习题核酸分子杂交技术12959.pdf

《习题核酸分子杂交技术12959.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《习题核酸分子杂交技术12959.pdf（11页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 第二章 核酸杂交技术（一）名词解释 1原位杂交 2核酸分子杂交技术 3探针 4反向点杂交 5缺口平移标记法 6随机引物标记法 7末端标记法 8Southern blot 杂交 9荧光原位杂交 10菌落杂交（二）选择题【A 型题】1DNA 链的 Tm 值主要取决于核酸分子的（）A GC 含量 B AT 含量 C AG 含量 D AC 含量 E TG 含量 2液相杂交是下列哪一种（）A Southem 印迹杂交 B Northem 印迹杂交 C Dot 印迹杂交 D Slot 印迹杂交 E RPA 实验 3研究得最早的核酸分子杂交种类是（）A 菌落杂交 B Southern杂交 C Northe

2、rn杂交 D 液相杂交 E 原位杂交 4Southern 杂交通常是指（）A DNA 和 RNA 杂交 B DNA 和 DNA 杂交 C RNA 和 RNA 杂交 D 蛋白质和蛋白质杂交 E DNA 和蛋白质杂交 5最容易降解的核酸探针是()A cDNA 探针 B dsDNA 探针 C ssDNA 探针 D gDNA 探针 E:RNA 6探针基因芯片技术的本质就是（）A 核酸分子杂交技术 B 蛋白质分子杂交技术 C 聚合酶链反应技术 D 基因重组技术 E 酶切技术 7DNA 探针的长度通常为()A 1000 2000 个碱基 B 500 1000 个碱基 C 400 500 个碱基 D 100

3、 400 个碱基 E.100 个碱基 8寡核苷酸探针的最大的优势是（）A 杂化分子稳定 B 可以区分仅仅一个碱基差别的靶序列 C 易标记 D 易合成 E 易分解 9在 Southern 印迹中常用的核酸变性剂是()A 甲醛 B 乙醛 C 氢氧化钠 D 碳酸钠 E 盐酸 10盐酸硝酸纤维素膜最大的优点是（）A 脆性大 B 本底低 C 共价键结合 D 非共价键结合 E 高结合力 11最常用的 DNA 探针标记方法是()A 随机引物 B 切口平移 C 3-末端标记 D 5-末端标记 E PCR 法 12为了除去探针，重复使用滤膜，以下哪种情况不可以发生（）A 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经干

4、燥过 B 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经湿润过 C 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经温浴过 D 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经漂洗过 E 探针在预杂交与除去探针之间的过程中曾经标记过 135一末端的 DNA 探针标记主要依靠的酶是()A T4多聚核苷酸激酶 B 末端转移酶 C AKP D DNA pol E DNA pol 14血友病是一种（）A 染色体病 B X 连锁遗传病 C 先天性代谢缺陷病 D 先天畸形 E 常染色体隠性遗传病 15预杂交中最常用的封闭剂是()A Denhavdts 溶液 B 5TBE C 1TBE D 1TAE E 1TPE 16检测目标是 RN

5、A 的技术是（）A Southern杂交 B Western 杂交 C Northern杂交 D Eastern 杂交 E 杂交淋巴瘤 17检测靶序列是 DNA 的技术是（）A Southern杂交 B Western 杂交 C Northern杂交 D Eastern 杂交 E 杂交淋巴瘤 18DNA 双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，DNA分子成为单链，这一过程称（）A 变性 B 复性 C 复杂性 D 杂交 E 探针 19具有碱基互补区域的单链又可以重新结合形成双链，这一过程称（）A 变性 B 复性 C 复杂性 D 杂交 E 探针 20一种标记核酸与另一种核酸单链进行配对形成异源核酸分子的双

6、链，这一过程称（）A 变性 B 复性 C 复杂性 D 杂交 E 探针 21点/狭缝杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因 B 不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C 用于基因定位分析 D 阳性菌落的筛选 E 蛋白水平的检测 22放射自显影时反射光产生的潜影 在低温下较稳定，最适温度是()A -70 B -30 C -20 D -10 E 4 23Southern 印迹杂交可以用于（）A 不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 B 检测的目标是 RNA C 用于基

7、因定位分析 D 阳性菌落的筛选 E 蛋白水平的检测 24寡核苷酸探针的Tm 简单计算公式为()A Tm=4(G+C)+2(A+T)B Tm=2(G+C)+4(A+T)C Tm=6(G+C)+4(A+T)D Tm=2(G+C)+6(A+T)E Tm=6(G+C)+2(A+T)25Northern 印迹杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因 B 不仅可以检测 DNA 样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息 C 检测的目标是 RNA D 用于基因定位分析 E 阳性菌落的筛选 26 26荧光原位杂交可以用于（）A 快速确定是否存在目的基因 B 检测的目标是

8、 RNA C 用于基因定位分析 D 阳性菌落的筛选 E 蛋白水平的检测 27以等位基因特异的寡核苷酸探针杂交法诊断某常染色体隐性遗传病时，若能与突变探针及正常探针接合，则该样本为（）A 正常人 B 杂合体患者 C 纯合体患者 D 携带者 E 不能确定 28 在pH为下述何种范围时，Tm值变化不明显()A pH 为 35 B pH 为 45 C pH 为 56 D pH 为 59 E pH 为 811 29一般来说，设计的寡核苷酸探针的长度为（）A 2-10bp B 17-50bp C 60-100bp D 100-200bp E 200-300bp 30变性剂可使核酸的 Tm 值降低，常用的变

9、性剂是()A 甲酰胺 B 氢氧化钠 C 浓盐酸 D 稀盐酸 E 甲醇 31下列有关 cDNA 探针的描述不正确的为（）A 利用 mRNA 通过 RT-PCR 在体外反转录可制备大量的 cDNA 探针 B cDNA 探针不包含内含子 C cDNA 探针不包含大量的高度重复序列 D 由于 cDNA 探针自身所携带的 poly（dT），有可能产生非特异性杂交的问题 E cDNA 探针合成方便，成为探针的重要来源 32一般来说核酸杂交的温度低于其 Tm 值的多少度进行()A 1525 B 1015 C 510 D 3040 E 4050 33对于寡核苷酸探针，杂交温度一般般低于其 Tm值()A 304

10、0 B 2030 C 1530 D 1015 E 5 34一般情况下，不含变性剂甲酰胺时，杂交反应常在多少下进行()A 90 B 80 C 75 D 68 E 58 35在含 50%甲酰胺时，杂交反应在多少进行()A 70 B 65 C 55 D 42 E 35 36 杂交时的温度与错配率有关，错配率每增加 1%，则 Tm 值下降()A 0.5 B 11.5 C 22.5 D 33.S E 44.5 37RNA/RNA 的杂交体的 Tm 值一般应增加()A 15 B 510 C 1015 D 1520 E 2025 38杂交的时间一般为Cot1/2的()A l 倍 B 13 倍 C 3 5 倍

11、 D 58 倍 E 10 倍以上 39为封闭非特异性杂交位点，可在预杂交液中加入()A ssDNA B 1SSC C 10SSC D 5TBEC E 50TAE 40随机引物法标记探针常用的 A、G、C、T 聚合体的数目是()A 4 个 B 6 个 C 8 个 D 10 个 E 12 个 【X 型题】41下列哪些是影响DNA 复性的因素()A DNA 浓度 B DNA 的分子量 C 温度 D 碱基组成 E DNA 的来源 42 DNA 探针的优点有（）A 制备方法简单 B DNA 探针易降解 C DNA 探针的标记方法成熟，有多种方法可以选择 D 克隆在质粒载体中，可以无限繁殖，取之不尽 E

12、单链，不存在竞争性的自身复性 43以下哪些方法可以用于探针的全程标记（）A DNA 加尾法 B DNA 切口平移标记法 C 随机引物标记法 D 末端标记 E 尾端标记 44关于 DNA 变性的描述正确的是()A 二级结构破 B 一级结构破坏 C 黏度降低 D 生物活性丧失 E 浮力密度增加 45以下哪些因素可以使DNA 变性（）A 增加溶液的浓度 B 加热 C 改变溶液的 pH 值 D 有机溶剂 E 冷藏 46预杂交中，下列能起封闭作用的是()A ssDNA B BSA C 小牛胸腺 DNA D 脱脂奶粉 E DTT 47变性的 DNA 会发生哪些理化性质的变化（）A 粘度下降 B 沉降速度增

13、加 C 浮力下降 D 紫外光吸收增加 E 紫外光吸收减少 48.下列物质适于非放射性探针标记的是()A AKP B ACP C 生物素 D 地高辛 E 荧光素 49关于人工合成的寡核苷酸探针，下列描述正确的是()A 特异性高 B 可依赖氨基酸序列推测其序列 C 分子量小 D 可用于相似基因顺序差异性分析 E 可用末端转移酶进行 5端标记 50通过哪些措施可以提高杂交反应的速度（）A 采用大片段探针 B 少量的反应体积 C 高反应温度 D 不断的振摇 E 大量的反应体积 51关于切口平移法下述正确的是()A 可标记线性 DNA B 可标记松散螺旋 DNA C 可标记超螺旋 DNA D 可标记存在

14、缺口的双链 DNA E 可标记随机引物 52以下哪些方法可以用于从凝胶上转移DNA（）A 毛细转移 B 真空转移 C 负压转移 D 电泳转移 E 冷冻转移 53关于随机引物法标记探针下述正确的是()A 可标记单链 DNA B 可标记双链 RNA C 可标记单链 RNA D 比活性高达 108cpmg DNA 以上 E 常经过 SephadexG-50 纯化才可使用 54可以采用哪些方法来标记探针（）A 杂交标记法 B 切口平移标记法 C 5-末端的标记 D 3-末端的标记 E 化学法延长标记 55整个杂交反应主要以下哪些步骤组成（）A 预杂交 B 杂交 C 洗脱 D 固定 E 转移 56放射自

15、显影可以被分为（）A 直接放射自显影 B 氧化显影 C 封闭显影 D 间接放射自显影 E 固定显影 57关于电转移下列描述正确的是()A 快速、高效 B 需要特殊设备 C 缓冲液用 TAE 或 TBE D 可产生高温 E 常用 NC 膜作为支持介质 58预杂交的主要目的是（）A 平衡滤膜 B 封闭非特异性杂交的位置 C 提高杂交信号的检测效率 D 便于从滤膜上除去探针 E 清除用于杂交反应检测的显色物质 59.关于非放射性探针标记，下列描述正确的是()A 对人体危害小 B 需要特殊设备 C 可长时间使用 D 灵敏度不如放射性探针 E 重新杂交新探比较容易 60对于改变 DNA 片段长度的突变，

16、可以由于缺失或插入产生，或由于限制性酶切位点改变而导致限 制性片段长度改变。可以通过哪些方法检测（）A PCR 扩增 B RAPD C Southerm 印迹杂交 D Northern 印迹杂交 E 以上都不是 61重组 DNA 的筛选可用核酸分子杂交的方法，常用于检测 DNA 的杂交方法有哪些（）A 菌落印迹杂交 B Northern印迹杂交 C Western 印迹杂交 D 原位杂交 E 斑点杂交 62关于 RNA 探针的描述下列正确的是()A 可用于随机引物标记 B 特异性高 C 灵敏度高 D 可用非同位素标记法标记 E 不易降解 63下列哪些可以作为核酸探针使用（）A microRNA

17、 B 单链 DNA C 寡核苷酸 D mRNA E 双链 RNA 64关于核酸探针的描述下列正确的是()A 可以是 DNA B 可以是 RNA C 可用放射性标记 D 可用非放射性标记 E 必须是单链核酸（三）问答题 1根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类 2简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围 3试述 Northern blot杂交的操作步骤 4什么是肽核酸并简述其应用 5请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的应用。6请叙述杂交探针标记方法的种类。7简述直接放射自显影的原理。参考答案（一）名词解释 1原位杂交：是首先应用核酸探针与组织或细胞中的核酸按碱基互补配对原则进行特异性

18、结合形成杂交体，然后应用组织化学或免疫组织化学方法在显微镜下进行细胞内基因定位或基因表达的检测技术。2核酸分子杂交技术：单链的核酸分子在合适的条件下，与具有碱基互补序列的异源核酸形成双链杂交体的过程称作核酸分子杂交。利用核酸分子杂交检测靶序列的一类技术称核酸分子杂交技术。3探针：是一段单链或双链核苷酸，用放射性核素或非放射性物质标记其末端或全链，可依碱基配对规律与具有互补序列的待测核酸进行杂交，以探测它们的同源程度。这一段标记的核苷酸被称为探针。4反向点杂交：是将多种探针固定在同一膜上，同时参与检测的样品 DNA 又互不干扰，故能一次性筛查出多种不同的序列，而不是像传统的杂交法，一次仅能检测一

19、个未知序列。5缺口平移标记法：该法是利用低浓度 DNase I在 DNA 双链上随机切开若干个切口，然后利用 E.coli DNA 聚合酶 I 的 53外切酶活性和 5 3聚合酶活性，使 DNA 链上的核苷酸不断被切除，而带放射性核素标记的 dNTP 不断地被填入缺口位置，从而形成两条链被均匀标记的高放射活性的探针。6随机引物标记法：随机引物是各种可能序列的寡核苷酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺 DNA 的 DNase I 降解物。随机引物在较低的退火温度下，能与各种单链 DNA 模板结合。首先使双链 DNA 分子变性成为单链，然后退火使随机引物结合于两条单链模板上，当反应液中存在的

20、 4 种 dNTP中有一种带放射性核素标记时，在 DNA 聚合酶催化下合成新的带标记的 DNA 链。反应结束后经纯化即可得到标记的 DNA 探针。7末端标记法：寡核苷酸探针由于较其他类型的探针短，需要采用末端标记法。该法需要 DNA 分子的末端带有羟基，而人工合成寡核苷酸的 5端本身即为羟基。其原理是利用多核苷酸激酶将-32P ATP 分子上 7 位磷酸基转移至寡核苷酸链的 5末端，末端标记也可在 3端进行。8Southern blot 杂交：是研究 DNA 图谱的基本技术，在遗传诊断、DNA 图谱分析及 PCR 产物分析等方面有重要价值。Southern 印迹杂交的方法是将标本 DNA 用限

21、制性内切酶消化后，经琼脂糖电泳分离各酶切片段，接着，使酶切片段 DNA 发生变性并转印到一固相支持物(通常是硝酸纤维素薄膜或尼龙膜)上，经固定后和标记探针进行杂交。这种方法不仅可以检测DNA样品中是否存在某一特定的基因，而且还可以获得基因片段的大小及酶切位点分布的信息。9荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的 DNA 探针与待测样本的 DNA 进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的

22、分型、预前和预后提供准确的依据。10 菌落杂交：用于重组细菌克隆筛选的固相杂交，称菌落杂交，主要步骤包括：菌落平板培养；滤膜灭菌后放到细菌平板上，是菌落粘附到经适当饱和的吸水纸上；菌斑溶解产生单练的 DNA、固定 DNA，用32P 标记的探针与菌落进行杂交；杂交后，洗脱未结合的探针，将滤膜暴露于 X 线胶片进行放射自显影；将自显影胶片、滤膜、培养平板相比较，就可以确 定阳性菌落。（二）选择题【A 型题】1A 2 E 3 D 4B 5 E 6A 7C 8B 9C 10B 11A 12A 13A 14B 15A 16C 17A 18A 19 B 20 D 21 A 22 A 23 A 24 A 2

23、5 C 26C 27D 28D 29B 30A 31E 32A 33E 34D 35D 36B 37E 38B 39A 40.B【X 型题】41ABCD 42ACD 43BC 44ACDE 45BCD 46ABCD 47ABD 48ACDE 49ABCD 50BCD 51ABCD 52ABD 53ABCD 54BCD 55ABC 56AD 57ABCD 58AB 59ABCD 60AC 61ADE 62ABCD 63BCD 64ABCD（三）问答题 1根据哪三种不同的分类标准可以将杂交分为哪几类 根据杂交核酸分子的种类，可以分为 DNA与 DNA 杂交，DNA 与 RNA 杂交，RNA 与 R

24、NA 杂交；根据杂交探针标记的不同，可以分为同位素杂交和非同位素杂交；根据杂交介质的不同，可以分为液相杂交、固相杂交和原位杂交；其中固相杂交又可以分为菌落杂交、Southern 杂交、Northern杂交、点杂交和狭缝杂交。2简述反义核酸技术的基本原理及其应用范围 反义核酸技术是近几年发展起来的一项新的生物技术。它是根据碱基互补的原理，设计出能特异地同相应靶基因结合的 RNA 或 DNA，从而影响靶基因的转录和翻译，以达到调控靶基因表达的目的。反义核酸技术包括反义 RNA 技术，反义 DNA 技术及核酶技术。3试述 Northern blot 杂交的操作步骤 RNA 的变性琼脂糖电泳；将硝酸纤

25、维薄膜放在含有 RNA 电泳条带的凝胶上；转印盘中的转移缓冲液将逐渐为胶和膜上覆盖的吸水纸吸收，从而利用毛细作用将胶中的变性 RNA 分子转移到硝酸纤维薄膜上；转印完成后，使 RNA 分子固定到膜上；膜上的 RNA 分子与探针杂交；经放射自显影或其他检测技术显示出杂交区带。4什么是肽核酸并简述其应用 肽核酸是一种全新的 DNA 类似物，在 20 世纪90 年代由丹麦科学家发明。肽核酸中以中性的肽链酰胺2-氨基乙基苷氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键，其余结构与 DNA 相似。PNA 可以通过碱基互补配对的形式识别并结合DNA 或 RNA 序列，形成稳定的双螺旋结构。由于 PNA 不带电荷，与

26、 DNA 和RNA 之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高；PNA 与 DNA 或 RNA 的杂交能力远远优于 DNA、DNA 或 DNA、RNA 杂交，表现在很高的杂交稳定性、优良的特异性，而且不被蛋白酶和核 酸酶水解等方面。鉴于上述诸多优点，近年来，PNA被广泛应用在许多高科技领域。如：病原体、遗传病的检测，抗癌、抗病毒反义核酸的研究和应用。特别是 PNA 可取代核酸用于基因芯片的制备，被认为是基因芯片的升级产品。PNA 还可用于定量 PCR分析。随着对 PNA 研究的不断深入，PNA 将显示出更大的优越性和更为广阔的应用前景。5请举例说明杂交技术在临床检验科基因诊断方面的

27、应用 在临床检验科，杂交技术最常用于基因诊断的例子是镰状细胞贫血病的基因诊断。镰状细胞贫血是一种单基因遗传性疾病，病因是编码血红蛋白的基因发生点突变导致编码链第6 位的谷氨酸被缬氨酸取代，表示为6(A 3)谷缬。在血红蛋白基因的碱基序列上表现为第6 位密码子GAA 突变为 GTA，也就是在这一位点发生了 A 到 T的点突变。由于这一突变导致基因内部一个 MstII限制性酶切位点丢失，因而针对这一情况，可以设计与-珠蛋白基因杂交的核酸探针。先扩增靶片断，并用 MstII消化扩增的 DNA 片断，电泳分离消化的 DNA 片断。将 DNA 片断转印到硝酸纤维素薄膜上，采用 Southern 杂交技术

28、检测 DNA 片断。以此将正常人、携带者和患者区分开来。此外,还可以用凝血因子基因探针检测 B 型血友病，凝血因子基因探针检测 A 型血友病，用胰岛素基因探针检测糖尿病，用苯丙氨酸羟化酶基因探针检测苯丙酮尿症。以上都是杂交技术在临床检验科进行基因诊断的例子。6请叙述杂交探针标记方法的种类 探针的标记方法可分为放射性核素标记法和非放射性核素标记法两大类。(1)放射性核素标记的探针，灵敏度高、特异性强，主要缺点是容易造成放射性污染，而且放射性核素的半衰期较短，必须随用随标。标记手段主要有：缺口平移法、随机引物合成法和末端标记法。(2)非放射性核素标记法：非放射性核素标记法无放射性污染，探针标记后可

29、保存较长时间(2 年以上)，但灵敏度和特异性尚不如核素标记。常用的标记物有生物素、地高辛配基和辣根过氧化物酶。标记手段类似于放射性核素标记。生物素标记探针：生物素(biotin)是一种水溶性维生素，可与 dUTP 的 C5 位共价结合，用其标记的 dUTP 可代替 dTTP 掺入 DNA 探针。这种标记探针能与抗生物素蛋白(avidin)特异结合，而抗生物素蛋白上结合的碱性磷酸酶可使反应中的底物显色，从而指示出探针所在位置。地高辛配基标记探针：地高辛配基(digoxigenin)可与 dUTP 共价结合，用其标记的 dUTP 也可代替dTTP 掺入 DNA 探针，可用与酶或荧光色素结合的抗地高

30、辛配基抗体直接检测，或间接使用免疫荧光法进行检测。辣根过氧化物酶标记探针：首先将辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)与带正电荷的聚乙烯亚胺(polyethylene imine)交联结合，然后由这种带正电荷的复合物与带负电荷的单链或双链 DNA 结合，在戊二醛稀溶液作用下，HRP 与 DNA形成共价键，产生酶标记探针。杂交后利用酶促反应使底物显色即可指示探针位置。该法是利用化学反应直接将酶连接在核酸上，而不需要将酶先连接 于 dNTP 再掺入 DNA 分子，因此更为简便。7简述直接放射自显影的原理 直接放射自显影是在暗室巾将含放射性杂化分子的滤膜与X 胶片紧密的贴在一起，放入不透光的盒子，同位素衰减会释放射线感光胶片上的银颗粒，产生稳定的潜影，胶片经冲洗后产生可见的图像。图像的位置与胶片上杂化分子的位置一致，图像的深浅反应了杂化分子的含量。X 线胶片常常为弹性塑料片，在其两面均覆盖了照相感光乳胶和白明胶，白明胶覆盖在照相感光乳胶的外层以防止其被刮脱。32P、35S、14C 元素放射的射线会穿透 X线胶片，少部分作用于 X 线胶片的照相感光乳胶。