LCMS及GCMS原理学习教程.pptx

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1、二.仪器的配置LC/MS(Agilent1100LC,VLMS;Shimadzu 2010 AShimadzu 2010 A)ESLD(SEDEX75;PL1000)ESLDHPLCDADMSD样品先经过色谱柱的分离后进行DAD测试，再分流两路进入ELSD和MS检测器测试。第1页/共26页.检测器的说明n二极管阵列检测器(Diode-ArrayDetector,DAD)分析整个波长范围(190nm-800nm)有吸收的组分,提供三维信息(T-A),确定最大吸收波长.其中在我们的报告提取波长为214nm的色谱图.蒸发光散射检测器(Evaporationlight-scatterDetector,

2、ELSD)是一种质量型检测器，对所有固体物质均有几乎相等的响应，与待测物的光学性质或电化学性质无关,故对于没有光学吸收特征的物质可获得检测.第2页/共26页液质联用(liquidChromatagraphy-MassSpectrometry)可提供色谱,光谱,质谱等多种信息,其中在我们的报告中打印有总离子色谱图(Totalioncurrentchromatogram,TIC),提取离子色谱图(extractionchromatogram,EIC),质谱棒状图(Massspectrum)总离子色谱图TIC-分析时间内所有扫描获得的离子流强度对时间作图所得的色谱图.提取离子色谱图EIC根据监测化合

3、物分子量提取其产生的离子流强度对时间作图所得的色谱图.质谱棒状图-不同质量的离子质荷比与其相对的离子强度所形成的谱图第3页/共26页三.色谱条件:酸性条件:0.05%-0.01%TFAinACNandH2O;gradient10%to90%;酸法1-L-P常规酸法正离子1-L-P-S短柱酸法正离子1-L-P-CNCN基柱酸法正离子碱性条件:ACN/10mMNH4HCO3inH2O;gradient10%to90%;碱法2-L-P碱法正离子2-L-N碱法负子第4页/共26页4.图谱分析分析报告的格式与解释 图1：ADC ELSD：蒸发光散射检测器检测的色谱图。图2：DAD 214nm 紫外波长为

4、214nm的色谱图.对于较纯的样品，色谱峰在1000mAu范围内表明样品浓度较适宜,若色谱峰过高，表明样品浓度较高，所检测出的杂质百分含量校高。图3：MSD TIC 总离子色谱图 图4：EIC提取离子色谱图;正离子模式（pos,positive+H，+Na）或负离子模式（neg，negative-H）。图5：质谱棒状图。积分结果表：分别表示ELSD、DAD 214nm色谱峰的面积百分比,其中MSBase项提供的数据因软件问题有所出入，该项数据不作参考。第5页/共26页第6页/共26页第7页/共26页三.图谱的特殊说明1.无机盐在ELSD上有信号,而MS,UV无信号.第8页/共26页2.样品的分

5、子量小,易挥发,ELSD出现无信号第9页/共26页3.3.不易电离的化合物，MS MS 出现无信号,需外送做EIEI；极性弱，易挥发样品,需外送做GC-MSGC-MS第10页/共26页4.4.溶剂（DMSODMSO、THFTHF、ETACETAC等）在UV214 UV214 有信号，而在MSMS、ELSDELSD上 无信号。第11页/共26页第12页/共26页四.关于分子量的解释和注意事项在画分子结构的过程中，我们发现含Cl、Br、S等有同位素且丰度较高的化合物使用CHEMDRAW 和ISISDRAW计算出的分子量有出入，后者计算出的分子量往往是错误的，所以统一规定大家都用CHEMDRAW 计

6、算分子量。以C6H6NCl为例举例说明几个概念 准确分子量（Exact mass)：是用较轻同位素35Cl计算出的分子量 平均分子量：是用同位素35Cl和37Cl自然丰度加权平均算出的分子量我们质谱棒状图最前面的线的质荷比就是准确分子量第13页/共26页用CHEMDRAW计算分子量如下第14页/共26页用ISISDRAW计算分子量如下第15页/共26页五.Easy-Access使用说明Easy-Access界面一按Submit键提交样品第16页/共26页第17页/共26页界面三输入样品相关信息后Loadsamples第18页/共26页界面四按照提示放好样品按OK确认后回到界面一查看数据编号第1

7、9页/共26页第20页/共26页PREP-HPLC一.PREP-HPLC反相体系通常为水-有机相(甲醇、乙腈);为获得良好的色谱分离效果，有时会加入后处理可除去的酸、碱、盐。二.分离纯化体系的选择应与化合物的性质相关。1.正相分离手段应作为首选纯化的办法2.在正相系统不能分离及其极性在中等或较大的化合物才适合用反相PREP-HPLC体系.3.在甲醇、乙腈、DMF、DMSO或THF中有良好的溶解性样品适合用反相PREP-HPLC体系.第21页/共26页三.送样要求:1.样品中不应含有强酸及强碱以及其它对色谱柱产生损害的物质2.样品中不应含有较大量的无机盐，防止堵塞柱子及流路。3.目标化合物含量应

8、尽可能大于20%，样品颜色深含量低的可先过柱（薄板）后再送制备。4.送样时请附上制备前的分析图谱，5.样品溶解性差、稳定性差的要对制备人员说清楚。第22页/共26页ChiralHPLC送样要求送样量：固体约为1mg、液体约为10ul。请注明所用溶剂及样品浓度。送手性分析的样品，HPLC纯度必须在90%以上。第23页/共26页GC-MS送样要求.GC-MS适合于做挥发性及热稳定的样品，送样时请注意样品的性质（无机盐不能做）。送样人员送样时应附有送样单并在分析人员提供的样品登记单上登记。均匀取样。.送样量：固体约为0.1mg、液体约为1ul。若使用特殊溶剂需注明。第24页/共26页.样品请使用离心管或样品瓶送样。若样品不稳定，请使用棕色送样瓶。.请按送样单的要求逐项正确完整填写。正确填写样品编号、分子式、分子量和化学结构；如果知道沸点请注明；若样品不稳定、样品回收需注明。请注意，一定要填写化合物的分子式，知道沸点的请注明沸点。所送样品如为液态，请务必注明有无剂，所加溶剂，样品的大致浓度；并且请避免使用与目标化合物沸点接近的溶剂；低于100沸点的化合物最好不要加溶剂，请送纯样品。样品中不得含有超过的水，以及大量的无机酸、碱。第25页/共26页感谢您的观看！第26页/共26页