微生物的实验室培养—Alan学习教案.pptx
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1、会计学1微生物的实验室培养微生物的实验室培养(piyng)Alan第一页,共52页。几种菌落(jnlu)及其形态第2页/共52页第二页,共52页。几种(j zhn)菌落及其形态第3页/共52页第三页,共52页。专题2:微生物的培养(piyng)与应用第4页/共52页第四页,共52页。培养微生物需要解决的两个问题(wnt)是什么?1、为其提供合适的营养(yngyng)条件和环境条件2、防止杂菌的入侵思考(sko):第5页/共52页第五页,共52页。一、培养基1.1.营养成分:营养成分:思考(sko):微生物“吃”什么?水、无机盐、碳源、氮源水、无机盐、碳源、氮源此外,还需要满足(mnz)微生物生
2、长对pH、特殊营养物质(如:生长因子)以及氧气等的要求。第6页/共52页第六页,共52页。一、培养基:一、培养基:一、培养基:一、培养基:1.1.基本成分:基本成分:碳源无机(wj)碳源:有机(yuj)碳源:CO2、CO32-、HCO3-牛肉(ni ru)膏自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物氮源无机氮源:有机氮源:N2、NH4、NO3-蛋白胨第7页/共52页第七页,共52页。牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用是一种应用(yngyng)(yngyng)最广泛和最普通的细菌基础培养最广泛和最普通的细菌基础培养基。基。1000ml1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方牛肉膏蛋白胨培
3、养基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g琼脂20.0g分析其营养分析其营养(yngyng)(yngyng)构成?构成?第8页/共52页第八页,共52页。C第9页/共52页第九页,共52页。.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别(chbi)是()A碳源 B氮源 C无机盐 D特殊营养物质A第10页/共52页第十页,共52页。n n.概念概念(ginin)(ginin):n n.种类:种类:一、培养基人们按照微生物对营养物质的不同人们按照微生物对营养物质的不同(b tn)(b tn)需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。(
4、1)按物理性质来分:固体(gt)培养基和液体培养基(2)按功能来分:选择培养基和鉴别培养基第11页/共52页第十一页,共52页。固体(gt)培养基:菌落backback第12页/共52页第十二页,共52页。选择选择(xunz)培养基培养基n n加入加入(jir)(jir)青霉素的培养基青霉素的培养基n n加入加入(jir)(jir)高浓度食盐的培养基高浓度食盐的培养基 n n不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基n n不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基分离(fnl)酵母菌、霉菌等真菌(抑制细菌、放线菌的生长)分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物babackck第13
5、页/共52页第十三页,共52页。伊红美蓝培养基是鉴别培养基,可以用来检测自来水中的大肠杆菌是否超标,因为的代谢(dixi)产物与伊红美蓝结合,使菌落呈黑色并带有金属光泽,使大肠杆菌的菌落显示出来,并没有促进大肠杆菌的生长和抑制其他微生物的生长。例如:鉴别(jinbi)大肠杆菌培养基大肠杆菌(d chn n jn)呈黑色中心,有或无金属光泽bacback k第14页/共52页第十四页,共52页。n n获得纯净获得纯净(chnjng)(chnjng)培养物的关键是什么?培养物的关键是什么?二、无菌技术(jsh)防止(fngzh)外来杂菌污染1.目的:2.方法:消毒与灭菌消毒与灭菌的概念和区别?第1
6、5页/共52页第十五页,共52页。第16页/共52页第十六页,共52页。2.2.无菌范围无菌范围(fnwi)(fnwi):实验实验(shyn)(shyn)操作空间消毒操作空间消毒操作者的手、衣着操作者的手、衣着(yzhu)(yzhu)消消毒毒实验用具灭菌实验操作过程二二.无菌技术:无菌技术:防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染1.1.消毒与灭菌:消毒与灭菌:酒精灯旁操作超净工作超净工作台台第17页/共52页第十七页,共52页。有些细菌在一定有些细菌在一定的条件下,细胞里面的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的休形成一个椭圆形的休眠体,叫做芽孢眠体,叫做芽孢(y(y bo)bo)。芽孢。芽孢(y b
7、o)(y bo)的壁很厚,对干旱、的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。环境有很强的抵抗力。(抗逆性极强)(抗逆性极强)注:不是繁殖体注:不是繁殖体第18页/共52页第十八页,共52页。干热(n r)灭菌接种环、接种针等 金属(jnsh)用具7075、30min 80、15min100、56min消毒消毒灭菌灭菌定义定义方法方法较为温和(wnh)理化方法,杀死部分有害菌体(不包括芽孢、孢子)强烈的理化方法,杀死所有微生物(包括芽孢、孢子)煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂紫外线灼烧灭菌高压蒸汽灭菌二二.无菌技术:无菌技术:防止外来杂菌的污染防止外来杂菌的污染2.2
8、.消毒与灭菌:消毒与灭菌:第19页/共52页第十九页,共52页。第20页/共52页第二十页,共52页。1.无菌技术(jsh)除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果(rgu)需要,请选择合适的方法。(1)培养细菌用的培养基与培养皿(2)玻棒、试管、烧瓶和吸管(3)实验操作者的双手答:无菌技术(jsh)还能有效避免操作者自身被微生物感染。答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。第21页/共52页第二十一页,共52页。高压蒸气灭菌(mi jn)的原理是()A高压使细菌DNA变性 B高压使细菌蛋白质凝固变性 C高温烫死细菌
9、 D高温使细菌DNA变性B第22页/共52页第二十二页,共52页。二、微生物实验室培养(piyng)的基本操作程序1、器具(qj)的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存第23页/共52页第二十三页,共52页。涂布器涂布器接种接种(jizhng)环环接种接种(jizhng)针针第24页/共52页第二十四页,共52页。第25页/共52页第二十五页,共52页。四四.大肠杆菌的纯化大肠杆菌的纯化(chn hu)(chn hu)培培养:养:制备制备(zhbi)(zhbi)牛肉膏蛋白胨固体培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算计算(j(j sun)s
10、un)2.称量3.3.溶化溶化牛肉膏黏稠,用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮,要快、加盖4.4.调调pHpH、分装、封口、分装、封口5.5.灭菌灭菌6.6.倒平板倒平板 7.7.无菌检查:无菌检查:37培养培养24-48h24-48h培养基、培养皿培养基、培养皿防琼脂糊底第26页/共52页第二十六页,共52页。第27页/共52页第二十七页,共52页。倒平板倒平板(pngbn)(pngbn)约约50防止皿盖上的水珠落入培养基,造成防止皿盖上的水珠落入培养基,造成(zo chn)污染污染灼烧灭菌(mi jn),防止瓶口的微生物污染培养基第28页/共52页第二十八页,共52页。答:可以用手触摸盛有培养
11、基的锥形瓶,感觉锥形瓶答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降的温度下降(xijing)(xijing)到刚刚不烫手时,就可以进行到刚刚不烫手时,就可以进行倒平板了。倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过为什么需要使锥形瓶的瓶口通过(tnggu)(tnggu)火焰?火焰?答:通过灼烧灭菌,防止瓶口答:通过灼烧灭菌,防止瓶口(pn ku)(pn ku)的微的微生物污染培养基。生物污染培养基。问题讨论1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养基灭菌后,需要冷却到50 50 左右时,才左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?温
12、度?第29页/共52页第二十九页,共52页。3.3.平板冷凝平板冷凝(lngnng)(lngnng)后,为什么要将平板倒后,为什么要将平板倒置?置?4.4.在倒平板的过程中,如果不小心在倒平板的过程中,如果不小心(xio xn)(xio xn)将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?板还能用来培养微生物吗?为什么?答:平板冷凝后,皿盖上会凝结答:平板冷凝后,皿盖上会凝结(nngji)(nngji)水珠,水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好
13、地挥发,又置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。第30页/共52页第三十页,共52页。b.纯化(chn hu)大肠杆菌接种(jizhng)方法有:平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种(jizhng)技术:第31页/共52页第三十一页,共52页。接种方法有:平板划线(hu xin)法和稀释涂布平板法 一、平板划线法:通过接种环在琼脂固
14、体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后,可以(ky)分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落.第32页/共52页第三十二页,共52页。将接种(jizhng)环放在火焰上灼烧,直到接种(jizhng)环_在在_旁冷旁冷却接种却接种(jizhng)(jizhng)环,环,并打开棉塞并打开棉塞 将试管(shgun)口通过火焰.将已_的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内,划_条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养基。.将试管通过火焰,并塞上棉塞 火焰冷却三至五灼烧接种环,待其冷却后,灼烧接
15、种环,待其冷却后,从第一区域划线的从第一区域划线的_开始开始往第二区域内划线。重复以上操往第二区域内划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。作,在三、四、五区域内划线。注意注意不要将最后一区的划线与第不要将最后一区的划线与第一区相连一区相连。末端烧红将平板_放入培养箱中培养。倒置第33页/共52页第三十三页,共52页。二二.大肠杆菌的纯化大肠杆菌的纯化(chn hu)(chn hu)培养:培养:纯化纯化(chn hu)(chn hu)大肠杆菌:大肠杆菌:平板平板(pngbn)(pngbn)划线法:划线法:菌种菌种划划3 3个平板个平板1 1个不划线个不划线1.1.接种:接种:接种环接种环防
16、止划破培养基防止划破培养基(重复实验)(重复实验)(空白对照)第34页/共52页第三十四页,共52页。1.1.接种环只蘸一次菌液接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连但要在培养基不同位置连续续(linx)(linx)划线多次划线多次.2.2.划线首尾不能相接划线首尾不能相接3.3.划线后划线后,培养皿倒置培养培养皿倒置培养划线划线(hu xin)分离法分离法注意事项注意事项:第35页/共52页第三十五页,共52页。答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答:操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线环上可能存在的微生物污染培养物;每次划线前灼烧接种环是为了
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