气相色谱分析法详解.pptx

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1、2023/3/181目录6-1 6-1 概述概述6-2 6-2 气相色谱分析理论基础气相色谱分析理论基础6-3 6-3 固定相固定相 6-4 6-4 气相色谱分离操作条件的选择气相色谱分离操作条件的选择6-5 6-5 毛细管柱气相色谱法简介毛细管柱气相色谱法简介6-6 6-6 气相色谱检测器气相色谱检测器 6-7 6-7 气相色谱定性鉴定方法气相色谱定性鉴定方法6-8 6-8 气相色谱定量测定方法气相色谱定量测定方法6-9 6-9 高效液相色谱分析法简介高效液相色谱分析法简介 第1页/共98页2023/3/1826-1 概述 一、色谱法简介一、色谱法简介(chromatography)色谱法色

2、谱法又名色层法、层析法，是一种用以分离、分析多又名色层法、层析法，是一种用以分离、分析多组分混合物质的极有效的物理及物理化学分析方法。组分混合物质的极有效的物理及物理化学分析方法。原理：原理：利用混合物中各组分在两相中具有不同的分配系利用混合物中各组分在两相中具有不同的分配系数数(或吸附系数，渗透性等或吸附系数，渗透性等)，当两相作相对运动时，当两相作相对运动时，各组分在两相中进行多次反复地分配，以达到分离的各组分在两相中进行多次反复地分配，以达到分离的目的。目的。色谱分析法：色谱分析法：色谱法应用于分析化学中，并与适当的检测色谱法应用于分析化学中，并与适当的检测手段相结合时，就构成了色谱分析

3、法。通常所说的色手段相结合时，就构成了色谱分析法。通常所说的色谱法即指色谱分析法。谱法即指色谱分析法。第2页/共98页2023/3/183 二、色谱法的发展史二、色谱法的发展史 色谱法这种分离技术的应用已有一百多年的历史色谱法这种分离技术的应用已有一百多年的历史了。意识到它对分离、分析的作用和意义的第一人是俄了。意识到它对分离、分析的作用和意义的第一人是俄国植国植物学家茨维特物学家茨维特(Tswett)(Tswett)。19011901年，茨维特认识到色谱法对分离分析具有重大价年，茨维特认识到色谱法对分离分析具有重大价值。值。19031903年，在华沙自然科学学会生物学分会会议上，茨年，在华沙

4、自然科学学会生物学分会会议上，茨维特在其发表的文章（维特在其发表的文章（On a new category of On a new category of adsorption phenomena and their application adsorption phenomena and their application on Biochemical analysison Biochemical analysis）中提出应用吸附原理分）中提出应用吸附原理分离植物色素的新方法。离植物色素的新方法。第3页/共98页2023/3/18419061906年，年，TswettTswett发表了他的实

5、验结果，他为了分发表了他的实验结果，他为了分离植物色素，将植物绿叶的石油醚提取液倒入装离植物色素，将植物绿叶的石油醚提取液倒入装有碳酸钙颗粒的玻璃管中，并用石油醚自上而下有碳酸钙颗粒的玻璃管中，并用石油醚自上而下淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附淋洗，由于不同的色素在碳酸钙颗粒表面的吸附力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的力不同，随着淋洗的进行，不同色素向下移动的速度不同，形成一层层不同颜色的色带，使各色速度不同，形成一层层不同颜色的色带，使各色素成分得到了分离。他将这种分离方法命名为色素成分得到了分离。他将这种分离方法命名为色谱法（谱法（chromatographychroma

6、tography）。）。19071907年，茨维特在德国生物会年，茨维特在德国生物会 议上第一次向人们公开展示了议上第一次向人们公开展示了 采用色谱法提纯的植物色素溶采用色谱法提纯的植物色素溶 解液及其色谱图解液及其色谱图显示着彩显示着彩 色环带的柱管。色环带的柱管。第4页/共98页2023/3/185在此后的在此后的2020多年里，几乎无人问津这一技术。多年里，几乎无人问津这一技术。19311931年，年，Kuhn(Kuhn(库恩库恩)等用同样的方法成功地分等用同样的方法成功地分离了胡萝卜素和叶黄素，从此，色谱法开始为离了胡萝卜素和叶黄素，从此，色谱法开始为人们所重视，此后，相继出现了各种色

7、谱方法。人们所重视，此后，相继出现了各种色谱方法。19551955年，出现了第一台商业化的气相色谱仪。年，出现了第一台商业化的气相色谱仪。在我国，气相色谱法起步于在我国，气相色谱法起步于19541954年；年；19601960年研年研制并生产了最早的成型仪器；制并生产了最早的成型仪器；19801980年大规模生年大规模生产。产。第5页/共98页2023/3/186在分析化学领域，色谱法是一个相对年轻的分支在分析化学领域，色谱法是一个相对年轻的分支学科。早期的色谱技术只是一种分离技术而已，学科。早期的色谱技术只是一种分离技术而已，与萃取、蒸馏等分离技术不同的是其分离效率高与萃取、蒸馏等分离技术不

8、同的是其分离效率高得多。得多。当这种高效的分离技术与各种灵敏的检测技术结当这种高效的分离技术与各种灵敏的检测技术结合在一起后，才使得色谱技术成为最重要的一种合在一起后，才使得色谱技术成为最重要的一种分析方法，几乎可以分析所有已知物质，在所有分析方法，几乎可以分析所有已知物质，在所有学科领域都得到了广泛的应用。学科领域都得到了广泛的应用。从从19371937年年19721972年，色谱法先后在年，色谱法先后在1212次诺贝尔奖次诺贝尔奖获奖项目的研究工作中起过关键的作用。获奖项目的研究工作中起过关键的作用。(化学化学-9-9；生理学和医学；生理学和医学-3)-3)。第6页/共98页2023/3/

9、187 三、色谱分析法的分类三、色谱分析法的分类 一些定义：一些定义：分离柱：分离柱：色谱法中起分离作用的柱。色谱法中起分离作用的柱。固定相固定相(stationary phase)(stationary phase)：固定在柱内的填充物。固定在柱内的填充物。在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。流动相流动相(mobile phase)(mobile phase)：沿着柱流动的流体。沿着柱流动的流体。与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一与固定相处于平衡状态、带动样品向前移动的另一相。相。液相色谱法：液相色谱法：以液体作为流动相的色谱法。

10、以液体作为流动相的色谱法。气相色谱法：气相色谱法：以气体作为流动相的色谱法。以气体作为流动相的色谱法。第7页/共98页2023/3/188 气相色气相色谱谱气液色谱：流动相为气体，固定相为液体(涂在担体 上或毛细管壁上)。气固色谱：流动相为气体，固定相为固体吸附剂。液相色谱液液色谱：流动相为液体，固定相为液体(涂在担 体上或毛细管壁上)。液固色谱：流动相为液体，固定相为固体吸附剂。l按使用的固定相和流动相的不同分类：第8页/共98页2023/3/189按分离的原理分类：按分离的原理分类：吸附色谱法：吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分的物利用吸附剂表面对不同组分的物 理吸附性能的差异进行分离；

11、固定相为固体吸附剂。理吸附性能的差异进行分离；固定相为固体吸附剂。分配色谱法：分配色谱法：利用不同组分在两相中有不同的分配系数进行分离；固定利用不同组分在两相中有不同的分配系数进行分离；固定相为液体液膜。相为液体液膜。离子交换色谱法：离子交换色谱法：利用离子交换原理；固定相为离子交换剂。利用离子交换原理；固定相为离子交换剂。凝胶渗透色谱法：凝胶渗透色谱法：利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用；固定相利用多孔性物质对不同大小分子的排阻作用；固定相为凝胶为凝胶(又称排阻色谱，尺寸排阻色谱法又称排阻色谱，尺寸排阻色谱法)化学键合色谱法：化学键合色谱法：通过化学反应将有机分子键合在载体表面形成的柱填

12、通过化学反应将有机分子键合在载体表面形成的柱填充剂。充剂。离子色谱法：离子色谱法：由离子交换色谱法中产生出来的一种新型的离子多柱色谱由离子交换色谱法中产生出来的一种新型的离子多柱色谱技术技术(分离柱后增加一个抑制柱分离柱后增加一个抑制柱)。第9页/共98页2023/3/1810按固定相使用的方式分类：按固定相使用的方式分类：柱色谱法：柱色谱法：固定相装在色谱柱内。固定相装在色谱柱内。纸色谱法：纸色谱法：滤纸为固定相。滤纸为固定相。薄层色谱法：薄层色谱法：将吸附剂粉末制成薄层作为固定相。将吸附剂粉末制成薄层作为固定相。按色谱动力学过程分类：按色谱动力学过程分类：冲洗色谱法、顶替色谱法和迎头色谱法

13、冲洗色谱法、顶替色谱法和迎头色谱法按色谱技术分类：按色谱技术分类：程序升温色谱法、反应色谱法、裂解色谱法、程序升温色谱法、反应色谱法、裂解色谱法、毛细管色谱法、多维色谱法、制备色谱法等毛细管色谱法、多维色谱法、制备色谱法等第10页/共98页2023/3/1811 四、色谱分析法的特点四、色谱分析法的特点 高效，灵敏，快速和应用广泛高效，灵敏，快速和应用广泛分离效率高：分离效率高：几十种甚至上百种性质类似的化合物可在几十种甚至上百种性质类似的化合物可在同一根色谱柱上得到分离，能解决许多其他分析方同一根色谱柱上得到分离，能解决许多其他分析方法无能为力的复杂样品分析。法无能为力的复杂样品分析。分析速

14、度快：分析速度快：一般而言，色谱法可在几分钟至几十分钟一般而言，色谱法可在几分钟至几十分钟的时间内完成一个复杂样品的分析。的时间内完成一个复杂样品的分析。检测灵敏度高：检测灵敏度高：随着信号处理和检测器制作技术的进步，随着信号处理和检测器制作技术的进步，不经过预浓缩可以直接检测不经过预浓缩可以直接检测1010-9-9g g级的微量物质。级的微量物质。如采用预浓缩技术，检测下限可以达到如采用预浓缩技术，检测下限可以达到1010-12-12g g数量数量级。级。第11页/共98页2023/3/1812样品用量少：样品用量少：一次分析通常只需数纳升至数微升的一次分析通常只需数纳升至数微升的溶液样品。

15、溶液样品。选择性好：选择性好：通过选择合适的分离模式和检测方法，通过选择合适的分离模式和检测方法，可以只分离或检测感兴趣的部分物质。可以只分离或检测感兴趣的部分物质。多组分同时分析：多组分同时分析：在很短的时间内（在很短的时间内（20min20min左右），左右），可以实现几十种成分的同时分离与定量。可以实现几十种成分的同时分离与定量。易于自动化：易于自动化：现在的色谱仪器已经可以实现从进样现在的色谱仪器已经可以实现从进样到数据处理的全自动化操作。到数据处理的全自动化操作。第12页/共98页2023/3/1813不足之处：不足之处：定性能力较差：定性能力较差：没有待测物的纯品或相应的色没有待测

16、物的纯品或相应的色谱定性数据作对照时，不能从色谱峰给出定性谱定性数据作对照时，不能从色谱峰给出定性结果。结果。为克服这一缺点，已经发展起来了色谱为克服这一缺点，已经发展起来了色谱法与其他多种具有定性能力的分析技术的联用。法与其他多种具有定性能力的分析技术的联用。不适用于沸点高于不适用于沸点高于450450的难挥发物质和热不的难挥发物质和热不稳定物质的分析。稳定物质的分析。现在：现在：近年来，气相色谱近年来，气相色谱质谱、气相色谱质谱、气相色谱红外光谱的联用使气相色谱的强分离能力和红外光谱的联用使气相色谱的强分离能力和质谱、红外光谱的强定性能力得到完美的结合，质谱、红外光谱的强定性能力得到完美的

17、结合，为气相色谱分析开辟了新的途径。为气相色谱分析开辟了新的途径。第13页/共98页2023/3/1814 五、气相色谱分析流程五、气相色谱分析流程气相色谱仪气相色谱仪图6-1 双气路气相色谱仪流程图第14页/共98页2023/3/1815一般的气相色谱仪由五部分组成一般的气相色谱仪由五部分组成 载气系统：载气系统：气源、气体净化、气体流速的控制和测量气源、气体净化、气体流速的控制和测量进样系统：进样系统：进样器、汽化室进样器、汽化室分离系统：分离系统：色谱柱、柱箱、温度控制装置色谱柱、柱箱、温度控制装置检测系统：检测系统：检测器、温度控制装置检测器、温度控制装置记录系统：记录系统：放大器、记

18、录仪（有的还带有数据处理装置）放大器、记录仪（有的还带有数据处理装置）气相色谱方法气相色谱方法气固色谱气固色谱气液色谱气液色谱第15页/共98页2023/3/18166-2 气相色谱分析理论基础 在整个色谱分离过程中，流动相始终是以在整个色谱分离过程中，流动相始终是以一定的流速（或压力）在固定相间流动的，并将一定的流速（或压力）在固定相间流动的，并将溶质带入色谱柱。溶质因分配、吸附等相互作用，溶质带入色谱柱。溶质因分配、吸附等相互作用，进入固定相后，从而在固定相中保留。同时，溶进入固定相后，从而在固定相中保留。同时，溶质又被流动相洗脱下来，进入流动相。与固定相质又被流动相洗脱下来，进入流动相。

19、与固定相作用越强的溶质在固定相中的保留时间就越长。作用越强的溶质在固定相中的保留时间就越长。第16页/共98页2023/3/1817一、气相色谱常用术语一、气相色谱常用术语气相色谱流出曲线气相色谱流出曲线 试样中各组分经试样中各组分经色谱柱分离，随载气先色谱柱分离，随载气先后流出色谱柱后流出色谱柱，经检测，经检测器转化为电信号，信号器转化为电信号，信号的大小随时间变化。以的大小随时间变化。以组分的浓度变化为纵坐组分的浓度变化为纵坐标，流出时间为横坐标标，流出时间为横坐标所得的曲线为所得的曲线为色谱流出色谱流出曲线曲线，一般为高斯分布，一般为高斯分布曲线。相应的谱图称为曲线。相应的谱图称为色谱图

20、。色谱图。图6-2 色谱流出曲线图色谱峰第17页/共98页2023/3/1818常用术语常用术语基线：基线：只有载气通过时的信号记录，直线。只有载气通过时的信号记录，直线。基线漂移：基线随时间定向的缓慢变化。基线漂移：基线随时间定向的缓慢变化。基线噪声：有各种因素引起的基线起伏。基线噪声：有各种因素引起的基线起伏。峰高峰高h：色谱峰最高点与基线间距离。色谱峰最高点与基线间距离。峰面积峰面积A：（定量中介绍）（定量中介绍）h h第18页/共98页2023/3/1819区域宽度：区域宽度：色谱峰宽色谱峰宽标准偏差标准偏差：0.607h 0.607h 处处色谱峰宽的一半色谱峰宽的一半。半峰宽半峰宽

21、：峰高一：峰高一半处色谱峰的宽度。半处色谱峰的宽度。峰基宽度峰基宽度 ：通过曲：通过曲线上的拐点所作的切线线上的拐点所作的切线在基线上的截距。在基线上的截距。图6-3 高斯曲线E EG GF FH HI IJ J第19页/共98页2023/3/1820保留值：保留值：试样中各组分在色谱柱内停留时间的数值。试样中各组分在色谱柱内停留时间的数值。用用时间时间表示：表示：保留时间保留时间 ：待测组分从进样到柱后出现浓度最：待测组分从进样到柱后出现浓度最大值大值 时所需的时间。时所需的时间。死时间死时间 ：不与固定相作用的气体（如空气、：不与固定相作用的气体（如空气、甲烷）甲烷）的保留时间。的保留时间

22、。调整保留时间调整保留时间 ：扣除死时间的保留时间。：扣除死时间的保留时间。t tM Mt tR Rt tR R第20页/共98页2023/3/1821 用用载气体积载气体积表示：表示：保留体积保留体积 ：从进样到柱后出现待测组分浓：从进样到柱后出现待测组分浓度最大值度最大值 时所通过的载气体积。时所通过的载气体积。死体积死体积 ：色谱柱内除了填充物固定相以外：色谱柱内除了填充物固定相以外的空隙体积、色谱仪中管路和连接头间的空间、进的空隙体积、色谱仪中管路和连接头间的空间、进样系统及检测器的空间总合。样系统及检测器的空间总合。调整保留时间调整保留时间 ：扣除死体积的保留体积。：扣除死体积的保留

23、体积。色谱柱出口处载气流速，mlmin-1或或第21页/共98页2023/3/1822 用用相对保留值相对保留值表示：表示：相对保留值相对保留值 ：组分：组分2 2与另一组分与另一组分1 1 调整调整保留值保留值 之比，是一个量纲为之比，是一个量纲为1 1的量。的量。只与柱温及固定相性质有关。只与柱温及固定相性质有关。不随柱径、柱长、填充情况及不随柱径、柱长、填充情况及F FO O变化。变化。表示柱色谱的选择性。表示柱色谱的选择性。色谱定性的主要参数。色谱定性的主要参数。第22页/共98页2023/3/1823气相色谱流出曲线应用气相色谱流出曲线应用依据色谱峰的位置（保留值）可以进行依据色谱峰

24、的位置（保留值）可以进行定性测定性测定定。依据色谱峰的面积或峰高可以进行依据色谱峰的面积或峰高可以进行定量测定定量测定。依据色谱峰的位置（保留值）及其宽度，可以依据色谱峰的位置（保留值）及其宽度，可以对对色谱柱分离情况（分离效能）色谱柱分离情况（分离效能）进行评价。进行评价。第23页/共98页2023/3/1824 二、气相色谱分析理论基础二、气相色谱分析理论基础基本原理基本原理色谱分离是一个非常复杂的过程，它是色谱体系色谱分离是一个非常复杂的过程，它是色谱体系热力学和动力学过程的综合表现。热力学和动力学过程的综合表现。热力学过程热力学过程是指与组分在体系中是指与组分在体系中分配系数分配系数相

25、相关的过程。关的过程。动力学过程动力学过程是指组分在该体系两相间是指组分在该体系两相间扩散扩散和和传质传质的过程。的过程。第24页/共98页2023/3/1825气气-固色谱分析固色谱分析中的固定相是一种具有多孔性及中的固定相是一种具有多孔性及大表面积的吸附剂颗粒。大表面积的吸附剂颗粒。在载气的推动下，被测组分在吸附剂表面进行在载气的推动下，被测组分在吸附剂表面进行反复的物理吸附、脱附过程。反复的物理吸附、脱附过程。由于各组分的性质不同，吸附力的差别，使各由于各组分的性质不同，吸附力的差别，使各组分在柱中滞留时间不同，从而实现分离。组分在柱中滞留时间不同，从而实现分离。l气-液色谱分析中的固定

26、相是在化学惰性的固体颗粒表面涂上一层高沸点有机化合物的液膜。组分在流动相的带动下，在液膜上进行反复多次的 溶解、挥发过程。由于各组分的性质不同，溶解性的差异，使各组分在柱中滞留时间不同，从而实现分离。第25页/共98页2023/3/1826分配过程：分配过程：物质在固定相和流动相（气相）之间物质在固定相和流动相（气相）之间发生的吸附、脱附和溶解、挥发的过程。发生的吸附、脱附和溶解、挥发的过程。分配系数分配系数K：一定温度下，组分在两相之间分配一定温度下，组分在两相之间分配达到平衡时的浓度比。达到平衡时的浓度比。第26页/共98页2023/3/1827色谱分离的依据气相色谱分析的分离原理：气相色

27、谱分析的分离原理：不同物质在两相间不同物质在两相间具有不同的具有不同的分配系数分配系数。分配比分配比k：容量因子、容量比：容量因子、容量比 在一定的温度、压力下，组分在两相之间在一定的温度、压力下，组分在两相之间分配达到平衡时，它在两相间的质量比。分配达到平衡时，它在两相间的质量比。相比第27页/共98页2023/3/1828讨论：讨论：K K，k k 均与组分及固定相的热力学性质有关，均与组分及固定相的热力学性质有关，受受T T、P P影响。影响。K K与与 、无关，而无关，而 k k 与与 、有关。有关。组分的分离，对给定的色谱体系，最终决定组分的分离，对给定的色谱体系，最终决定于组分在两

28、相中的相对量，而非相对浓度。于组分在两相中的相对量，而非相对浓度。因此因此 k k 是衡量色谱柱对组分保留能力的重要是衡量色谱柱对组分保留能力的重要参数。参数。k k值大，则保留时间长；值大，则保留时间长；k=0k=0，t=tt=tM M滞留因子滞留因子 ：流动相在柱内的线速度，cms-1组分在柱内的线速度，cms-1可由实验测得第28页/共98页2023/3/1829基本理论基本理论 试样在色谱柱中分离过程的基本理论包括两方面：试样在色谱柱中分离过程的基本理论包括两方面：试样中各组分在两相间的分配情况。试样中各组分在两相间的分配情况。这与这与K K及组分、及组分、固定相、流动相的结构和性质有

29、关，各色谱峰在固定相、流动相的结构和性质有关，各色谱峰在柱后出现的时间（保留值）反映试样中各组分在柱后出现的时间（保留值）反映试样中各组分在两相间的分配情况，由色谱过程的两相间的分配情况，由色谱过程的热力学因素热力学因素控控制。制。各组分在色谱柱中的运动情况。各组分在色谱柱中的运动情况。这与各组分在固这与各组分在固定相和流动相之间的传质阻力有关，各色谱峰的定相和流动相之间的传质阻力有关，各色谱峰的半峰宽度反映了各组分在色谱柱中的运动情况，半峰宽度反映了各组分在色谱柱中的运动情况，由色谱过程的由色谱过程的动力学因素动力学因素控制。控制。第29页/共98页2023/3/1830塔板理论（塔板理论（

30、plate theoryplate theory）：）：19521952年由马丁年由马丁(Martin)(Martin)提出。将色谱柱比作一提出。将色谱柱比作一个个精馏塔精馏塔，用塔板概念来描述组分在柱内的分配，用塔板概念来描述组分在柱内的分配行为，是一种半经验理论。行为，是一种半经验理论。塔板理论塔板理论假设假设：平衡平衡无分子扩散无分子扩散K K相同相同脉冲进气脉冲进气第30页/共98页2023/3/1831结论结论：色谱柱理论塔板数色谱柱理论塔板数n:n:n n越大，色谱峰越大，色谱峰对称对称正态分布曲正态分布曲线线 色谱峰越窄。色谱峰越窄。n n，H H：可作为：可作为柱效能柱效能指标

31、指标 。第31页/共98页2023/3/1832注意注意：同一色谱柱，不同物质同一色谱柱，不同物质n n，H H不同。不同。分离与否决定于分离与否决定于K K的差别。的差别。不足不足：不能解释塔板高度受哪些因素影响。不能解释塔板高度受哪些因素影响。不能解释，不能解释，F F不同，不同，n n或或H H不同。不同。原因：原因：某些基本假设不当。某些基本假设不当。没有真正的平衡状态；纵向扩散不能没有真正的平衡状态；纵向扩散不能忽略；忽略；K K与浓度无关只在有限浓度范与浓度无关只在有限浓度范围内成立。围内成立。优点优点：直观，便于理解分离过程。直观，便于理解分离过程。第32页/共98页2023/3

32、/1833速率理论（速率理论（rate theoryrate theory）：）：19561956年由荷兰学者范年由荷兰学者范 弟姆特弟姆特(Van Deemter)(Van Deemter)提提出。色谱柱过程的出。色谱柱过程的动力学理论动力学理论。范。范 弟姆特方程弟姆特方程式。式。是常数。越小越好。是常数。越小越好。把塔板理论中的塔板高度概念与组分在把塔板理论中的塔板高度概念与组分在两相间的扩散和传质联系起来，采用随机模式两相间的扩散和传质联系起来，采用随机模式描述组分在柱内的分离过程。描述组分在柱内的分离过程。(11-16)载气的线速度，ms-1第33页/共98页2023/3/1834涡

33、流扩散项涡流扩散项 A A：组分分子随载气进入色谱柱，碰到填充物组分分子随载气进入色谱柱，碰到填充物颗粒时不得不改变方向，形成紊乱的、类颗粒时不得不改变方向，形成紊乱的、类似涡流的流动。组分分子所经过的路径长似涡流的流动。组分分子所经过的路径长短各异，从而引起峰形的扩展。短各异，从而引起峰形的扩展。不均匀因子；不均匀因子；平均粒径。平均粒径。与填充状况有关，而与载气的性质、线与填充状况有关，而与载气的性质、线速度、组分无关。速度、组分无关。小颗粒，颗粒均匀，填充均匀，短柱有利小颗粒，颗粒均匀，填充均匀，短柱有利于减小于减小 。第34页/共98页2023/3/1835涡流扩散涡流扩散(不同路径的

34、影响不同路径的影响).).取决于取决于色谱柱色谱柱大小、形状和填充的好坏。大小、形状和填充的好坏。毛细管毛细管柱柱可忽略该项。可忽略该项。第35页/共98页2023/3/1836分子扩散项（纵向扩散项）分子扩散项（纵向扩散项）：“塞子塞子”形的样品，存在沿柱轴方向形的样品，存在沿柱轴方向（纵向）的浓度梯度，各组分分子产生（纵向）的浓度梯度，各组分分子产生纵向分子扩散，使色谱峰扩展。纵向分子扩散，使色谱峰扩展。弯曲因子，填充柱弯曲因子，填充柱 。（毛细管柱。（毛细管柱 ）组分在气相中的扩散系数，单位：组分在气相中的扩散系数，单位：cm2s-1采用摩尔质量大的载气，可以使采用摩尔质量大的载气，可以

35、使B B值减小。值减小。第36页/共98页2023/3/1837 随着样品带在固定相中的移动，因纵向扩散使样品带宽逐渐增加，相应地，得到的色谱峰就越来越宽而矮。图6-4 纵向扩散引起峰展宽的示意图第37页/共98页2023/3/1838纵向扩散纵向扩散 气相中分子的扩散气相中分子的扩散 主要决定于气体流速主要决定于气体流速第38页/共98页2023/3/1839传质阻力项传质阻力项 C C ：试样组分从气相移动到固定相表面进试样组分从气相移动到固定相表面进行浓度分配时所受到的阻力。行浓度分配时所受到的阻力。组分从固定相的气液界面移动到液相组分从固定相的气液界面移动到液相内部进行质量交换到达分配

36、平衡，又返内部进行质量交换到达分配平衡，又返回气液界面的过程中所受的阻力。回气液界面的过程中所受的阻力。几乎与所有的因素有关。几乎与所有的因素有关。气相传质阻力液相传质阻力第39页/共98页2023/3/1840综上综上 ：公式说明了填充的均匀程度、担体颗粒、公式说明了填充的均匀程度、担体颗粒、载气种类、载气流速、柱温、柱压、固载气种类、载气流速、柱温、柱压、固定相液膜厚度等对定相液膜厚度等对H H的影响。的影响。对色谱对色谱分离条件的选控分离条件的选控具有指导意义。具有指导意义。第40页/共98页2023/3/18416-3 固定相气气-固色谱固定相固色谱固定相吸附剂：吸附剂：种类：种类：常

37、用：非极性的活性炭、弱极性的氧化铝、强常用：非极性的活性炭、弱极性的氧化铝、强极性的硅胶等。极性的硅胶等。高分子多孔微球（国产品牌号高分子多孔微球（国产品牌号GDXGDX）。）。固定相的选择对色谱分离及分离条件的选固定相的选择对色谱分离及分离条件的选择至关重要。择至关重要。第41页/共98页2023/3/1842气气-液色谱固定相液色谱固定相担体：担体：化学惰性、多孔性的固体颗粒。化学惰性、多孔性的固体颗粒。种类：种类：硅藻土型硅藻土型：红色担体，白色担体。：红色担体，白色担体。非硅藻土型：非硅藻土型：氟担体，玻璃微球担体，高分子多孔微球氟担体，玻璃微球担体，高分子多孔微球等。等。作用：作用：

38、提供一个大的惰性表面，用来承担固定液，使固定液提供一个大的惰性表面，用来承担固定液，使固定液 以薄膜状态分布在其表面。以薄膜状态分布在其表面。要求：要求：表面化学惰性。表面化学惰性。多孔性。多孔性。热稳定性好，有一定的机械强度。热稳定性好，有一定的机械强度。颗粒均匀，大小适度：一般选颗粒均匀，大小适度：一般选40-6040-60目，目，60-8060-80目，目，80-80-100100目。目。第42页/共98页2023/3/1843 固定液：固定液：对固定液的要求：对固定液的要求：挥发性小。挥发性小。热稳定性好。热稳定性好。对试样各组分有适当的溶解能力。对试样各组分有适当的溶解能力。具有高选

39、择性。具有高选择性。化学稳定性好。化学稳定性好。高沸点有机化合物高沸点有机化合物据被测物选择据被测物选择第43页/共98页2023/3/1844 固定液的分离特征：固定液的分离特征：选择固定液的基础选择固定液的基础一般原则：一般原则：“相似相溶相似相溶”。固定液极性表示：固定液极性表示：相对极性相对极性P P。麦氏常数：麦氏常数：x x、y y、z z、u u、s s。固定液的选择：固定液的选择：分离非极性物质，一般选非极性固定液。分离非极性物质，一般选非极性固定液。分离极性物质，一般选极性固定液。分离极性物质，一般选极性固定液。分离非极性和极性混合物，一般选极性固定液。分离非极性和极性混合物

40、，一般选极性固定液。分离能形成氢键的试样，一般选极性或氢键型固分离能形成氢键的试样，一般选极性或氢键型固定液。定液。分离复杂试样，常采用特殊固定液或混合固定液。分离复杂试样，常采用特殊固定液或混合固定液。第44页/共98页2023/3/1845 固定液的用量固定液的用量能均匀覆盖担体表面形成薄的液膜为宜。能均匀覆盖担体表面形成薄的液膜为宜。固定液的配比：固定液的配比：即，固定液与担体的质量比。即，固定液与担体的质量比。一般在一般在15%-25%15%-25%之间。之间。低低柱效高柱效高分析速度快分析速度快允许进样量少。允许进样量少。第45页/共98页2023/3/18466-4 气相色谱分离条

41、件的选择分离度分离度(resolution)R 两峰保留时间差与两峰峰底宽平均值之商，即两峰保留时间差与两峰峰底宽平均值之商，即 R R是柱效能、选择性影响因素的总和，可用作色谱是柱效能、选择性影响因素的总和，可用作色谱柱的柱的总分离效能的指标总分离效能的指标。若峰形对称且满足正态分布，若峰形对称且满足正态分布，R=1R=1，分离程度，分离程度98%98%，R=1.5R=1.5，分离程度，分离程度99.7%99.7%动力学性质热力学性质两峰完全分开的标志第46页/共98页2023/3/1847若两峰有重叠，若两峰有重叠，Y Y难测，可用难测，可用R R表示表示分离度：分离度：R R与与R R物

42、理意义一致，数值不同，应物理意义一致，数值不同，应用时要注意。用时要注意。经推导：经推导：半峰宽代替峰底宽度第47页/共98页2023/3/1848例：假设两组分的相对保留值例：假设两组分的相对保留值r r2121为为1.151.15，要，要在一根填充柱上获得完全分离（即，在一根填充柱上获得完全分离（即，R=1.5R=1.5）,需有效塔板数和柱长各为多少？需有效塔板数和柱长各为多少？解：解：一般填充柱的一般填充柱的H H有效有效=0.1cm=0.1cm，则，则第48页/共98页2023/3/1849色谱分离的基本方程色谱分离的基本方程 对难分离的物质，近似的有对难分离的物质，近似的有 ，则则

43、色谱分离基本方程第49页/共98页2023/3/1850分离度与柱效的关系（柱效因子）：分离度与柱效的关系（柱效因子）：nn，RR，可以增加柱长来改进分离度，但是，可以增加柱长来改进分离度，但是延长了组分在柱内的保留时间，使峰形扩展。延长了组分在柱内的保留时间，使峰形扩展。方法：方法：应从减小应从减小H H入手，即，制备性能优良的柱入手，即，制备性能优良的柱子并在最优化条件下进行操作。子并在最优化条件下进行操作。分离度与容量比的关系（容量因子）：分离度与容量比的关系（容量因子）：kk，RR，但，但k10k10时，效果并不明显，反而使时，效果并不明显，反而使分析时间延长。故应选分析时间延长。故应

44、选1k101k10。方法：方法：改变柱温改变柱温T T，使，使 变。变。改变相比改变相比 ，减小死体积，减小死体积 ，使，使 。第50页/共98页2023/3/1851分离度与柱选择性的关系（选择因子）：分离度与柱选择性的关系（选择因子）：是柱选择性的量度，是柱选择性的量度，越大，柱选择性越越大，柱选择性越好，分离效果越好。好，分离效果越好。，RR；一定；一定R R下，大的下，大的 值可使组分值可使组分在理论塔板数小的色谱柱上实现分离。在理论塔板数小的色谱柱上实现分离。方法：方法：改变固定相，使各组分的分配系数有改变固定相，使各组分的分配系数有较大差别。较大差别。第51页/共98页2023/3

45、/1852气相色谱分离操作条件的选择气相色谱分离操作条件的选择 综上，要是气相色谱分离获得理想的效果，操作条件的选择是关键，而综上，要是气相色谱分离获得理想的效果，操作条件的选择是关键，而固定相的选择是前提。固定相的选择是前提。载气种类与流速的选择：载气种类与流速的选择：图图6-4 6-4 塔板高度与载气线速的关系塔板高度与载气线速的关系第52页/共98页2023/3/1853 小：小：主要，应选主要，应选 大的载气，以抑大的载气，以抑制扩散。制扩散。大：大：主要，应选主要，应选 小的载气，以减小的载气，以减小传质阻力。小传质阻力。选择载气还应考虑不同检测器的适应性。选择载气还应考虑不同检测器

46、的适应性。一般：一般：N N2 2，20-60ml20-60mlmin-1 H H2 2，40-90ml40-90mlmin-1 。第53页/共98页2023/3/1854柱温的选择：柱温的选择：柱温要低于固定液的最高使用温度。柱温要低于固定液的最高使用温度。柱温柱温，各组分挥发靠拢，各组分挥发靠拢，K K。柱温柱温，H 。选择原则：选择原则：在使最难分离的组分能尽可能好的分离的在使最难分离的组分能尽可能好的分离的前提下，尽可能采用较低的柱温，但以保前提下，尽可能采用较低的柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。留时间适宜，峰形不拖尾为度。一般选低于组分平均沸点一般选低于组分平均沸点20-30

47、20-30，常用常用程序升温程序升温。第54页/共98页2023/3/1855柱长、柱内径的选择：柱长、柱内径的选择：柱长：柱长：保证分离的前提下，选短柱。常用保证分离的前提下，选短柱。常用1-3m1-3m。柱内径：柱内径：一般为一般为3-4mm3-4mm。进样量和进样时间的选择：进样量和进样时间的选择：进样量：进样量：液样：液样：0.1-50.1-5ll气样：气样：0.10.1-10 ml-10 ml进样时间：进样时间：速度要快，速度要快，1s1s以内。以内。气化温度的选择：气化温度的选择：保证样品不分解的情况下，可适当提高气化温度。保证样品不分解的情况下，可适当提高气化温度。接近组分平均沸

48、点，高于柱温接近组分平均沸点，高于柱温30-7030-70。第55页/共98页2023/3/18562-5 毛细管气相色谱法简介 1957 1957年由戈雷首先提出，是用毛细管柱作为气相色谱年由戈雷首先提出，是用毛细管柱作为气相色谱柱的一种高效、快速、高灵敏的分离分析方法。柱的一种高效、快速、高灵敏的分离分析方法。他用内壁涂有一层极薄而均匀的固定液膜的毛细管代他用内壁涂有一层极薄而均匀的固定液膜的毛细管代替填充柱，（这种色谱柱的固定液涂布在内壁上，中心是替填充柱，（这种色谱柱的固定液涂布在内壁上，中心是空的，也称开管柱）解决组分在填充柱中由于受到大小不空的，也称开管柱）解决组分在填充柱中由于受

49、到大小不均载体颗粒的阻碍而造成峰形扩展、柱效能降低的问题。均载体颗粒的阻碍而造成峰形扩展、柱效能降低的问题。毛细管柱具有相比大、渗透性好、分析速度快、总柱毛细管柱具有相比大、渗透性好、分析速度快、总柱效高等优点，可以解决原来填充柱色谱法不能解决或很难效高等优点，可以解决原来填充柱色谱法不能解决或很难解决的问题。解决的问题。第56页/共98页2023/3/1857l毛细管柱l壁涂开管柱(WCOT)：l将固定液直接涂在毛细管内壁。l多孔层开管柱(PLOT)：l在管壁上涂一层多孔性吸附剂固体颗粒，不再涂固定液，实际上是使用开管柱的气固色谱。l载体涂渍开管柱(SCOT)l先在毛细管内壁涂上一层很细的(

50、2m)多孔微粒，然后再在多孔层上涂渍固定液。第57页/共98页2023/3/1858l化学键合毛细管柱：l将固定相用化学键合的方法键合到硅胶涂敷的柱表面或经表面处理的毛细管柱上。l交联毛细管柱：l由交联引发剂将固定相交联到毛细管管壁上。第58页/共98页2023/3/1859l毛细管柱色谱的特点n渗透性好，可使用长色谱柱n相比大，有利于实现快速分析n柱容量小，允许进样量少n总柱效高，分离复杂混合物的能力大大提高l毛细管柱的色谱系统n进样系统：分流进样n色谱柱连接n尾吹n检测器第59页/共98页2023/3/18606-6 气相色谱检测器检测器的种类检测器的种类质量型：质量型：氢火焰离子化检测器