生化实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定学习教案.pptx

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1、会计学1生化生化(shn hu)实验二果蔬中总糖及还实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定原糖含量的测定第一页，共21页。综合实验一：果蔬成分(chng fn)的生化分析实验一 果蔬中维生素C的定量(dngling)测定（4学时）实验二 果蔬中总糖及还原糖含量的测定（4学时）实验三 果蔬中蛋白质含量的测定（4学时）实验四 果蔬中过氧化物酶分析（12学时）第1页/共21页第二页，共21页。实验材料：冬枣柚子14组梨（2个品种(pnzhng)）58组盘菜萝卜 912组第2页/共21页第三页，共21页。实实实实 验验验验 二二二二果蔬中总糖及还原果蔬中总糖及还原果蔬中总糖及还原果蔬中总糖及还原(hun(

2、hun yun)yun)糖含量的测定糖含量的测定糖含量的测定糖含量的测定第3页/共21页第四页，共21页。一、目的一、目的 掌掌握握(zhngw)(zhngw)总总糖糖和和还还原原糖糖含含量量的的测定方法。测定方法。学习分光光度计的原理和操作方法。学习分光光度计的原理和操作方法。第4页/共21页第五页，共21页。二、原理二、原理 总总糖糖是是指指样样品品(yngpn)(yngpn)中中的的还还原原单单糖糖及及在在本本实实验验条条件件下下能能水水解解成成还还原原单单糖糖的的蔗蔗糖糖、麦麦芽芽糖糖和和可可部部分分水水解解成成葡葡萄萄糖糖的的淀粉。淀粉。第5页/共21页第六页，共21页。多糖为非还原

3、糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。蒽酮比色法是一个快速而简便(jinbin)的定糖方法。其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。第6页/共21页第七页，共21页。三、实验器材三、实验器材1 1、植物材料、植物材料2 2、吸管（、吸管（1.0mL21.0mL2、5.0mL25.0mL2、0.1mL2 0.1mL2、0.2mL2 0.2mL2、0.5mL2 0.5mL2）3 3、试管（、试管（1.5cm15cm71.5cm15cm7）4 4

4、、分光光度计、分光光度计5 5、水浴锅、电炉、水浴锅、电炉6 6、电子、电子(dinz)(dinz)分析天平分析天平7 7、容量瓶（、容量瓶（100mL1100mL1）、玻璃漏斗）、玻璃漏斗8 8、量筒、研钵、三角烧瓶、量筒、研钵、三角烧瓶第7页/共21页第八页，共21页。四、实验试剂四、实验试剂1 1、蒽蒽酮酮试试剂剂：取取2g2g蒽蒽酮酮溶溶于于1000mL1000mL体体积积分分数数为为80%80%的硫酸中，当日配制使用。的硫酸中，当日配制使用。2 2、标标准准(biozhn)(biozhn)葡葡萄萄糖糖溶溶液液（0.1mg/mL0.1mg/mL）：称称 取取 100mg100mg葡葡

5、萄萄 糖糖，溶溶 于于 蒸蒸 馏馏 水水 并并 稀稀 释释 至至1000mL1000mL（可加几滴甲苯作防腐剂）。（可加几滴甲苯作防腐剂）。3 3、6mol/L HCl6mol/L HCl溶液溶液4 4、20%20%NaOHNaOH溶溶液液：称称取取20g 20g NaOHNaOH固固体体，溶溶于于蒸馏水并稀释至蒸馏水并稀释至100mL100mL。第8页/共21页第九页，共21页。五、操作五、操作1 1、葡萄糖标准、葡萄糖标准(biozhn)(biozhn)曲线的绘制：曲线的绘制：取洁净试管取洁净试管6 6支，按下表进行操作：支，按下表进行操作：012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/mL0

6、0.10.20.30.40.5蒸馏水蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸煮沸10，冷却后室温放置，冷却后室温放置10，在，在620nm处比色处比色A620nm步骤管号第9页/共21页第十页，共21页。以 吸 光 度 为 纵 坐 标，各 标 准(biozhn)液浓度（mg/mL）为横坐标做图得标准(biozhn)曲线。第10页/共21页第十一页，共21页。2、样品中还原糖的提取和测定 称取1g果蔬，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30mL蒸馏水冲洗研钵23次，洗出液也转入三角烧瓶中。于

7、50水浴中保温约0.5h（使还原糖浸出(jn ch)），取出，冷却后定容至100mL。过滤后冰箱保存。冬枣、柚子、梨：取滤液1mL100mL 盘菜、萝卜：取滤液10mL100mL第11页/共21页第十二页，共21页。吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他条件(tiojin)与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。第12页/共21页第十三页，共21页。3、样品中总糖的提取、水解和测定 称取1g果蔬，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶(shopng)中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵23次，洗出液

8、也转入三 角 烧 瓶(shopng)中。再 向 三 角 烧 瓶(shopng)中加入6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性。然后用蒸馏水定容至100mL，过滤后冰箱保存。第13页/共21页第十四页，共21页。冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏水定容至100mL。盘菜、萝卜(lu bo)：取滤液10mL用蒸馏水定容至100mL。取总糖水解液1mL同上法进行还原糖测定。第14页/共21页第十五页，共21页。六、计算六、计算 按照下列公式按照下列公式(gngsh)(gngsh)分别计算果分别计算果蔬中还原糖和总糖的质量分数（蔬中还原糖和

9、总糖的质量分数（w w）。）。W（还原糖）100%C1V1mW（总糖）0.9100%C2V2m 乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除水解时所消耗(xioho)的水量。第15页/共21页第十六页，共21页。式中：W（还原糖）：还原糖质量(zhling)分数（%）W（总糖）：总糖质量(zhling)分数（%）C1：还原糖的质量(zhling)浓度（mg/mL）C2：水解后还原糖的质量(zhling)浓度（mg/mL）V1：样品中还原糖提取液的体积（mL）V2：样品中总糖提取液的体积（mL）m：样品质量(zhling)第16页/共21页第十七页，共21页。第17页/共21页第十八页，共21页。第18页/共21页第十九页，共21页。第19页/共21页第二十页，共21页。第20页/共21页第二十一页，共21页。