维生素类药物分析SYSH.pptx

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1、人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如：VA夜盲症 VB1脚气病 VD缺乏佝偻病第1页/共86页第2页/共86页 VitA、D2、D3、E、K1 等等 脂溶性水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPP中国药典收载40多个品种第3页/共86页 公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。维生素发展史第4页/共86页 1747年苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年胡萝卜素被发现。1911年波兰化学家丰克为维生素命名。维生

2、素发展史第5页/共86页 1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的 1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。维生素发展史第6页/共86页19201920年年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素发现人体可将胡萝卜转化为维生素A A。19221922年年-维维E E被发现。被发现。19331933年年-维维E E首次用于治疗。首次用于治疗。19931993年年-哈佛大学发表维生素哈佛大学发表维生素E E与心脏病关系的研究结果。与心脏病关系的研究结果。返 回第7页/共86页第一节 维生素A 维生素A包括有维生素A1（视黄

3、醇）、去氢维生素A（维生素A2）和去水维生素A（维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，第8页/共86页-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:一、结构和性质第9页/共86页环己烯共轭多烯侧链多异构体UV易被氧化结构分析第10页/共86页1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯v （1）具有UV吸收v（2）存在多种立体异构化合物v（3）易发生脱氢、脱水、聚合反应第11页/共86页v 或有金属离子存在时更易氧化2、不稳定性第12页/共86页3、与三氯化锑发生呈色反应CHCl34、溶解性不溶于水易溶于有机溶剂和植物油等第13页/共86页1、三氯化锑反应CHCl3二、

4、鉴别试验 维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中呈现不稳定的蓝色，再变为紫红色。第14页/共86页反应条件：要求无水，如存在水可能产生氯化氧锑（SbOCl）。配制所用的氯仿不能含醇（应用无醇氯仿）和光气（COCl2）。三氯化锑有腐蚀性。第15页/共86页（BP（2010）max为326nm一个吸收峰UV法（二）max为350390nm348、367、389三个吸收峰第16页/共86页 维生素A的无水乙醇-盐酸溶液在326nm波长处有单一吸收峰，将该溶液加热后再测定，在348，367，389nm处出现3个尖锐吸收峰。这是维生素A在盐酸催化下加热，发生脱水反应所致第17页/共86页方法方法 取

5、Vit A 加无水乙醇盐酸(100:1)溶液溶解，立即在300400nm波长范围内紫外扫描，应仅在326nm出有单一吸收峰。水浴加热30秒，迅速冷却，同法扫描，则应在348，367和389nm波长处有三个尖锐的吸收峰，且在波长332nm处有较低的吸收峰或拐点。第18页/共86页第19页/共86页USP(29)显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值BP(2005)杂质对照品法 显色剂 三氯化锑TLC法（三）第20页/共86页三、含量测定 1、紫外分光光度法 利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定。第21页/共86页立体异构体氧化产物及光照

6、产物合成中间体去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）均对测定有干扰，故采用三点校正法第22页/共86页 三点校正法（1）条件：杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；物质对光的吸收具有加和性。第23页/共86页（2）波长的选择：1 VitA的max（328nm）2 3 分别在1的两侧各选一点第24页/共86页测定对象VitA醋酸酯第一法等波长差法第25页/共86页等波长差法等波长差法第26页/共86页第27页/共86页第二法等吸收度法(皂化法)测定对象VitA醇第28页/共86页等吸收差法等吸收差法第29页/共86页第30页/共86页中国药典收

7、载方法中国药典收载方法第一法（维生素A醋酸酯的测定）将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸收度，计算吸收度比值（A/A328）第31页/共86页数据处理如果max在326-329nm之间，且A/A328比值未超过规定值的0.02，可直接按下式计算含量：第32页/共86页第二法（维生素A醇的测定）不能用第一法的样品采用第二法测定 方法：维生素A醇皂化提取滤过浓缩干燥维生素A酯制成异丙醇溶液，在规定波长测定吸收度 数据处理：第33页/共86页 第一法 第二法测定对象 维生素A醋酸酯 维生素A醇方法 直接取样，测定 皂化提取，测定溶剂 环己烷 异丙醇max 328 nm 325 nm测定波长 5个

8、4个换算因数 1900 1830第一法与第二法的区别第34页/共86页三氯化锑比色法（二）（二）优点简便快速max 618nm620nm标准曲线法缺点呈色不稳定（510s内）水分干扰与标准曲线温差1专属性差三氯化锑有腐蚀性第35页/共86页第二节 维生素B1的分析VitaminB1治疗脚气病、多发性神经炎和胃肠道疾病存在于米糠、麦麸和酵母中第36页/共86页UV氨基嘧啶环噻唑环氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱)第37页/共86页还原性碱性与酸成盐与生物碱非水碱量法第38页/共86页(1)(4)(3)(2)溶于水不溶于乙醚UV吸收(mmax246nm)沉淀反应碘化汞钾或硅钨酸等反应生成碱性中遇氧化

9、剂(铁氰化钾)产生有荧光的硫色素鉴别试验TLC 结构特点与鉴别硫色素反应VB1特有(一)(二)(三)硝酸铅反应氯化物反应(四)第39页/共86页生成沉淀反应分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂(碘化铋钾、碘化汞钾、苦味酸等)，硅钨酸等作用形成组成恒定的沉淀 维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与Pb(Ac)2试液形成黑色PbS 第40页/共86页荧光消失正丁醇蓝色荧光H+OH-硫色素反应Ch.P（2005）第41页/共86页 Cl-反应第42页/共86页1、非水溶液滴定法（药典用于测定原料药）v 原理：利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。（三）含量测定第4

10、3页/共86页2、UV分光光度法（药典用于测定片剂、注射剂）（1）原理：维生素B1分子中具有共轭双键结构，具有紫外吸收特征，可在其最大吸收波长下测定吸收度，根据取样量计算含量。（2）方法第44页/共86页VitaminC参与机体代谢，可帮助酶将胆固醇转化为胆酸而排泄，减低毛细管的脆性，增加机体抵抗力防治坏血病，预防冠心病，大量静脉注射用于克山病的治疗第三节 维生素C的分析第45页/共86页二烯醇强还原性弱酸性手性CUVmax243nm结构与性质溶于水，不溶于氯仿或乙醚旋光性糖类性质水解性第46页/共86页 易溶于水 水溶液呈酸性一、结构与性质1、溶解性第47页/共86页C3OH的pKa=4.1

11、7C2OH的pKa=11.572、酸性一元酸第48页/共86页二烯醇结构二酮基结构二烯醇结构3、强还原性第49页/共86页L(+)抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）4、光学活性*第50页/共86页糖类的显色反应50结构与糖类相似5、具糖的性质第51页/共86页6、UV特征第52页/共86页二、鉴别试验（一）.与氧化剂的反应第53页/共86页第54页/共86页第55页/共86页第56页/共86页强还原性2,6-二氯靛酚褪色玫瑰红红黑第57页/共86页糖类的反应（二）或盐酸50吡咯USP第58页/共86页第59页/共86页（蓝色）(糠醛)（戊糖）50(吡咯)第60页/共86页（三）杂质检查（略）

12、1、溶液的澄清度与颜色检查2、铁、铜离子的检查：原子吸收分光光度3、细菌内毒素第61页/共86页指示剂 淀粉指示液原理（1）1、碘量法（四）含量测定第62页/共86页 取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6（2）方法第63页/共86页 酸性环境 d.HCl 新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度（3）讨论 立即滴定 减免水中O2的干扰减少O2的干扰第64页/共86页+H2ONaHSO3Na2S2O5

13、CHHO2O3H CHSO NaCOH、VitC注射液测定时要加丙酮消除稳定剂焦亚硫酸钠的干扰第65页/共86页（二）2，6-二氯靛酚钠滴定法USPJP原理（1）第66页/共86页自身指示终点法（2）方法第67页/共86页快速滴定 2min内 酸性环境 HPO3-HAc 稳定VitC防止其他还原性物质干扰剩余比色测定 （定量过量）（测剩余染料）（3）讨论第68页/共86页（4）缺点 需经常标定贮存一周不稳定干扰多 氧化力较强（三）高效液相色谱法第69页/共86页 维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称。目前已知的维生素D类物质至少有十种之多，它们都是甾醇的衍生物。中国药典主要收载有维生素D2、D3

14、原料药；维生素D2胶丸和注射剂；维生素D，注射剂。USP(24)收载有片剂、胶囊、口服液等剂型。BP(2000)收载的剂型有片剂、口服液、注射液以及钙与维生素D2、D3制成的复方片剂。第四节 维生素D的分析第70页/共86页(一)结构 维生素D2为9，10-开环麦角甾5，7，10(19)，22-四烯3-醇，又名骨化醇或麦角骨化醇。维生素D3为9，10-开环胆甾-5，7，10(19)三烯-3-醇，又名胆骨化醇。两者的化学结构十分相似，其差别仅是维生素D2比维生素D3在侧链上多一个双键，C24上多一个甲基。一、结构与性质第71页/共86页VD2VD3第72页/共86页(二)性质 1、性状 维生素D

15、2、D3均为无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光或空气均易变质。2、溶解性 维生素D2在氯仿中极易溶解，在乙醇、丙酮或乙醚中易溶；维生素D3在乙醇、丙酮、氯仿或乙醚中极易溶解；二者均在植物油中略溶，在水中不溶。3、不稳定性 维生素D2、D3因含有多个烯键，所以极不稳定，遇光或空气及其他氧化剂均发生氧化而变质，使效价降低，毒性增强。本品对酸也不稳定。4、旋光性 维生素D2具有6个手性碳原子，而维生素D3有5个手性碳原子，所以二者均具有旋光性。第73页/共86页5、显色反应 本品的氯仿溶液，加醋酐与硫酸，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后变为绿色。本反应为甾类化合物的共有反应。6紫外

16、吸收特性 取本品，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每10ml中约含10ug的溶液。照分光光度法，在265nm的波长处测定吸收度，维生素D2的吸收系数为460-490；维生素D3的吸收系数为465-495。第74页/共86页(一)显色反应 1、与醋酐浓硫酸反应 取维生素D2或D3约0.5mg，加氯仿5m1溶解后，加醋酐0.3ml与硫酸0.1ml，振摇，维生素D2初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。维生素D3初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色、蓝绿色，最后变为绿色。2、与三氯化锑反应 取本品适量(约1000单位)，加1，2-二氯乙烷1m1溶解，加三氯化锑试液4ml，溶液即显橙红色，逐渐变为粉红

17、色。3、其它显色反应 维生素D与三氯化铁反应呈橙黄色，与二氯丙醇和乙酰氯试剂反应显绿色，均可用于鉴别，但专属性不强。二、鉴别试验第75页/共86页(二)比旋度鉴别 取维生素D2，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1m1中含40mg的溶液，依法测定，比旋度为+102.5。至+107.5。；维生素D3加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml中含5mg的溶液，依法测定，比旋度为十105。至+112。(二者均应于容器开启后30min内取样，并在溶液配制后30min内测定)。(三)其他鉴别方法 维生素D2、D3可用薄层色谱法、HPLC法和制备衍生物测熔点进行鉴别。此外，亦可通过其紫外、红外吸收光谱的特

18、征加以鉴别。第76页/共86页(四)维生素D2、D3的区别反应 取维生素D10mg，溶于96乙醇10ml中。取此液0.1m1，加乙醇1ml和85硫酸5ml。维生素D2显红色，在570nm波长处有最大吸收；维生素D3显黄色，在495nm波长处有最大吸收。此反应也用于D2和D3的含量测定。第77页/共86页(一)麦角甾醇的检查(二)前维生素D的光照产物三、杂质检查（略）第78页/共86页(一)维生素D测定法（二）讨论四、含量测定（略）维生 素D的 含量测 定方 法各国药典 各异。USP(24)关于维生素D的测定方法有化学法、色谱法和微生物法；BP(2000)有化学法、光谱法和色谱法；而中国药典采用正相高效液相色谱法测定。第79页/共86页Vitamin E存在于豆类、蔬菜、麦胚油中与生育有关，防治习惯性流产、不育症、牙周炎等；也用于心血管疾患的辅助治疗。第五节 维生素E的分析第80页/共86页苯二氢吡喃并醇第81页/共86页生育酚乙酰化酚羟基维生素E强还原性第82页/共86页天然品右旋体生物效价右旋体:消旋体=1.4:10合成品消旋体手性C*第83页/共86页（一）结构与性质苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键 易水解第84页/共86页1、硝酸反应7515橙红色（二）鉴别第85页/共86页感谢您的观看！第86页/共86页