2022年动物细胞工程复习资料.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思动物胚胎（细胞）工程复习资料生命科学技术学院12 生物技术（动物方向）张万博名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思胚胎 : 是专指有性生殖而言,是指雄性生殖细胞和雌性生殖细胞结合成为合子之后,经过多次细胞分裂和细胞分化后形成的有发育成生物成体的才能的雏体；原始生殖细胞的定义 : 原始生殖细胞是产生雄性和雌性生殖细胞的早期细胞；各类动物早期胚胎内开头显现成群原始生殖细胞的部位不同；原始生殖细胞比其周

2、围的其他细胞大, 细胞内碱性磷酸酶、 酯酶及糖原都呈阳性, 易和其他细胞区分；原始生殖细胞特点：1 分布 : 多数脊椎动物原肠胚期的原始生殖细胞分布于肠道、卵黄囊或尿囊基部的内胚层细胞间；2 迁移 : 在发育中借变形运动或进入血流而沿肠壁迁移, 或进入背肠系膜, 最终达到正在发育的生殖嵴处,并和生殖嵴的中胚层细胞共同组成睾丸或卵巢；3 分化: 原始生殖细胞在未进入生殖嵴之前,既可分化为精原细胞, 又可分化为卵原细胞, 这种分化是由其和不同的生殖 嵴细胞的结合所打算的；精子、卵子发生的过程：增殖期、生长期、成熟期、成形期（精子）精子发生过程：啮齿类动物中,精原细胞（二倍体）可连续进行 4 次有丝

3、分裂,依次分别形成 A1、A2、A3和 A4 型精原细胞；由 A1 型精原细胞再分裂成为中间型精原细胞, 中间型精原细胞再分裂成B 型精原细胞, 中间型和 B型精原细胞不再进行增殖, 而是进一步分化成为初级精母细胞；初级精母细胞经第一次减数分裂形成两个次级精母细胞,经其次次减数分裂形成4 个单倍体的精子细胞；卵子发生过程： 卵子发生是指初级卵母细胞在诞生前由原生殖细胞分化形成,经过一个较长的生长期,通过两次减数分裂,形成成熟卵子的过程；在生长期,细胞核内 DNA含量倍增,但细胞体积不增长,可称为小生长期；在生长后期,随着初级卵母细胞内养分物质的大量积存和合成代谢的增加,细胞体积相应快速增大；生

4、长期终止时, 卵母细胞基本完成了生长过程,此时的卵为充分生长的初级卵母细胞,具备了成熟条件,进入成熟期；在成熟期,初级卵母细胞完成第一次 减数分裂,形成一个很大的次级卵母细胞和一个很小的极体,两者核物质相等,但次级卵母细胞几乎占有了全部初级卵母细胞的细胞质；紧接着,次级卵母细胞进行其次次减数分裂, 并停滞在分裂的中期； 处于此期的卵母细胞只有通过受精 作用才能完全成熟, 完成分裂后期和末期, 形成一个已受精的合子并释放出一个 小的其次极体；假如没有受精,就不能完成其次次成熟分裂,而趋于消亡；卵子成熟的标志：生发泡的形成和破裂、卵丘细胞扩展、纺锤体形成、名师归纳总结 - - - - - - -第

5、 2 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思透亮带软化、染色体凝集、第一极体排出；精子获能： 精子获能是精子获得穿透卵子透亮带才能的过程,是精子在受精前必 须经受的一个重要的阶段； （精子从雄性生殖道排出后不具有获能才能,只有当 其穿过雌性宫颈时,精子才具备受精才能；）受精及受精的生物学意义：受精：指两性生殖细胞融合并形成具备双亲遗传潜能的新个体的过程；受精的生物学意义：传递遗传信息；物种世代连续；合子更富有活力；打算胎 儿性别；透亮带反应：皮质颗粒内容物中含有蛋白酶或糖苷酶,他们促进 ZP2发生裂解,转变整个透亮带的结构,阻挡多

6、精入卵的现象；顶体反应：顶体外膜与精子质膜发生碘状反应而释放出顶体颗粒的反应；卵质膜反应：在皮质反应过程中, 皮质颗粒的膜与卵质膜的组成和结构发生转变,阻挡已经入卵周隙的余外精子与质膜融合的现象；皮质反应： 随着精子与卵子的融合, 卵质膜下规章排列的皮质颗粒快速与卵质膜 接触,并将内容物胞吐到卵周隙中的现象；卵裂：受精卵经过一系列的细胞分裂, 将体积极大的卵子细胞质分割成很多较小 的、有核的细胞,形成一个多细胞生物体的过程；完全卵裂：整个卵细胞都进行分裂,见于少黄卵；不完全卵裂：由于动物卵的卵黄阻碍卵裂 , 多黄卵的卵裂面几乎不能进入卵黄 之中 , 所以卵裂球间的界线不完全； 这种类型的卵裂称

7、为局部卵裂 , 也称不完全卵 裂 囊胚：指的是内部产生囊胚液、 囊胚腔的胚胎, 囊胚中全部细胞都没有开头分化,这个阶段之后胚胎开头显现分化；胚胎着床： 胚泡通过与子宫内膜的相互作用侵入到子宫内膜的过程,孕卵与受精 后的第 3-4 天进入宫腔, 并在宫腔内游走 2-3 天,胚泡从透亮带中脱出露出表面 的滋养层；胚胎孵化：卵裂球从透亮带里面出来的过程；胚泡：桑椹胚的细胞在子宫腔内连续分裂,细胞数目不断增多, 发育到第 5 天时已有 100 多个细胞,这时细胞重新排列成泡状,称胚泡或囊胚；名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - -

8、读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思原肠作用及其意义：原肠作用： 指囊胚细胞通过猛烈有序的运动过程,内胚层中胚层和外胚层三个胚层构成胚胎结构的过程使细胞重新拍了吗, 形成由原肠作用的意义： （1）通过原肠作用,胚胎第一建立起三个胚层,即外胚层,中胚层,内胚层；（ 2）为了重新占有新的位置的胚胎细胞之间的相互作用奠定了基础 .（3）细胞核掌握细胞分化的作用日益明显,类型的 RNA和专一性蛋白质；ICM哺乳动物囊胚的内细胞团；胚胎细胞开头合成新的各种神经胚：神经沟两侧上部向背部中线升起、靠拢并愈合在一起, 形成一个中空的管状结构, 与此同时, 管的顶部细胞脱离外胚层, 两侧的外胚层细胞重新融合在

9、一起形成的完整的外胚层；胚胎诱导：动物在肯定的胚胎发育时期 向分化的作用称为胚胎诱导, 一部分细胞影响相邻细胞使其向肯定方体外受精：指精子和卵子在体外模拟动物生殖道的环境中完成受精过程的技术；分为三个阶段：卵母细胞体外成熟培育（体外培育（ IVC）；IVM）、体外受精（ IVF）、受精卵早期胚胎移植： 指将一只动物的早期胚胎取出, 始终到另一头生理状态与其相近的同 种动物内,使之受孕并产生后代的技术；同期发情： 人为地掌握并调整母畜的发情周期,发情处理,使受体母畜与供体母畜发情期相同；使之同期化, 即对受体进行同期超数排卵： 在母畜发情周期的适当时期,用外源促性腺激素进行处理, 诱发其卵 巢上

10、有大量卵泡同时发育并排卵的方法；胚胎分割： 指将一枚哺乳动物的胚胎, 利用机械分割或化学预处理,在显微镜下 分割成两个或多个部分（两分、四分甚至八分胚）,经体内或体外培育,然后移 植入受体内,以得到同卵双生或同卵多生的一项技术；克隆：通过无性繁衍的方式产生子代的过程；克隆的原理： 细胞潜在的全能性, 细胞的全能性指的是细胞包含个体的全套遗传名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思信息,在特定环境因素的调剂下, 可回到受精卵一样样的状态,从头开头发育成 一个完整地个体,只有具备全能性的细

11、胞组织才可用于克隆；克隆的技术路线： 供体细胞的预备受体胞质的预备卵母细胞的去核重组胚 的构建重组胚的激活重组胚的培育和胚胎移植 原代培育：由动物活体内直接取出组织或细胞进行培育；传代培育：将原代培育物连续转接在其他培育皿中培育；细胞系：原代培育经首次传代胜利后即成细胞系,由原先存在于原代培育物中的细胞世系所组成；假如不能连续传代,或传代次数有限,可称为有限细胞系；如可以连续培育,就称为连续细胞系；培育 细胞系；50 代以上并无限培育下去,称为无限贴壁依靠型细胞： 在动物细胞培育过程中, 必需有可以贴附的支持物表面,其依 靠自身分泌或培育基中的贴附因子才能在该表面生长增殖的离体动物的培育细 胞

12、；悬浮依靠型细胞： 细胞生长不依靠支持物表面, 在培育液中呈悬浮状态生长,这 类细胞称为悬浮细胞；如淋巴细胞；灭菌方法有哪些？高位高压湿热灭菌：的消毒玻璃器皿、 金属器械、 橡胶和塑料制品高温干热灭菌：玻璃器皿过滤除菌：培育液和酶液等物理灭菌培育基：分为自然培育基： 血清人工合成培育基： 依据已知细胞在体外生存和生长所需物质的种类和数量严格配制而成的；消化液：胰蛋白酶溶液 乙二胺四乙酸二钠（ EDTA）溶液 抗生素溶液 细胞融合： 指在自然条件下或用人工方法将不同种动物或植物,或同种生物体的 不同类型的两个或两个以上的细胞合并,形成单个细胞的过程；干细胞：是具有自我更新和连续增殖才能以及一种或

13、多种分化潜能的细胞；成体干细胞： 来自成体的具有分裂和分化潜能的细胞；成体干细胞大多数时候处于静息状态； 在特定条件下, 成体干细胞或者产生新的干细胞,或者按肯定的程序分化,形成新的功能细胞,从而使组织和器官保持生长和衰退的动态平稳；胚胎干细胞（ ES）：是一种全能干细胞,它是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培育分别的一种全能性细胞系,可以分化成任何一种组织类名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思型的细胞；胚胎干细胞全能性的鉴定方法：畸胎瘤的形成拟胚体形成核型分析端粒

14、酶的活性检测肝细胞内源基因的表达分析干性因子的去甲基化分子干细胞表面 marker 的免疫染色检测 AP活性检测胚胎干细胞按来源,分化潜能分为几类：1 全能性干细胞它具有形成完整个体的分化潜能； 2 多能性干细胞这种干细胞具有分化出多种组织细胞的潜能,但却失去了发育成完整个体的才能,发育潜能受到肯定的限制； 3 单能干细胞也称专能或偏能干细胞；造血干细胞： 指骨髓中的干细胞, 具有自我更新才能并能分化为各种血细胞前体 细胞,最终生成各种血细胞成分,包括红细胞、白细胞和血小板,它们也可以分 化成各种其他细胞；目前造血干细胞的来源只有三种：骨髓、外周血、脐带血；染色体工程：指人们按预先设计,消减、

15、添加或替换同种或异种染色体,从而达到定向转变遗传特性和选育新品种的一种技术；主要包括多倍体人工诱导、 雌核发育、雄核发育、染色体原位杂交（FISH）、染色体介导的基因转移（ CMGT）等 技术；生产多倍体的原理和方法： 方法：秋水仙素法 静水压力法 原理：抑 抑制第一次卵裂 制第一极体,其次极体排出 多倍体鱼的优势：生长速度快、肉质好、抗逆行强、不干扰鱼类资源等优点 , 多 倍体鱼类因其生长优势、 群体产量及抗病力等各方面都具有二倍体鱼所无法比拟 的优势 . 成体干细胞的特点：（ 1）、具有自我更新和分化潜能（2）、数量少 （3 、存在于特地的微环境中 4 、处于静止状态 5 、体积小,细胞浆

16、少,细胞核较大6 、成体干细胞的数量与活性随年龄的增大而削减 变. 7 、肿瘤起源于肝细胞突胚胎干细胞的特点： 1 胚胎干细胞具有多向分化潜能,可分化为成年人体任何 一种组织细胞；2 胚胎干细胞具有无限增殖性； 3 胚胎干细胞的来源受到伦理、道德的限制,取材较为困难；4 胚胎干细胞可在不经诱导的情形下自动分化,因此在移植入人体后其分化不好掌握,易形成脐胎瘤 . 成体干细胞和胚胎干细胞的异同：成体干细胞与胚胎干细胞一样, 都可在体外名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思进行自我更新,

17、并且在相宜的条件下, 均可分化成为具有特别形状和特定功能的子代细胞, 但二者之间又有很多不同之处；胚胎干细胞和成体于细胞最根本的区分在于两者的来源不同, 目前胚胎干细胞多取自胚胎或流产胎儿,胚胎特别是极早期的胚胎 . 虽然胚胎干细胞和成体干细胞都可在体外进行增殖,但其增殖才能有所不同； 胚胎干细胞可无限增殖, 而成体干细胞的增殖才能就较有限；此外,就分化潜能而言,胚胎干细胞要较成体于细胞宽,胚胎干细胞具有多能性 .胚胎干细胞从理论上讲, 它在体外可无限增殖, 并且可分化为体内任何一种细胞类型；成体干细胞的分化通常需要外界物质的刺激,一般不会自动发生, 而且由于成体干细胞可取自供体的某一组织,这

18、样移植细胞的基因型与供体完全相同,防止了免疫排斥反应的发生；玻璃化冷冻储存： 液体在超低温下形成玻璃状固体的过程；玻璃态固体分子之间 的空间排列和液态相比无明显变化；非玻璃化冷冻储存：是利用各种温级的冰箱分阶段降温至-70 -80,然后直接投入液氮进行储存； 或者是利用电子运算机程控降温仪以及利用液氮的气、液,按肯定的降温速率从是问降至-100 以下,再直接投入液氮的方法, 以该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形成；冷冻剂有哪些： （1）渗透性冷冻剂：丙三醇,二甲基亚砜,丙二醇,乙二醇（2）非渗透性冷冻剂：蔗糖,聚蔗糖,葡聚糖,牛血清白蛋白（3）抗冻蛋白 细胞冷冻储存的目的、 原理：将体

19、外培育物或生物活性材料悬浮在加有或不加冷冻爱护剂的溶液中, 以肯定的冷冻速率降至零下某一温度 超低温条件）,并在此温度下对其长期储存的过程；（一般是低于 -700 的单克隆抗体的制备过程：（1）、抗原制备；（ 2）、免疫动物；（ 3）、免疫脾细胞和骨髓瘤细胞的制备；（4）、细胞融合；（ 5）、杂交瘤细胞的挑选培育；（6）、杂交瘤细胞的挑选；（7）、杂交瘤细胞的克隆化；（8）、单克隆抗体的检定；（ 9）、分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立；（大量制备；10）、单克隆抗体的杂交瘤挑选： 在细胞融合后, 要从上述五种细胞中挑选出杂交瘤细胞,一般使用HAT培育进行挑选, HAT培育基中含有次黄嘌呤（H）

20、、氨基喋呤（ A）和胸腺嘧啶（T）三种成分； 细胞的 DNA合成有内源性途径 （主要途径） 和外源性途径 （旁名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页,共 8 页精选学习资料 - - - - - - - - - 读书之法 ,在循序而渐进 ,熟读而精思路途径）两种方式； 内源性途径就是利用谷氨酰胺或单磷酸尿苷酸在二氢叶酸仍原酶的催化下来合成 DNA；而外源性途径就是利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶在次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶或胸腺嘧啶激酶的催化下来补救合成 DNA,HAT培育基中氯基喋呤是二氢叶酸仍原酶的抑制剂, 能有效地阻断 DNA合成的内源性途径；名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 8 页