枸杞多糖检测方法的研究.pptx
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1、内容提要内容提要 简简 介介选题背景选题背景研究目的和意义研究目的和意义研究动态与趋势研究动态与趋势拟采取的研究方法拟采取的研究方法第1页/共37页枸杞多糖简介l来源：茄科植物枸杞的干燥果实来源：茄科植物枸杞的干燥果实l枸杞多糖（枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide）简称简称LBP，是以阿拉伯糖、，是以阿拉伯糖、鼠李糖、鼠李糖、木糖、木糖、甘露糖、甘露糖、半半乳糖、乳糖、葡萄糖与半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖同多肽或蛋白葡萄糖与半乳糖醛酸组成的酸性杂多糖同多肽或蛋白质构成的复合多糖为主质构成的复合多糖为主,还含有中性杂多糖和葡聚糖同多肽或还含有中性杂多糖和葡聚糖同
2、多肽或蛋白质构成的复合多糖，是天然的大分子物质。蛋白质构成的复合多糖，是天然的大分子物质。第2页/共37页Click to add textClick to add textClick to add textClick to add textClick to add textClick to add textClick to add text白色略带棕色白色略带棕色絮状，纤维状絮状，纤维状无味无味吸湿性吸湿性理化性质（一）性状性状第3页/共37页理化性质（二）溶解性 1.溶于水，二甲基亚砜，溶解度随中性单糖含量的减少而降低 2.不溶于高浓度乙醇，乙醚，丙酮，氯仿，正丁醇等有机溶剂第4页/共37
3、页理化性质（三）常见的化学性质测定 试验 结果 结论硫酸苯酚反应 阳性 含中性糖 硫酸半胱氨酸 阳性 含半乳糖醛酸卡玛斯亮蓝反应 阳性 含有蛋白质斐林试剂反应 阴性 不含还原糖碘碘化钾反应 阴性 不含有淀粉第5页/共37页选题背景（一）l生理活性：增强免疫、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血糖血脂、保肝，可作为第三代功能性食品的功能因子l随着生活水平的提高，由以治病为主向防病为主的观念转变，为功能食品的开发带来了良好机遇。功效明确的枸杞多糖符合新一代功能食品的要求，枸杞多糖的研究将推动枸杞产品向更高层次发展第6页/共37页保健食品的区分第一代保健食品：以民间的处方，秘方为基础，根据原材料的功能推断保
4、健品的功能，未经严格的科学检测的保健食品第二代保健食品：经过动物实验和人体实验证明产品具有某项生理调节功能，其安全性，功能性都较为可靠第三代保健食品：经过进一步的严格实验及审核，除具备第二代产品的要求外，还要明确功能能因子及其结构，含量，作用机理，类似于药品的要求第7页/共37页选题背景（二）多糖一般的检测方法概括如下多糖一般的检测方法概括如下:1 将无紫外吸收的多糖与显色剂显色，产生紫外吸收，从而将无紫外吸收的多糖与显色剂显色，产生紫外吸收，从而用紫外法定量用紫外法定量,如硫酸如硫酸-苯酚法、苯酚法、硫酸硫酸-蒽酮法蒽酮法，3、5-二硝基二硝基水杨酸比色法测定总糖。水杨酸比色法测定总糖。2
5、直接测糖法，折光法测定多糖，主要是水溶性糖。原理是用直接测糖法，折光法测定多糖，主要是水溶性糖。原理是用折射计测得的折射指数值折射计测得的折射指数值(糖度糖度)代表着溶液中可溶性物质的含代表着溶液中可溶性物质的含量高低，若溶液中的溶质是糖物质或以糖为主的糖物质量高低，若溶液中的溶质是糖物质或以糖为主的糖物质,则折射则折射指数值就反映着糖含量的高低。指数值就反映着糖含量的高低。3 多糖检测的多糖检测的HPLC法也是基于上面的思路，要么衍生化后使法也是基于上面的思路，要么衍生化后使用紫外或荧光检测器，要么使用通用型检测器，这类检测器用紫外或荧光检测器，要么使用通用型检测器，这类检测器主要有示差检测
6、器主要有示差检测器。第8页/共37页蒽酮-硫酸法多糖在浓硫酸作用下先水解成单糖多糖在浓硫酸作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛或并迅速脱水生成糠醛或羟甲基糠醛羟甲基糠醛,而生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合而生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物形成糠醛的衍生物,反应后溶液呈蓝绿色反应后溶液呈蓝绿色 在在620nm处有最处有最大吸收，大吸收，在在 10100ug范围内其颜色的深浅与可溶性糖质范围内其颜色的深浅与可溶性糖质量浓度成正比量浓度成正比 其主要反应式为其主要反应式为第9页/共37页选题背景（三）l质量不易控制质量不易控制 枸杞多糖是一个水溶性的大分子物质,不能如小分
7、子物质那样,通过熔点测定、元素分析,四大光谱等鉴定后,制定质量标准。l 分子量测定分子量测定 决定了枸杞多糖的生物活性，分子量过大不易透过细胞膜，影响活性，分子量小一般是没有活性的，因此分子量数据可以作为枸杞多糖质量标准的重要指标。l多糖的单糖组成分析多糖的单糖组成分析 是进行多糖质量控制和获取多糖基本信息的重要环节。单糖组分及其摩尔比可以作为质量标准的重要指标。第10页/共37页l分子量测定 高分子物质的分子量测定有渗透压法、蒸气压法,凝胶色谱法、超速离心法等，但已有的报导大多集中在有机溶剂体系的高分子聚合物如各种塑料产品、人工橡胶等，水体系大分子物质如蛋白质、多糖的分子量测定很少报导l单糖
8、组成测定 方法主要有TLC、GC、HPLC、CE等,但是关于枸杞多糖柱前衍生化高效液相色谱法测单糖组成还未见报道。第11页/共37页研究目的建立一个枸杞多糖的质量标准定量鉴别方法：(1)通过HPLC法测定枸杞多糖的分子量(2)通过柱前衍生化高效液相色谱法测定枸杞多糖的单糖组成及其摩尔比第12页/共37页在多糖的分子量测定方法、尤其是枸杞多糖的测定方法尚未确立标准，无据可依的情况下，继承传统保健理论的同时结合现代科学检测技术，找出枸杞多糖的最优检测方法，制订枸杞多糖的检测标准，为以后的枸杞多糖检测提炼提供依据。研究意义研究意义第13页/共37页研究动态常见的常见的检测方法检测方法化学方法化学方法
9、物理方法物理方法苯酚苯酚-硫酸法，高碘酸氧化，硫酸法，高碘酸氧化，Smith降解，甲基化分析降解，甲基化分析比旋光仪、紫外分光光度计、比旋光仪、紫外分光光度计、红外光谱仪、液相色谱仪、红外光谱仪、液相色谱仪、气相色谱仪、质谱、核磁共振气相色谱仪、质谱、核磁共振从所得到的数据来看，国内对枸杞多糖的分离纯化，从所得到的数据来看，国内对枸杞多糖的分离纯化，含量测定分离提取、含量测定分离提取、分级纯化组分鉴定分级纯化组分鉴定及其分子量、结构、基本性质等方面有大量成果报道及其分子量、结构、基本性质等方面有大量成果报道,但但研究者所得出的枸杞多糖研究者所得出的枸杞多糖分子量、分子量、组成组成、结构、等研究
10、结果各不相同结构、等研究结果各不相同第14页/共37页枸杞多糖相对分子量的检测方法蒸汽压法凝胶过滤法HPLC渗透压法光散射法粘度法afebcd第15页/共37页分子量的测定方法凝胶过滤法1.将已知分子量的葡聚糖标准品进行凝胶层系，洗脱收集，用硫酸-蒽酮法检测多糖，分别求得相应的洗脱体积Ve 2.用蓝色葡聚糖上柱求得外水体积Vo.以Ve/Vo为纵坐标，lgMr为横坐标，得到分子量的标准曲线。3.取枸杞多糖进行一样的操作求得Ve/Vo查标准曲线可求得多糖的分子量第16页/共37页相对相对分子量分子量LBP-，LBP-，LBP-，LBP相对分子量均大于200001LBPA3,LBPB1,LBPC2，
11、LBPC4分子量分别分子量分别为为66000，18000，12000，100002Duan 分离得到了分离得到了4 个均一枸杞多糖个均一枸杞多糖,其其分子量在分子量在82115 kDa 之间之间3黄等分离得到三类黄等分离得到三类LbGP，其分子量分别为，其分子量分别为925000，2148000，2370004王建华通过王建华通过SDS-不连续体系凝胶电泳法不连续体系凝胶电泳法测得测得LBP2a分子量为分子量为774825第17页/共37页多糖中单糖的组成及其摩尔比的测定方法多糖中单糖的组成及其摩尔比的测定方法对微量物质的检出对微量物质的检出体现了高分辨率的体现了高分辨率的特点，但是所测样特点
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