色谱基本理论a塔板理论.pptx

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1、 2-1 2-1 概述概述 色色谱谱法法早早在在19031903年年由由俄俄国国植植物物学学家家M.TswettM.Tswett（茨茨维维特特）提出，成为十分重要的分离分析手段。提出，成为十分重要的分离分析手段。实实验验：叶叶绿绿素素分分离离：石石油油醚醚浸浸提提叶叶片片碳碳酸酸钙钙填填充充拄拄纯纯净净石石油油醚醚淋淋洗洗叶叶绿绿素素分分离离（a a，b b，叶叶黄黄素素，胡胡萝萝卜素）卜素）色色谱谱法法共共同同的的基基本本特特点点是是具具备备两两个个相相：不不动动的的一一相相，称称为为固固定定相相；另另一一相相是是携携带带样样品品流流过过固固定定相相的的流流动动体体，称称为为流流动动相相。当

2、当流流动动相相中中样样品品混混合合物物经经过过固固定定相相时时，就就会会与与固固定定相相发发生生作作用用，由由于于各各组组分分在在性性质质和和结结构构上上的的差差异异，与与固固定定相相相相互互作作用用的的类类型型、强强弱弱也也有有差差异异，因因此此在在同同一一推推动动力力的的作作用用下下，不不同同组组分分在在固固定定相相滞滞留留时时间间长长短短不不同同，从而按先后不同的次序从固定相中流出（从而按先后不同的次序从固定相中流出（洗脱洗脱）。）。第1页/共43页 第2页/共43页色谱法分类色谱法分类 一按两相状态分类n 气体为流动相的色谱称为气相色谱（气体为流动相的色谱称为气相色谱（GCGC），根据

3、固定相是），根据固定相是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体），又可分为气固色谱（合物液体），又可分为气固色谱（GSCGSC）和气液色谱（）和气液色谱（GLCGLC）n液体为流动相的色谱称液相色谱（液体为流动相的色谱称液相色谱（LCLC）。同理，液相色谱亦）。同理，液相色谱亦可分为液固色谱（可分为液固色谱（LSCLSC）和液液色谱）和液液色谱LLCLLC）n超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱（超临界流体为流动相的色谱称为超临界流体色谱（SFCSFC）。）。n通过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定通

4、过化学反应将固定液键合到载体表面，这种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱（相的色谱又称化学键合相色谱（CBPCCBPC）。）。第3页/共43页二按分离机理分类二按分离机理分类 利利用用组组分分在在吸吸附附剂剂（固固定定相相）上上的的吸吸附附能能力力强强弱弱不不同同而而得得以以分离的方法，称为分离的方法，称为吸附色谱法吸附色谱法。利利用用组组分分在在固固定定液液（固固定定相相）中中溶溶解解度度不不同同而而达达到到分分离离的的方方法称为法称为分配色谱法分配色谱法。利利用用组组分分在在离离子子交交换换剂剂（固固定定相相）上上的的亲亲和和力力大大小小不不同同而而达达到分离的方法，称为到分离的方法，

5、称为离子交换色谱法离子交换色谱法。利利用用大大小小不不同同的的分分子子在在多多孔孔固固定定相相中中的的选选择择渗渗透透而而达达到到分分离离的方法，称为的方法，称为凝胶色谱法凝胶色谱法或或排阻色谱法排阻色谱法。利利用用不不同同组组分分与与固固定定相相（固固定定化化分分子子）的的高高专专属属性性亲亲和和力力进进行分离的技术称为行分离的技术称为亲和色谱法亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。，常用于蛋白质的分离。第4页/共43页三按固定相的外形分类三按固定相的外形分类固定相装于柱内的色谱法，称为固定相装于柱内的色谱法，称为柱色谱柱色谱。固定相呈平板状的色谱法，称为固定相呈平板状的色谱法，称为平板色谱平板色

6、谱，它，它又可分为又可分为薄层色谱薄层色谱和和纸色谱纸色谱。根据以上所述，将色谱法的分类总结于表根据以上所述，将色谱法的分类总结于表根据以上所述，将色谱法的分类总结于表根据以上所述，将色谱法的分类总结于表2-l2-l中中中中。第5页/共43页2-1第6页/共43页2-2 2-2 色谱流出曲线及有关术语色谱流出曲线及有关术语一流出曲线和色谱峰一流出曲线和色谱峰 2-1第7页/共43页基线基线(Baseline)、基线噪声基线噪声(Baseline noise)基线漂移基线漂移(Baseline drift)死时间死时间(Dead time)、死体积、死体积(Dead volume)保留值保留值(

7、Retention value):Retention time&Retention volume调整保留值调整保留值(Adjusted retention value)：Adjusted retention time&Adjusted retention volume相对保留值相对保留值(Relative retention value)区域宽度区域宽度(Peak width)标准偏差标准偏差(Standard deviation)半峰宽度半峰宽度(Peak width at half-height)峰底宽度峰底宽度(Peak width at peak base)峰高峰高（Peak heig

8、ht）第8页/共43页二、基线二、基线 柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，即图2-1中Ot线理想的基线应该是一条水平直线。基线噪声，基线漂移 2-1三、峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示，如图2-1中BA 第9页/共43页四、保留值四、保留值 1 1死时间死时间t tM M 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，如图2-1中 OA。因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相的流动速度相近测定流动相平均线速时，可用柱长L与tM的比值计算。第10页/共43页 2 2保留时间保留时间t tR R 试样从进样开始到柱后出

9、现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，如图如图2-1 OB2-1 OB它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间 图2-1 色谱流出曲线第11页/共43页3 3调整保留时间调整保留时间t tR R 某组份的保留时间扣除死时间后称某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的为该组份的调整保留时间调整保留时间，即，即 t tR R=t=tR R-t-tM M 由由于于组组份份在在色色谱谱柱柱中中的的保保留留时时间间t tR R包包含含了了组组份份随随流流动动相相通通过过柱柱子子所所需需的的时时间间和和

10、组组份份在在固固定定相相中中滞滞留留所所需需的的时时间间，所所以以t tR R实实际际上上是是组组份份在在固固定定相相中中停停留留的的总总时时间间保保留留时时间间可可用用时时间间单单位位（如（如s s）或距离单位（如）或距离单位（如cmcm）表示。）表示。保留时间是色谱法定性的基本依据保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一，但同一组份的保留时间常受到流动相流速的影响，因此组份的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积等参数进行定性检定色谱工作者有时用保留体积等参数进行定性检定第12页/共43页 4 4死体积死体积 V VM M 指指色色谱谱柱柱在在填填充充后后，柱柱管管内内

11、固固定定相相颗颗粒粒间间所所剩剩留留的的空空间间、色色谱谱仪仪中中管管路路和和连连接接头头间间的的空空间间以以及及检检测测器器的的空空间间的的总总和和当当后后两两项项很很小小而而可可忽忽略略不不计计时时，死死体体积积可由死时间与流动相体积流速可由死时间与流动相体积流速F F0 0（L Lminmin）计算：）计算：V VM M=t=tM MF F0 0 第13页/共43页5 5保留体积保留体积 V VR R 指从进样开始到被测组份在柱后出指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。保现浓度极大点时所通过的流动相体积。保留体积与保留时间留体积与保留时间t t。的关系如下：。的

12、关系如下：VR=tRF0 6 6调整保留体积调整保留体积V VR R 某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR=VR-VM第14页/共43页 7相对保留值2.1 某组份某组份2 2的调整保留值与组份的调整保留值与组份1 1的调整保留值之比，称为相对保留值：的调整保留值之比，称为相对保留值：由由于于相相对对保保留留值值只只与与柱柱温温及及固固定定相相的的性性质质有有关关，而而与与柱柱径径、柱柱长长、填填充充情情况况及及流流动动相相流流速速无无关关，因因此此，它它是是色色谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据谱法

13、中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据 必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保留体积之比留体积之比 .第15页/共43页选择因子选择因子 式中式中t tR2R2为为后出峰后出峰的调整保留时间，所以这时的调整保留时间，所以这时总是大于总是大于1 1的的 。在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（准（准（准（s s s s），然后再求其它峰（），然后再求其它峰（），然后再求其它峰（），然后再求其它峰（i i i i）对这个

14、峰的相对）对这个峰的相对）对这个峰的相对）对这个峰的相对保留值在多元混合物分析中，保留值在多元混合物分析中，保留值在多元混合物分析中，保留值在多元混合物分析中，通常选择一对最通常选择一对最通常选择一对最通常选择一对最难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要难分离的物质对，将它们的相对保留值作为重要参数参数参数参数在这种特殊情况下，可用符号在这种特殊情况下，可用符号在这种特殊情况下，可用符号在这种特殊情况下，可用符号表示：表示：表示：表示：第16页/共43页五、区域宽度五、区域宽度 色谱峰的区域宽度是组份在色谱

15、柱中色谱峰的区域宽度是组份在色谱柱中谱带扩张的函数，它反映了色谱操作条件谱带扩张的函数，它反映了色谱操作条件的动力学因素度量色谱峰区域宽度通常的动力学因素度量色谱峰区域宽度通常有三种方法：有三种方法：1.标准偏差 即0607倍峰高处色谱峰宽的一半，如图2-1中EF距离的一半。2.半峰宽Y1/2 即峰高一半处对应的峰宽，如图2-1中GH间的距离它与标准偏差的关系是：Y1/2=2.354第17页/共43页2-1第18页/共43页 3.3.基线宽度基线宽度W W 即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距，如图2-1中IJ的距离它与标准偏差的关系是：Y=4 第19页/共43页从色谱流出曲线上，可以得到许

16、多重要信息：从色谱流出曲线上，可以得到许多重要信息：（l l l l）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组份的最少个数）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组份的最少个数）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组份的最少个数）根据色谱峰的个数，可以判断样品中所合组份的最少个数（2 2 2 2）根据色谱峰的保留值）根据色谱峰的保留值）根据色谱峰的保留值）根据色谱峰的保留值(或位置），可以进行定性分析或位置），可以进行定性分析或位置），可以进行定性分析或位置），可以进行定性分析（3 3 3 3）根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析根据色谱峰的面积或峰高，

17、可以进行定量分析根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析（4 4 4 4）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据）色谱峰的保留值及其区域宽度，是评价色谱柱分离效能的依据（5 5 5 5）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相和流动相选择是否合适的依据）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相和流动相选择是否合适的依据）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相和流动相选择是否合适的依据）色谱峰两峰间的距离，是评价固定相和流动相选择是否合适的依据第20页/共43页 2 23 3 色谱法分析的基

18、本原理色谱法分析的基本原理 目的：将样品中各组分彼此分离，组分要达到完目的：将样品中各组分彼此分离，组分要达到完全分离，两峰间的距离必须足够远全分离，两峰间的距离必须足够远.两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定两峰间的距离是由组分在两相间的分配系数决定的，即与色谱过程的的，即与色谱过程的热力学性质热力学性质有关。有关。但是两峰但是两峰间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此间虽有一定距离，如果每个峰都很宽，以致彼此重叠，还是不能分开。重叠，还是不能分开。这些峰的宽或窄是由组分这些峰的宽或窄是由组分在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过在色谱柱中传质和扩散行为决定的，即与色谱过程的程

19、的动力学动力学性质有关。性质有关。因此，要从热力学和动力因此，要从热力学和动力学两方面来研究色谱行为。学两方面来研究色谱行为。第21页/共43页一、分配系数一、分配系数K K和分配比和分配比k k1分配系数分配系数K K 色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次地分配或吸附反复多次地分配或吸附-脱附过程。脱附过程。分配系数是描述分离过程中样品分子在两相间分配分配系数是描述分离过程中样品分子在两相间分配的参数，的参数，它是指在一定温度和压力下，组分在固它是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值定相和流动相之间

20、分配达平衡时的浓度之比值第22页/共43页2.2.分配比分配比k k 分配比又称容量因子，它是指在一定温分配比又称容量因子，它是指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。时，分配在固定相和流动相中的质量比。即即 第23页/共43页k k值越大，说明组分在固定相中的量越多，相值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称当于柱的容量大，因此又称分配容量分配容量或或容量因容量因子子。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。重要参数。k k值也决定于组分及固定相热力学值

21、也决定于组分及固定相热力学性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。还与流动相及固定相的体积有关。式式中中C CS S，CmCm分分别别为为组组分分在在固固定定相相和和流流动动相相的的浓浓度度；VmVm为为柱柱中中流流动动相相的的体体积积，近近似似等等于于死死体体积积。VsVs为为柱柱中中固固定定相相的的体体积积，在在各各种种不不同同的的类类型型的的色色谱谱中中有有不不同同的的含含义义。例例如如：在在分分配配色色谱谱中中，VsVs表表示示固固定定液液的的体体积积；在在尺尺寸寸排排阻阻色色谱谱中中，则则表表示示固固定定相相的的孔

22、体积。孔体积。第24页/共43页分配比分配比k k值可直接从色谱图测得。值可直接从色谱图测得。滞留因子滞留因子(保留比保留比)Rs)Rs设流动相在柱内的线速度为设流动相在柱内的线速度为u u，组分，组分在柱内线速度为在柱内线速度为u us s，由于固定相对，由于固定相对组分有保留作用，所以组分有保留作用，所以u us su u此两此两速度之比称为滞留因子速度之比称为滞留因子RsRs。对对组组分分和和流流动动相相通通过过长长度度为为L L的的色谱柱，其所需时间分别为色谱柱，其所需时间分别为第25页/共43页RsRs若用质量分数表示，即若用质量分数表示，即第26页/共43页整理式上述公式，可得整理

23、式上述公式，可得 通过色谱流出曲线通过色谱流出曲线,就可以求得分配比就可以求得分配比k.k.第27页/共43页3.3.分配系数分配系数K K与分配比与分配比k k的关系的关系 其中其中称为称为相比率相比率，它是反映各种色谱柱型特点的又一个参数。例如，对填充柱，它是反映各种色谱柱型特点的又一个参数。例如，对填充柱，其其值一般为值一般为6 63535；对毛细管柱，其；对毛细管柱，其值为值为6060600600。第28页/共43页分配系数是组分在两相中的浓度比分配系数是组分在两相中的浓度比,分配比是组分在两相中分配分配比是组分在两相中分配总量之比总量之比.热力学性质热力学性质(拄温拄温,柱压柱压)分

24、配系数只取决与组分和两相性质分配系数只取决与组分和两相性质,与两相体积无关与两相体积无关,而分配比而分配比不仅取决与组分和两相性质不仅取决与组分和两相性质,还与相比有关还与相比有关.一定的色谱体系中一定的色谱体系中,组分分离决定于组分在每相中的相对量组分分离决定于组分在每相中的相对量,而而不是相对浓度不是相对浓度,因此因此,分配比是衡量色谱柱对组分保留能力的重分配比是衡量色谱柱对组分保留能力的重要参数要参数.k.k越大越大,保留时间越长保留时间越长,k,k 为为0,0,保留时间为死时间保留时间为死时间.第29页/共43页4 4分配系数分配系数K K及分配比及分配比k k与选择因子与选择因子的关

25、系的关系 对A、B两组分的选择因子，用下式表示 第30页/共43页 上述公式表明：上述公式表明：通过选择因子通过选择因子把实验把实验测量值测量值k k与热力学性质的分配系数与热力学性质的分配系数K K直接直接联系起来，联系起来，对固定相的选择具有实际对固定相的选择具有实际意义。如果两组分的意义。如果两组分的K K或或k k值相等，则值相等，则=1=1，两个组分的色谱峰必将重合，说，两个组分的色谱峰必将重合，说明分不开。明分不开。两组分的两组分的K K或或k k值相差越大，值相差越大，则分离得越好。因此两组分具有不同的则分离得越好。因此两组分具有不同的分配系数是色谱分离的先决条件。分配系数是色谱

26、分离的先决条件。第31页/共43页 二、塔板理论 最早由最早由MartinMartin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引入理论塔板数作为衡量柱效塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引入理论塔板数作为衡量柱效率的指标。率的指标。第32页/共43页该理论假定：（i i）在在柱柱内内一一小小段段长长度度H H内内，组组分分可可以以在在两两相相间间迅迅速速达达到到平平衡衡。这这一一小小段段柱柱长长称称为为理理论塔板高度论塔板高度H H。（ii ii）以以气气相相色色谱谱为为例

27、例，载载气气进进入入色色谱谱柱柱不不是是连连续续进进行行的的，而而是是脉脉动动式式，每每次次进进气气为为一一个个塔板体积（塔板体积（VVm m）。）。（iiiiii）所有组分开始时存在于）所有组分开始时存在于第第0 0号号塔板上，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。塔板上，而且试样沿轴（纵）向扩散可忽略。（iv iv）分配系数在所有塔板上是）分配系数在所有塔板上是常数常数，与组分在某一塔板上的量无关。，与组分在某一塔板上的量无关。.第33页/共43页 为简单起见，设色谱往由5块塔板（n5，n为柱子的塔板数）组成，并以r表示塔板编号，r=1，2，nl；某组分的分配比k=1根据上述假定，在色谱分离过程

28、中，该组分的分布可计算如下：开始时，若有单位质量，即m=1（例1mg或1g）的该组分加到第0号塔板上，分配平衡后，由于k=1，即ns=nm故nm=ns=0.5。当一个板体积（lV）的载气以脉动形式进入0号板时，就将气相中含有nm部分组分的载气顶到1号板上，此时0号板液相（或固相）中ns部分组分及1号板气相中的nm部分组分，将各自在两相间重新分配。故0号板上所含组分总量为05，其中气液（或气固）两相各为025而1号板上所含总量同样为05气液（或气固）相亦各为025。以后每当一个新的板体积载气以脉动式进入色谱柱时，上述过程就重复一次(见下表)。第34页/共43页 表表2-2 2-2 组分在任一板上

29、的分配情况组分在任一板上的分配情况第35页/共43页第36页/共43页由塔板理论可建流出曲线方程：由塔板理论可建流出曲线方程：m m为组分质量，为组分质量，VrVr为保留体积，为保留体积，n n为理论塔板数。为理论塔板数。当当V=Vr V=Vr 时，时，C C值最大，即值最大，即第37页/共43页由流出曲线方程可推出：由流出曲线方程可推出：而理论塔板高度（而理论塔板高度（H）即：）即：第38页/共43页 从从上上两两式式可可以以看看出出，色色谱谱峰峰Y Y越越小小，n n就就越越大大，而而H H就就越越小，柱效能越高小，柱效能越高。因此，。因此，n n和和H H是描述柱效能的指标是描述柱效能的

30、指标。通通 常常 填填 充充 色色 谱谱 柱柱 的的 n n 10103 3，H H 1mm1mm。而而 毛毛 细细 管管 柱柱 n=10n=105 5-10-106 6，H H0.5mm0.5mm 由于死时由于死时t tm m包括在包括在trtr中中,而实际的而实际的t tm m不参与柱内分配不参与柱内分配,所所计算的计算的n n值尽大值尽大,H,H很小很小,但与实际柱效能相差甚远但与实际柱效能相差甚远.所以所以,提出提出把把t tm m扣除扣除,采用采用有效理论塔板数有效理论塔板数n neffeff和和有效塔板高有效塔板高H Heffeff评价柱效评价柱效能。能。注意:同一色谱柱对不同物质

31、的柱效能是不一样的同一色谱柱对不同物质的柱效能是不一样的,当用这些指当用这些指标表示柱效能时标表示柱效能时,必须说明是对什么物质而言必须说明是对什么物质而言.第39页/共43页 塔板理论用热力学观点形象地描述了溶质在色谱柱塔板理论用热力学观点形象地描述了溶质在色谱柱中的分配平衡和分离过程，导出流出曲线的数学模型，中的分配平衡和分离过程，导出流出曲线的数学模型，并成功地解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置，并成功地解释了流出曲线的形状及浓度极大值的位置，还提出了计算和评价柱效的参数。但由于它的某些基还提出了计算和评价柱效的参数。但由于它的某些基本假设并不完全符合柱内实际发生的分离过程，例如，本

32、假设并不完全符合柱内实际发生的分离过程，例如，纵向扩能解释造成谱带扩张的原因和影响板高的各种纵向扩能解释造成谱带扩张的原因和影响板高的各种因素，也不能说明为什么在不同流速下可以测得不同因素，也不能说明为什么在不同流速下可以测得不同的理论塔板数，这就限制了它的应用。的理论塔板数，这就限制了它的应用。第40页/共43页色谱柱色谱柱n n越大越大,表明组分在色谱柱中达到分配平衡的次数就越多表明组分在色谱柱中达到分配平衡的次数就越多,固定相的作用就越显著固定相的作用就越显著,对分离就越有利对分离就越有利!但还不能预言并确定各组分能否被分离但还不能预言并确定各组分能否被分离(能否分离决定于试样混能否分离

33、决定于试样混合物中在固定相中的分配系数的差异合物中在固定相中的分配系数的差异,而不是分配次数差异而不是分配次数差异),),因因此不能把此不能把n n有效有效作为能否实现分离可能的依据作为能否实现分离可能的依据,而只能看作是一定而只能看作是一定条件下柱分离能力发挥程度的标志条件下柱分离能力发挥程度的标志.第41页/共43页主要的概念和重要的公式主要的概念和重要的公式调整保留时间调整保留时间t tR R =保留时间保留时间t tR R-死时间死时间t tM M 相对保留值相对保留值2.1 2.1（选择因子（选择因子）分配系数分配系数K与分配比与分配比k 以及同选择因子以及同选择因子的关系的关系理论塔板数理论塔板数n n与保留时间与保留时间t tR R和半峰宽和半峰宽Y Y1/2 1/2、峰宽峰宽Y Y的关系的关系理论塔板高度理论塔板高度H H第42页/共43页感谢您的观看！第43页/共43页