微生物显微镜和显微技术学习教案.pptx

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1、会计学1微生物微生物 显微显微(xin wi)镜和显微镜和显微(xin wi)技术技术 第一页，共46页。2023/2/262借助于显微镜观察微生物的方法即显微技术，借助于显微镜观察微生物的方法即显微技术，显微技术是微生物检验显微技术是微生物检验(jinyn)(jinyn)技术中最技术中最常用的技术之一。常用的技术之一。第2页/共46页第二页，共46页。2023/2/263显微镜的种类(zhngli)和原理显微观察样品(yngpn)的制备第3页/共46页第三页，共46页。2023/2/264一、显微镜的种类一、显微镜的种类(zhngli)和和原理原理l l(一一)、光学、光学(gungxu)(

2、gungxu)显微镜显微镜普通普通(ptng)光学显微镜光学显微镜暗视野显微镜暗视野显微镜相差显微镜相差显微镜荧光显微镜荧光显微镜 现在的光学显微镜分辨的最小极限达现在的光学显微镜分辨的最小极限达0.20.2m m。第4页/共46页第四页，共46页。2023/2/265普通光学普通光学普通光学普通光学(gungxu)(gungxu)显微镜的几个基本概念显微镜的几个基本概念显微镜的几个基本概念显微镜的几个基本概念第5页/共46页第五页，共46页。2023/2/266第6页/共46页第六页，共46页。2023/2/267第7页/共46页第七页，共46页。2023/2/268第8页/共46页第八页，

3、共46页。2023/2/269第9页/共46页第九页，共46页。2023/2/2610l1 1、普通、普通(ptng)(ptng)光学显光学显微镜微镜由三部分构成由三部分构成照明系统：包括光源和聚光器；照明系统：包括光源和聚光器；光学放大系统：由物镜和目镜组光学放大系统：由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，目镜和物镜成，是显微镜的主体，目镜和物镜都由复杂都由复杂(fz)(fz)的透镜组构成；的透镜组构成；机械装置：用于固定材料和观察机械装置：用于固定材料和观察方便方便 第10页/共46页第十页，共46页。2023/2/2611油镜使用油镜使用油镜使用油镜使用(shyng)(shyng)光镜使用光

4、镜使用(shyng)(shyng)方法方法 第11页/共46页第十一页，共46页。2023/2/26122 2、暗视野显微、暗视野显微镜镜原理：聚光镜中央有挡光片，原理：聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进人物镜，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野线进入物镜，因而视野(shy)(shy)的背景是黑的，物体的背景是黑的，物体的边缘是亮的。的边缘是亮的。适用范围：生活细菌运动性观适用范围：生活细菌运动性观察。察。第12页/共46页第十二页，共46页。2023/2/2613特点特点:只能看到物体的存在与只能看到物体的存在与运动运动,不

5、能辨清其微细不能辨清其微细(wix)(wix)结构。结构。暗视野显微镜的使用暗视野显微镜的使用(shyng)第13页/共46页第十三页，共46页。2023/2/2614n n基本原理基本原理:把透过标本的可见把透过标本的可见光的光程光的光程(un chn)(un chn)差变差变成振幅差，从而提高了各种成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。构变得清晰可见。3 3、相差、相差(xin ch)(xin ch)显微镜显微镜相差相差(xin ch)(xin ch)显微镜使用显微镜使用第14页/共46页第十四页，共46页。2023/2/2615微分微分(

6、wi fn)干涉差显微干涉差显微镜镜DIC显微镜下的硅藻形显微镜下的硅藻形态态l l适用范围：对透明的活体进行直接适用范围：对透明的活体进行直接适用范围：对透明的活体进行直接适用范围：对透明的活体进行直接(zhji)(zhji)(zhji)(zhji)观察观察观察观察第15页/共46页第十五页，共46页。2023/2/26164 4、荧光、荧光(ynggung)(ynggung)显微镜显微镜原理：荧光原理：荧光(ynggung)(ynggung)素吸收紫外素吸收紫外线并放出部分波长较线并放出部分波长较长的可见光，发荧光长的可见光，发荧光(ynggung)(ynggung)的物体会在的物体会在黑

7、暗背景显现为光亮黑暗背景显现为光亮有色物体有色物体第16页/共46页第十六页，共46页。2023/2/2617绿色：铜绿绿色：铜绿(tngl)(tngl)假单胞菌假单胞菌 黄色：蜡样芽孢杆黄色：蜡样芽孢杆菌菌绿色：微管绿色：微管(wi un)红色：微丝红色：微丝蓝色：核蓝色：核第17页/共46页第十七页，共46页。2023/2/2618n n1931193119311931年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。年在德国柏林由克诺尔和哈罗斯卡首先装配完成的。n n用高速电子束代替光束。放大用高速电

8、子束代替光束。放大用高速电子束代替光束。放大用高速电子束代替光束。放大(fngd)(fngd)(fngd)(fngd)倍数可达倍数可达倍数可达倍数可达80808080万倍，万倍，万倍，万倍，分辨的最小极限达分辨的最小极限达分辨的最小极限达分辨的最小极限达0.20.20.20.2纳米。纳米。纳米。纳米。（二）电子显微镜（二）电子显微镜透射透射(tu sh)电子显微镜电子显微镜扫描扫描(somio)电子显微镜电子显微镜第18页/共46页第十八页，共46页。2023/2/26191 1、透射、透射(tu sh)(tu sh)电子显微镜电子显微镜目前目前TEMTEM的分辨力可达的分辨力可达0.2nm0

9、.2nm。用电子束作光源，用电磁场作用电子束作光源，用电磁场作透镜。用于电镜的标本须制成厚透镜。用于电镜的标本须制成厚度度(hud)(hud)约约50nm50nm左右的超薄切左右的超薄切片。放大倍数最高可达近百万倍片。放大倍数最高可达近百万倍.由电子照明系统、电磁透镜成由电子照明系统、电磁透镜成像系统、真空系统、记录系统、像系统、真空系统、记录系统、电源系统等电源系统等5 5部分构成。部分构成。第19页/共46页第十九页，共46页。2023/2/2620高尔基体的TEM照片(zhopin)(伪彩色)第20页/共46页第二十页，共46页。2023/2/2621第21页/共46页第二十一页，共46

10、页。2023/2/26222 2、扫描、扫描(somio)(somio)电子显微镜电子显微镜扫描扫描(somio)电子显微镜电子显微镜大肠杆菌大肠杆菌(d chn n jn)扫描电镜图扫描电镜图工作原理：电子束扫描，激发样品表面放出二次电子，电子产生多少与标工作原理：电子束扫描，激发样品表面放出二次电子，电子产生多少与标本表面立体形貌有关。电子经探测器收集，经光电倍增管和放大器，产生本表面立体形貌有关。电子经探测器收集，经光电倍增管和放大器，产生样品立体图像于荧光屏上。样品立体图像于荧光屏上。主要用于：样品表面结构主要用于：样品表面结构第22页/共46页第二十二页，共46页。2023/2/26

11、23第23页/共46页第二十三页，共46页。2023/2/2624第24页/共46页第二十四页，共46页。2023/2/26253 3、扫描、扫描(somio)(somio)隧道显微镜（隧道显微镜（STMSTM）扫描隧道扫描隧道(sudo)(sudo)显微镜拍摄的显微镜拍摄的7 7个铀原子团个铀原子团 第25页/共46页第二十五页，共46页。2023/2/2626第26页/共46页第二十六页，共46页。2023/2/26274 4 原子力显微镜原子力显微镜第27页/共46页第二十七页，共46页。2023/2/2628第28页/共46页第二十八页，共46页。2023/2/2629第29页/共46

12、页第二十九页，共46页。2023/2/2630（一）光学（一）光学(gungxu)显微镜显微镜制样制样活体活体(hu t)观察观察染色染色(rns)压滴法压滴法悬滴法悬滴法菌丝埋片法菌丝埋片法活菌活菌死菌死菌美蓝染色美蓝染色简单染色简单染色鉴别染色鉴别染色革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色革兰氏染色、鞭毛染色、芽孢染色二、显微观察样品二、显微观察样品的制备的制备第30页/共46页第三十页，共46页。2023/2/2631n n（1）压滴法：菌悬液滴于载玻）压滴法：菌悬液滴于载玻片上，加盖玻片，观察。片上，加盖玻片，观察。n n（2）悬滴法：盖玻片中央加一）悬滴法：盖玻片中央加一小滴菌悬液，翻转置于

13、特制的凹小滴菌悬液，翻转置于特制的凹载玻片上，观察。载玻片上，观察。n n（3）菌丝埋片法：无菌小块玻）菌丝埋片法：无菌小块玻璃纸铺于平板表面，涂布放线菌璃纸铺于平板表面，涂布放线菌或霉菌孢子或霉菌孢子(boz)悬液，培养，悬液，培养，取下玻璃纸置于载玻片上，观察取下玻璃纸置于载玻片上，观察菌丝形态。菌丝形态。光学光学(gungxu)显微镜样品制备活体观察显微镜样品制备活体观察特点：避免染色对细胞结构的破坏特点：避免染色对细胞结构的破坏(phui)(phui)，用于，用于运动性、摄食特性、生长繁殖过程中形态变化等运动性、摄食特性、生长繁殖过程中形态变化等观察观察 第31页/共46页第三十一页，

14、共46页。2023/2/2632 用途：微生物的细致形态用途：微生物的细致形态(xngti)(xngti)和结构和结构 染色前需要对样品固定染色前需要对样品固定.常用固定方法：酒精火焰加热、化学固定常用固定方法：酒精火焰加热、化学固定光学显微样品光学显微样品(yngpn)制备染色观察制备染色观察第32页/共46页第三十二页，共46页。2023/2/2633n n1)1)、简单染色法：涂片、简单染色法：涂片干燥干燥固定固定染色染色水洗水洗干燥干燥镜检镜检n n2 2）、革兰氏染色法：涂片）、革兰氏染色法：涂片固固定定结晶结晶(jijng)(jijng)紫色染色紫色染色水洗水洗碘液媒染碘液媒染水洗

15、水洗酒精酒精脱色脱色番红复染番红复染水洗水洗干燥干燥观察观察第33页/共46页第三十三页，共46页。2023/2/2634（二）、电子显微镜的制样（二）、电子显微镜的制样 样品在进行样品在进行(jnxng)电镜观察前电镜观察前必须进行必须进行(jnxng)固定和干燥，固定和干燥，制样时一般采用重金属盐染色或制样时一般采用重金属盐染色或喷镀，提高在电镜下的反差。喷镀，提高在电镜下的反差。第34页/共46页第三十四页，共46页。2023/2/263511、透射电镜的样品、透射电镜的样品(yngpn)(yngpn)制备制备负染技术负染技术(jsh)投影投影(tuyng)技术技术超薄切片技术超薄切片技

16、术冰冻蚀刻技术冰冻蚀刻技术第35页/共46页第三十五页，共46页。2023/2/2636第36页/共46页第三十六页，共46页。2023/2/2637第37页/共46页第三十七页，共46页。2023/2/2638第38页/共46页第三十八页，共46页。2023/2/2639第39页/共46页第三十九页，共46页。2023/2/2640第40页/共46页第四十页，共46页。2023/2/2641样品样品(yngpn)-196(yngpn)-196迅速冷冻迅速冷冻加温到加温到-100100切割样品切割样品(yngpn)(yngpn)升华升华(真空真空)掉掉断口处的冰断口处的冰重金属喷镀断口表面重金属喷镀断口表面电子电子显微镜观察显微镜观察冰冻蚀刻法冰冻蚀刻法第41页/共46页第四十一页，共46页。2023/2/2642第42页/共46页第四十二页，共46页。2023/2/2643第43页/共46页第四十三页，共46页。2023/2/2644第44页/共46页第四十四页，共46页。2023/2/2645作作 业业n n1、透射电镜样品制备的方法有哪些？各自的适用范围有什么(shn me)不同？第45页/共46页第四十五页，共46页。2023/2/2646感谢您的观看感谢您的观看(gunkn)！第46页/共46页第四十六页，共46页。