第 3 位的 A、C 或 U 配对。遗传密码的摆动性使一种 tRNA 可以识别几种代表

44、同一种氨基酸的密码子。6遗传密码的通用性：从细菌到人的遗传密码都市通用的，但近年发现哺乳类动物线粒体的蛋白质合成体系中有个别例外。如 UAG 不代表终止密码子，而代表色氨酸；CUA 不代表亮氨酸，而代表氨酸。7遗传密码的防错系统：由于遗传密码的简并性，有 4 个密码的氨基酸，其第三位的碱基被替换，仍编码同一种氨基酸，从遗传密码表可以看出，只要遗传密码的第二位是 U，则第一位和第三位不管怎么变化，其编码的氨基酸总是疏水性的，如第二位是 C，则其编码的氨基酸是非极性的或极性不带电荷的，假设第二位为 A 或 G，则编码的氨基酸 R 基是亲水性的，第一位是 A 或 C，第二位是 A或 G，则编码的氨基

45、酸 R 基是碱性的，假设前两位是 AG 则编码的氨基酸 R 基是酸性的。这些规律使*些核苷酸的替换可以不引起肽链中氨基酸的变化，或被替换的氨基酸理化性质相似。这便是密码的防错系统。11.如果 mRNA 上的阅读框已被确定，它将只编码一种多肽的氨基酸顺序。从一蛋白质的氨基酸顺序，是否能确定唯一的一种 mRNA 的核苷酸序列？为什么？由于 1 个密码子只能编码一种氨基酸，在 mRNA 的开放阅读框确定后，用遗传密码可以推出其相应蛋白质的氨基酸序列。由于 mRNA 是由 DNA 转录而来的，如果基因DNA编码区的序列，也可由此推出相应表达产物的氨基酸序列。但是，由于除甲硫氨酸和色氨酸外的 18 种氨

46、基酸均有一种以上的密码子，由蛋白质的氨基酸序列推断相应 mRNA 的核苷酸序列时，我们会面临多种选择。比方，由 7 个氨基酸的序列推测其可能的 mRNA 编码区序列，假设其中有 5 个氨基酸有 2 个密码，则能够与其相对应的核苷酸序列会有 25种，即有 32 种。12.如果 E.Coli 染色体 DNA 的 75%可用来编码蛋白质，假定蛋白质的平均相对分子质量为 60000，以三个碱基编码一个氨基酸计算，1假设该染色体 DNA 大约能编码 2000 种蛋白质，求该染色体 DNA 的长度？2该染色体 DNA 的相对分子质量大约是多少？氨基酸残基的平均相对分子质量是 120，核苷酸对的平均相对分子

47、质量是 640。1因为蛋白质的平均相对分子质量为 60000，氨基酸残基的平均相对分子质量为 120，则蛋白质的平均氨基酸残基的个数为 60000/120=500 个，编码 2000 种蛋白至少需要 20005003 个密码子，而 DNA 碱基的 75%用来编码这 2000 个蛋白，则该染色体 DNA 的长度为：20005003/75%=4000000bp。假设该 DNA 为 B-DNA，每个 bp 使螺旋轴延伸 0.34nm，则其长度应为：0.344000000=1360000nm；2该染色体 DNA 的相对分子质量大约是 6404000000=2560000000=2.56109 Da。1

48、3.原核生物与真核生物翻译起始阶段有何异同？一样之处：1都需生成翻译起始复合物；2都需多种起始因子参加；3翻译起始的第一步都需核糖体的大、小亚基先分开；4 都需要 mRNA 和氨酰-tRNA结合到核糖体的小亚基上；5mRNA 在小亚基上就位都需一定的构造成分协助。6小亚基结合 mRNA 和起始者 tRNA 后，才能与大亚基结合。7都需要消耗能量。不同之处：1真核生物核糖体是 80S40S+60S；eIF 种类多10 多种；起始氨酰-tRNA 是 met-tRNA不需甲酰化，mRNA 没有 SD 序列；mRNA 在小亚基上就位需 5端帽子构造和帽结合蛋白以及 eIF2；mRNA 先于 met-t

49、RNA 结合到小亚基上。2原核生物核糖体是 70S30S+50S；IF 种类少3 种；起始氨酰-tRNA是 fmet-tRNA需甲酰化；需 SD 序列与 16S-tRNA 配对结合，rps-1 辩认识别序列；小亚基与起始氨酰-tRNA 结合后，才与 mRNA 结合。14.简述信号肽假说的根本容。蛋白质合成后的靶向输送原理，有几种不同的学说，信号肽假说是目前被普遍承受的学说之一。分泌性蛋白质的初级产物 N-端多有信号肽构造，信号肽一旦合成蛋白质合成未终止，即被胞浆的信号肽识别蛋白SRP结合，SRP 与质网膜的侧面的受体即对接蛋白DP结合，组成一个输送系统，促使膜通道开放，信号肽带动合成中的蛋白质

50、沿通道穿过膜，信号肽在沿通道折回时被膜上的信号肽酶切除，蛋白质在质网和高尔基体经进一步修饰如糖基化后，即可被分选到细胞的不同部位。15.肽链合成后的加工修饰有哪些途径？蛋白质合成后的加工修饰容有：1肽链的剪切：如切除 N 端的 Met，切除信号肽，切除蛋白质前体中的特定肽段。2氨基酸侧链的修饰，如：磷酸化、糖基化、甲基化等。3二硫键的形成。4与辅基的结合。16.简述操纵子的根本构造。操纵子的调控区有一个操纵序列，一个启动序列及一个 CAP 位点，调控区下游有几个构造基因，还有一个调节基因编码阻遏蛋白，阻遏蛋白与操纵序列结合，使操纵子受阻遏而处于关闭状态。假设 cAMP 与 CAP 结合，形成的