酶生物传感器剖析.pptx

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1、1 酶的基本特征酶的基本特征 酶的高效催化性酶的高效催化性 酶的催化效率通常比一般催化剂酶的催化效率通常比一般催化剂高高106-1012倍。酶之所以能高效催化，倍。酶之所以能高效催化，是通过降低反应所需的活化能实现的。是通过降低反应所需的活化能实现的。第1页/共114页2 酶的高度特异性酶的高度特异性 酶不仅具有一般催化剂加快反应酶不仅具有一般催化剂加快反应速度的作用，而且具有高度的特异性。速度的作用，而且具有高度的特异性。绝对特异性绝对特异性 相对特异性相对特异性 立体异构特异性立体异构特异性第2页/共114页3酶促反应动力学酶促反应动力学 酶促反应动力学是研究酶反应速酶促反应动力学是研究酶

2、反应速度及各种因素对酶反应速度影响的科学。度及各种因素对酶反应速度影响的科学。主要影响因素包括有：底物浓度、主要影响因素包括有：底物浓度、酶浓度、酶浓度、pHpH值、温度、抑制剂与激活剂等。值、温度、抑制剂与激活剂等。第3页/共114页4 酶动力学测定的是初速度，是指酶酶动力学测定的是初速度，是指酶在反应过程中底物初始浓度被消耗在在反应过程中底物初始浓度被消耗在5%5%以内的速度。目的是排除酶反应过程中以内的速度。目的是排除酶反应过程中出现的各种干扰因素，以便测得准确的出现的各种干扰因素，以便测得准确的酶反应速度。酶反应速度。第4页/共114页5底物浓度对酶促反应速度的影响底物浓度对酶促反应速

3、度的影响 第5页/共114页6酶浓度对酶促反应速度的影响酶浓度对酶促反应速度的影响 若底物初始浓度固定时，若底物初始浓度固定时，酶反应速度与酶浓度呈线性关系。酶反应速度与酶浓度呈线性关系。第6页/共114页7温度对酶促反应速度的影响温度对酶促反应速度的影响 每一种酶的催化反应都有适宜的温度每一种酶的催化反应都有适宜的温度范围和最适温度。范围和最适温度。第7页/共114页8pHpH对酶促反应速度的影响对酶促反应速度的影响 每一种酶都有适宜的每一种酶都有适宜的pHpH值范值范围和最适围和最适pHpH值。在一定的值。在一定的pHpH下，下，酶促反应具有最高的反应速度，酶促反应具有最高的反应速度，此此

4、pHpH称为该酶的最适称为该酶的最适pHpH。第8页/共114页9第9页/共114页10抑制剂、激活剂对酶促反应速度的影响抑制剂、激活剂对酶促反应速度的影响 凡能降低酶的活性甚至使酶完全失活凡能降低酶的活性甚至使酶完全失活的物质称为抑制剂，抑制剂的种类很多，的物质称为抑制剂，抑制剂的种类很多，包括药物、抗生素、毒物、抗代谢物以及包括药物、抗生素、毒物、抗代谢物以及酶促反应产物等。酶促反应产物等。第10页/共114页11 凡能激活酶活性的物质，均称激活剂。凡能激活酶活性的物质，均称激活剂。某些酶必须有激活剂存在，才能进行酶促反某些酶必须有激活剂存在，才能进行酶促反应。激活剂大部分为某些无机离子，

5、也有一应。激活剂大部分为某些无机离子，也有一些有机分子。些有机分子。第11页/共114页12二、酶传感器二、酶传感器 酶传感器是酶传感器是应用固定化酶作为应用固定化酶作为敏感元件敏感元件与各种信号转换器组合而成的与各种信号转换器组合而成的生物传感器生物传感器。依据信号转换器的类型，酶传感依据信号转换器的类型，酶传感器大致可分为酶电极、酶场效应管传感器大致可分为酶电极、酶场效应管传感器、酶热敏电阻传感器、酶压电晶体型、器、酶热敏电阻传感器、酶压电晶体型、光纤光学型等。光纤光学型等。第12页/共114页13 传感器的类型传感器的类型第13页/共114页144.1 4.1 酶电极传感器酶电极传感器

6、Enzyme electrode sensor 酶电极是由固定化酶与电流型酶电极是由固定化酶与电流型电极或电位型电极组合而成的生物传电极或电位型电极组合而成的生物传感器。感器。具有酶的分子识别和选择催化功具有酶的分子识别和选择催化功能，又有电化学电极响应快、操作简能，又有电化学电极响应快、操作简便的特点，能快速测定试液中某一给便的特点，能快速测定试液中某一给定化合物的浓度，且需很少量的样品。定化合物的浓度，且需很少量的样品。第14页/共114页15电流型酶电极电流型酶电极 电流型酶电极是将酶促反应产生电流型酶电极是将酶促反应产生的物质在电极上发生氧化或还原反应产的物质在电极上发生氧化或还原反应

7、产生的生的电流作为测量信号电流作为测量信号，在一定条件下，在一定条件下，利用测得的电流信号与被测物活度或浓利用测得的电流信号与被测物活度或浓度的函数关系，来测定样品中某一生物度的函数关系，来测定样品中某一生物组分的活度或浓度。组分的活度或浓度。第15页/共114页16制作生物传感器最常用的是氧化酶：制作生物传感器最常用的是氧化酶：底物底物+O2 产物产物+H2O2第16页/共114页17 基础电极可采用氧、过氧化氢电极，基础电极可采用氧、过氧化氢电极，还可采用近年开发的介体修饰的炭、铂、还可采用近年开发的介体修饰的炭、铂、钯和金等固体电极或介体修饰电极。钯和金等固体电极或介体修饰电极。第17页

8、/共114页18 氧电极氧电极：是一个通过测定电解电流来测定：是一个通过测定电解电流来测定溶液中氧含量的电解池。溶液中氧含量的电解池。工作时，在铂阴极和工作时，在铂阴极和Ag阳极之间施加阳极之间施加0.6V的电压。当的电压。当E=-0.2V时时电极开始电解，产生还电极开始电解，产生还原电流，其还原反应式原电流，其还原反应式为：为：第18页/共114页使用最多的是封闭式的使用最多的是封闭式的Clark氧电极氧电极第19页/共114页20 铂电极与铂电极与Ag电极组合在一起置于电极组合在一起置于参比溶液中，与被测溶液之间用透氧膜参比溶液中，与被测溶液之间用透氧膜隔开。被测溶液中的溶解氧通过膜扩散隔

9、开。被测溶液中的溶解氧通过膜扩散到电解质溶液薄层，再扩散到铂电极表到电解质溶液薄层，再扩散到铂电极表面进行还原产生电流。面进行还原产生电流。第20页/共114页H2O2电极电极H2O2电极基本测量电路和电压电极基本测量电路和电压-电流曲线电流曲线 第21页/共114页 两极间外加一定电压，实际测量时，外加两极间外加一定电压，实际测量时，外加电压控制在电压电压控制在电压-电流曲线的平滑部分，即电流曲线的平滑部分，即0.7-0.9V，此时输出电流就与浓度成比例。，此时输出电流就与浓度成比例。阳极反应阳极反应阴极反应阴极反应 第22页/共114页23第23页/共114页241.1.葡萄糖传感器葡萄糖

10、传感器 葡萄糖传感器是研究最早、开发最成葡萄糖传感器是研究最早、开发最成熟并已市场化的生物传感器，即血糖仪。熟并已市场化的生物传感器，即血糖仪。各种型号的血糖仪产品各种型号的血糖仪产品第24页/共114页25（1 1）早期的葡萄糖传感器）早期的葡萄糖传感器 早期的葡萄糖传感器是由葡萄糖氧早期的葡萄糖传感器是由葡萄糖氧化酶膜和电化学电极组成的。在电化学化酶膜和电化学电极组成的。在电化学电极的透气膜上固定葡萄糖氧化酶。电极的透气膜上固定葡萄糖氧化酶。第25页/共114页26当葡萄糖溶液与酶膜接触时，发生如下反当葡萄糖溶液与酶膜接触时，发生如下反应：应：第26页/共114页27故葡萄糖浓度测试方法有

11、三种：故葡萄糖浓度测试方法有三种：生成的葡萄糖酸生成的葡萄糖酸 消耗的氧消耗的氧 生成的生成的H2O2第27页/共114页28测量葡萄糖酸的葡萄糖传感器：测量葡萄糖酸的葡萄糖传感器：pH pH电极和离子敏场效应管测定葡萄电极和离子敏场效应管测定葡萄糖酸的量来计算样品中葡萄糖的含量，最糖酸的量来计算样品中葡萄糖的含量，最低检测限为低检测限为1010-3-3 mol molL L，灵敏度较低；，灵敏度较低；第28页/共114页测量氧消耗量的葡萄糖传感器：测量氧消耗量的葡萄糖传感器：29 ClarkClark氧电极用于测定酶促反应中氧的氧电极用于测定酶促反应中氧的消耗量消耗量(电流降低的量电流降低的

12、量)来计算样品中葡萄来计算样品中葡萄糖的含量，最低检测限为糖的含量，最低检测限为1010-4-4 molmolL L。第29页/共114页30 葡萄糖氧化产生葡萄糖氧化产生H2O2，H2O2通过通过选择性透气膜，在选择性透气膜，在Pt电极上氧化，葡萄电极上氧化，葡萄糖的含量与生成的电流成正比，由此可糖的含量与生成的电流成正比，由此可测出葡萄糖的浓度。测出葡萄糖的浓度。检测检测H2O2的方法的本底电流小，的方法的本底电流小，灵敏度高，其最低检出限为灵敏度高，其最低检出限为1010-8-8molmolL L。测量测量H2O2生成量的葡萄糖传感器：生成量的葡萄糖传感器：第30页/共114页31（2）

13、改进的葡萄糖传感器）改进的葡萄糖传感器 为消除环境中氧对测定的干扰，为消除环境中氧对测定的干扰，用用四硫富瓦烯、二茂铁四硫富瓦烯、二茂铁等容易在电极等容易在电极上氧化还原的介体来代替氧的电子传上氧化还原的介体来代替氧的电子传递作用。递作用。电子介体电子介体是酶氧化还原活性是酶氧化还原活性中心与电极表面之间的电子传递中介中心与电极表面之间的电子传递中介物，在电流型酶电极中起着关键性作物，在电流型酶电极中起着关键性作用。用。各种电子传递介体的使用，使得各种电子传递介体的使用，使得电流型酶传感器的响应速度、检测灵电流型酶传感器的响应速度、检测灵敏度和选择性都得到了很大的提高。敏度和选择性都得到了很大

14、的提高。第31页/共114页32 方法：方法：将葡萄糖氧化酶和电子将葡萄糖氧化酶和电子介体同时包埋于聚合物膜中，或直接介体同时包埋于聚合物膜中，或直接修饰于电极的表面构成葡萄糖酶传感修饰于电极的表面构成葡萄糖酶传感器。器。第32页/共114页33 在葡萄糖氧化酶（在葡萄糖氧化酶（）的催化下，）的催化下，葡萄糖被氧化为葡萄糖酸，再由二茂铁离葡萄糖被氧化为葡萄糖酸，再由二茂铁离子将还原型葡萄糖氧化酶（子将还原型葡萄糖氧化酶（）氧化）氧化为氧化型葡萄糖氧化酶（为氧化型葡萄糖氧化酶（），然后二），然后二茂铁在电极上氧化成二茂铁离子，通过二茂铁在电极上氧化成二茂铁离子，通过二茂铁在电极上产生的氧化电流来

15、实现葡萄茂铁在电极上产生的氧化电流来实现葡萄糖含量的检测。糖含量的检测。第33页/共114页34介体传感器的特点：介体传感器的特点：仅用较低的电压就能使介体氧化。仅用较低的电压就能使介体氧化。传感器对氧不敏感，能在缺氧和氧浓度传感器对氧不敏感，能在缺氧和氧浓度 变化的条件下使用。变化的条件下使用。二茂铁离子与还二茂铁离子与还原原GOD之间之间的电子传递的电子传递 快，电极响应迅速。快，电极响应迅速。第34页/共114页35 采用场效应晶体管和微电极做换能采用场效应晶体管和微电极做换能器，以缩小传感器的体积；器，以缩小传感器的体积；利用电子技术、改善信号放大和显示利用电子技术、改善信号放大和显示

16、方法，使其易于商品化；方法，使其易于商品化；改善采样方法，使患者使用方便或改善采样方法，使患者使用方便或更易于临床应用。更易于临床应用。最重要的改进是使用化学电子传递最重要的改进是使用化学电子传递中间介体代替作为自然电子受体的氧，使中间介体代替作为自然电子受体的氧，使酶催化反应不再受到溶解氧含量的制约。酶催化反应不再受到溶解氧含量的制约。第35页/共114页36（3）血糖仪测试片）血糖仪测试片血糖仪测试片血糖仪测试片 第36页/共114页37手表式的葡萄糖传感器手表式的葡萄糖传感器第37页/共114页第38页/共114页39 手表式无创血糖仪是近年来出现手表式无创血糖仪是近年来出现的一种无创、

17、无痛，能连续测定血糖的的一种无创、无痛，能连续测定血糖的设备。它通过电化学传感器和电渗透原设备。它通过电化学传感器和电渗透原理来检测皮下组织液中的葡萄糖浓度，理来检测皮下组织液中的葡萄糖浓度，无需针刺采血。无需针刺采血。手表式血糖仪测定的是组织间液葡手表式血糖仪测定的是组织间液葡萄糖值，因此要略滞后于指血血糖值。萄糖值，因此要略滞后于指血血糖值。第39页/共114页40(2)(2)乳酸电极乳酸电极 血液中乳酸的浓度是反映人体体血液中乳酸的浓度是反映人体体力消耗程度的重要指标。在体育运动训力消耗程度的重要指标。在体育运动训练中乳酸的检验是极为必要，国际上乳练中乳酸的检验是极为必要，国际上乳酸传感

18、器已经有成熟的商品仪器。酸传感器已经有成熟的商品仪器。第40页/共114页第41页/共114页42 还可采用介体修饰的方法制还可采用介体修饰的方法制备乳酸传感器。备乳酸传感器。在电极上滴介体在电极上滴介体四硫富四硫富瓦烯瓦烯(TTF)浆液，晾浆液，晾干后，干后，将乳酸氧化酶固定在该电极表面将乳酸氧化酶固定在该电极表面修饰层上面，即构成乳酸传感器。修饰层上面，即构成乳酸传感器。第42页/共114页43第43页/共114页44 在乳酸氧化酶的催化下，乳酸被氧化在乳酸氧化酶的催化下，乳酸被氧化为丙酮酸，再由四硫富瓦烯离子将还原型为丙酮酸，再由四硫富瓦烯离子将还原型乳酸氧化酶氧化为氧化型乳酸氧化酶，然

19、乳酸氧化酶氧化为氧化型乳酸氧化酶，然后四硫富瓦烯在电极上氧化成四硫富瓦烯后四硫富瓦烯在电极上氧化成四硫富瓦烯离子，通过四硫富瓦烯在电极上产生的氧离子，通过四硫富瓦烯在电极上产生的氧化电流来实现乳酸含量的检测。化电流来实现乳酸含量的检测。第44页/共114页45(3)(3)胆固醇电极胆固醇电极 胆固醇电极是一种用于临床测定胆固醇电极是一种用于临床测定血清胆固醇含量的电流型酶传感器。血清胆固醇含量的电流型酶传感器。血血液中胆固醇约有液中胆固醇约有2 23 3以酯型存在，以酯型存在，1 13 3以游离型存在。以游离型存在。第45页/共114页 自然界中的胆固醇主要存在于动物性食物自然界中的胆固醇主要

20、存在于动物性食物之中，植物中没有胆固醇。之中，植物中没有胆固醇。兽肉的胆固醇含量高于禽肉，肥肉高于瘦兽肉的胆固醇含量高于禽肉，肥肉高于瘦肉，贝壳类和软体类高于一般鱼类，蛋黄、肉，贝壳类和软体类高于一般鱼类，蛋黄、鱼子、动物内脏的胆固醇含量非常高。鱼子、动物内脏的胆固醇含量非常高。第46页/共114页降低胆固醇的食物：降低胆固醇的食物：含膳食纤维丰富的食物含膳食纤维丰富的食物 VC VC 与与 VEVE 饮酒可能使血中的高密度脂蛋白升高，饮酒可能使血中的高密度脂蛋白升高，加强防治高胆固醇血症的作用。葡萄酒较合适，加强防治高胆固醇血症的作用。葡萄酒较合适，但必须严格限制摄入量。但必须严格限制摄入量

21、。第47页/共114页48 胆固醇电极是一种用于临床测定胆固醇电极是一种用于临床测定血清胆固醇含量的电流型酶传感器。血清胆固醇含量的电流型酶传感器。结合型酶电极结合型酶电极第48页/共114页49 根据反应过程中消耗的氧，产生根据反应过程中消耗的氧，产生的过氧化氢，用相应的电极组成胆固醇的过氧化氢，用相应的电极组成胆固醇传感器测定电流的变化量，在一定条件传感器测定电流的变化量，在一定条件下，电流变化量与胆固醇浓度呈线性相下，电流变化量与胆固醇浓度呈线性相关。关。第49页/共114页50(4(4）肌酸和肌酸酐电极）肌酸和肌酸酐电极脱水脱水肌酸肌酸肌酸酐肌酸酐第50页/共114页 血清肌酸肝含量测

22、定是衡量肾功能的一血清肌酸肝含量测定是衡量肾功能的一个很好的基准。个很好的基准。血清肌酸酐浓度不会因食物的种类血清肌酸酐浓度不会因食物的种类而受影响，所以做为判断肾脏机能的依据而受影响，所以做为判断肾脏机能的依据较血清尿素可靠。较血清尿素可靠。血清肌酸酐浓度与肌肉的量有关，血清肌酸酐浓度与肌肉的量有关，因此肌肉多的排放的尿肌酸酐浓度会比肌因此肌肉多的排放的尿肌酸酐浓度会比肌肉少的多。肉少的多。第51页/共114页52第52页/共114页53 肌酸和肌酸酐微传感器肌酸和肌酸酐微传感器第53页/共114页54（5）磷）磷酸盐电极酸盐电极佝偻病佝偻病软骨病软骨病第54页/共114页55葡萄糖葡萄糖-

23、6-磷酸盐磷酸盐葡萄糖葡萄糖+磷酸磷酸酸性磷酸酯酶酸性磷酸酯酶葡萄糖葡萄糖+O2葡萄糖酸葡萄糖酸+H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶第55页/共114页56（6 6）淀粉电极）淀粉电极淀粉淀粉葡萄糖葡萄糖淀粉酶淀粉酶葡萄糖葡萄糖+O2葡萄糖酸葡萄糖酸+H2O2葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶第56页/共114页57（7 7）乙醇电极）乙醇电极CH3CH2OH 可用乙醇来制造醋可用乙醇来制造醋酸、饮料、香精、染料、酸、饮料、香精、染料、燃料等。燃料等。医疗上也常用体积医疗上也常用体积分数为分数为70-75%的乙醇的乙醇作消毒剂等。作消毒剂等。第57页/共114页酒后驾驶酒后驾驶饮酒驾车：指驾驶员血液中的酒

24、精含量大于或等于20 mg/100 mL小于80 mg/100 mL的驾驶行为。350 mL(约相称于1小瓶)啤酒或半两白酒(20 mL)第58页/共114页醉酒驾车：指驾驶员血液中的酒精含量大于或等于80 mg/100 mL的驾驶行为。1400 mL(约相称于3瓶500 mL)啤酒或一两半白酒(80mL)第59页/共114页C2H5OH+NAD+CH3CHO+NADH醇脱氢酶醇脱氢酶NADH+Fe(CN)64-NAD+Fe(CN)63-+H+e-第60页/共114页61（二）电位型酶电极（二）电位型酶电极 电位型酶电极是将酶促反应所引起的物电位型酶电极是将酶促反应所引起的物质量的变化转变成电

25、位信号输出，电位信号质量的变化转变成电位信号输出，电位信号大小与底物浓度的对数值呈线性关系。大小与底物浓度的对数值呈线性关系。第61页/共114页电位型酶电极所用的基础电极是对电位型酶电极所用的基础电极是对某种离子有选择性某种离子有选择性或对或对气体有选择性气体有选择性的电极的电极离子选择离子选择性电极性电极气敏电极气敏电极第62页/共114页63第63页/共114页 1773年，伊莱尔年，伊莱尔罗埃罗埃尔（尔（Hilaire Rouelle）发）发现尿素。现尿素。1828年，德国化学家年，德国化学家弗里德里希弗里德里希维勒首次使用维勒首次使用无机物质氰酸氨（由氯化无机物质氰酸氨（由氯化铵和氯

26、酸银反应制得）与铵和氯酸银反应制得）与硫酸铵人工合成了尿素。硫酸铵人工合成了尿素。弗里德里希维勒（Friedrich Wohler）尿素电极尿素电极 第64页/共114页尿素的分子模型尿素的分子模型增高：增高：急性或慢性肾小急性或慢性肾小球肾炎、肾功能衰竭、球肾炎、肾功能衰竭、尿路阻塞、尿路肿瘤、尿路阻塞、尿路肿瘤、高蛋白质饮食等。高蛋白质饮食等。减低减低：妊娠后期、蛋白：妊娠后期、蛋白质摄入不足、营养不良质摄入不足、营养不良等。等。第65页/共114页66 尿素在脲酶作用下发生水解反应尿素在脲酶作用下发生水解反应可用氨气敏电极、二氧化碳电极等作为基可用氨气敏电极、二氧化碳电极等作为基础电极测

27、定尿素的含量。础电极测定尿素的含量。第66页/共114页（2）草酸电极草酸电极草酸（乙二酸）结构式草酸（乙二酸）结构式 维生素维生素C C代谢代谢 甘氨酸代谢甘氨酸代谢 草酰乙酸水解草酰乙酸水解 异柠檬酸降解异柠檬酸降解 食物摄入：菠菜、茶叶食物摄入：菠菜、茶叶 生物体内草酸的来源：生物体内草酸的来源：第67页/共114页草酸草酸 草酸脱羧酶草酸脱羧酶2CO2 +甲酸甲酸第68页/共114页（3 3）腺苷电极）腺苷电极 参与心肌能量代谢参与心肌能量代谢 扩张血流量扩张血流量 合成合成ATPATP、腺苷酸的重、腺苷酸的重要中间体要中间体第69页/共114页腺苷腺苷腺嘌呤脱氨基酶腺嘌呤脱氨基酶肌苷

28、肌苷+NH3第70页/共114页（4 4）苯丙氨酸电极）苯丙氨酸电极 哺乳动物的必哺乳动物的必需氨基酸需氨基酸 是甜味剂阿斯是甜味剂阿斯巴甜的主要原料巴甜的主要原料第71页/共114页苯丙氨酸苯丙氨酸苯丙氨酸苯丙氨酸胺裂解酶胺裂解酶反式肉桂酸盐反式肉桂酸盐+NH3第72页/共114页734.2 酶场效应晶体管传感器酶场效应晶体管传感器(ENFET)ENFET将酶膜复合在将酶膜复合在ISFET的栅极。的栅极。测量时，酶的催化作用使待测分子反应测量时，酶的催化作用使待测分子反应生成生成ISFET能够响应的离子。能够响应的离子。第73页/共114页ISFET工作原理工作原理第74页/共114页75

29、敏感膜与溶液界面产生膜电位，该电位叠加敏感膜与溶液界面产生膜电位，该电位叠加在栅压上，引起场效应管漏电流的变化。根据能在栅压上，引起场效应管漏电流的变化。根据能斯特方程，膜电位的大小与溶液中的离子活度有斯特方程，膜电位的大小与溶液中的离子活度有关，即关，即:第75页/共114页76（一）葡萄糖（一）葡萄糖-FET 葡萄糖葡萄糖-FET是由对是由对H+敏感的敏感的ISFET和固定在其栅极上的葡萄糖氧化酶膜构成和固定在其栅极上的葡萄糖氧化酶膜构成的的。第76页/共114页77 酶催化底物反应时，生成葡萄糖酸酶催化底物反应时，生成葡萄糖酸根、根、H+和过氧化氢，导致酶膜附近和过氧化氢，导致酶膜附近p

30、H值值变化，且变化，且pH的变化量与葡萄糖含量有关。的变化量与葡萄糖含量有关。溶液中溶液中H+的浓度变化，离子敏感膜的浓度变化，离子敏感膜与溶液界面的膜电位发生变化，该电位叠与溶液界面的膜电位发生变化，该电位叠加在栅源电压上，栅源电压的改变与溶液加在栅源电压上，栅源电压的改变与溶液中中pH值的变化量成线性关系。值的变化量成线性关系。葡萄糖葡萄糖-FET工作原理：工作原理：第77页/共114页 为提高葡萄糖为提高葡萄糖-FET-FET的工作性能和测量精度，的工作性能和测量精度，可采用两个可采用两个pHpH敏感的场效应管构成差动式结敏感的场效应管构成差动式结构。构。双栅极酶双栅极酶-FET-FET

31、传感器传感器第78页/共114页79 一个一个FETFET的栅极固定葡萄糖氧化酶膜，的栅极固定葡萄糖氧化酶膜，作为工作作为工作FETFET；另一个；另一个FETFET的栅极上没有酶膜，的栅极上没有酶膜，作为参比作为参比FETFET。将。将2 2个个FETFET接到差动放大器上，接到差动放大器上，干扰因素被消除，使输出电压只对葡萄糖响干扰因素被消除，使输出电压只对葡萄糖响应，因此输出电压的变化能够反应葡萄糖含应，因此输出电压的变化能够反应葡萄糖含量的变化。量的变化。第79页/共114页80（二）尿素（二）尿素-FET 尿素尿素-FET是由是由H+-ISFET和脲和脲酶膜组成，其原理是利用酶膜组成

32、，其原理是利用pH-FET检检测脲酶水解尿素时溶液测脲酶水解尿素时溶液pH发生的变发生的变化化。第80页/共114页 第81页/共114页82 尿素传感器也可采用差动结构，尿素传感器也可采用差动结构，使使用两个用两个FET，一个是固定有尿素酶的，一个是固定有尿素酶的FET，另一个则是没有固定尿素酶的，另一个则是没有固定尿素酶的FET，作，作为参比为参比FET，利用运算放大器组成反馈电，利用运算放大器组成反馈电路。路。Ag/AgCl电极可使溶液的电位保持电极可使溶液的电位保持一定一定。第82页/共114页83第83页/共114页84 测定时由于脲酶催化尿素反应时导致测定时由于脲酶催化尿素反应时导

33、致溶液中的溶液中的pHpH发生变化，从而导致溶液发生变化，从而导致溶液-界界面上的界面电位改变，经差动放大器后，面上的界面电位改变，经差动放大器后，输出电压与待测溶液的尿素浓度有关。输出电压与待测溶液的尿素浓度有关。第84页/共114页85其他应用：其他应用：青霉素青霉素-FET-FET L-L-谷氨酸谷氨酸-FET-FET传感器传感器第85页/共114页864.3 4.3 酶热敏电阻传感器酶热敏电阻传感器 酶热敏电阻传感器是由固定化酶酶热敏电阻传感器是由固定化酶和热敏电阻组合而成。和热敏电阻组合而成。用酶热敏电阻测定待测物的含量是用酶热敏电阻测定待测物的含量是依据酶促反应产生热量的多少来进行

34、的。依据酶促反应产生热量的多少来进行的。通过温度变化推测待测物的含量。通过温度变化推测待测物的含量。第86页/共114页87酶热敏电阻的基本构成酶热敏电阻的基本构成密接型柱式反应器型第87页/共114页88酶热敏电阻的测温方式酶热敏电阻的测温方式第88页/共114页酶热敏电阻的测量系统酶热敏电阻的测量系统 第89页/共114页90酶载体的特点：酶载体的特点：机械强度高，耐压性好；机械强度高，耐压性好；固定化效率高；固定化效率高；化学及生物学稳定性高。化学及生物学稳定性高。目前，载体除多孔玻璃以外，还有多糖类目前，载体除多孔玻璃以外，还有多糖类凝胶或尼龙制的毛细管等。凝胶或尼龙制的毛细管等。第9

35、0页/共114页91优点：优点：容量小、响应快、稳定性好、使用容量小、响应快、稳定性好、使用方便、价格便宜。方便、价格便宜。第91页/共114页924.4 光纤光学型酶传感器光纤光学型酶传感器高锟高锟生于生于1933年，年，2009年获得诺贝尔物理年获得诺贝尔物理学奖学奖“光纤之父光纤之父”第92页/共114页93光纤传感器组成：光纤传感器组成：光纤光纤生物敏感膜（探头）生物敏感膜（探头）光电换能器光电换能器第93页/共114页(c)单束光纤，生物敏感膜与光纤为一体生物敏感膜生物敏感膜(a)双束光纤 (b)单束光纤，生物敏感膜在端部光纤生物传感器信号转换器的三种结构光纤生物传感器信号转换器的三

36、种结构第94页/共114页光纤光学生物传感系统光纤光学生物传感系统 第95页/共114页1.1.光纤生物传感器的特点光纤生物传感器的特点 抗干扰能力强，不受电磁场的干扰；抗干扰能力强，不受电磁场的干扰；不用参比电极，可以微型化；不用参比电极，可以微型化；实现远距离的遥测；实现远距离的遥测；响应速度快，灵敏度高。响应速度快，灵敏度高。第96页/共114页2.光纤酶传感器的工作原理光纤酶传感器的工作原理 待测物质从样品溶液中扩散到生物敏待测物质从样品溶液中扩散到生物敏感膜时，在固定化酶的催化下生成一种待感膜时，在固定化酶的催化下生成一种待检测的物质；检测的物质；当底物扩散速度与催化产物生成速度当底

37、物扩散速度与催化产物生成速度达成平衡时，即可得到一个稳定的光信号，达成平衡时，即可得到一个稳定的光信号，依据光信号的大小与底物浓度的函数关系，依据光信号的大小与底物浓度的函数关系，得到底物的浓度，一般情况下光信号大小得到底物的浓度，一般情况下光信号大小与底物浓度成正比。与底物浓度成正比。第97页/共114页3.光纤酶传感器的分类光纤酶传感器的分类 按照换能器能量转换方式的不同，按照换能器能量转换方式的不同，分为化学发光型、光吸收型、荧光猝灭型、分为化学发光型、光吸收型、荧光猝灭型、指示剂型和生物发光型。指示剂型和生物发光型。第98页/共114页（1 1）化学发光型）化学发光型 某些化学反应伴随

38、光子的释放，释某些化学反应伴随光子的释放，释放的光子即化学发光的强度与待测物的浓放的光子即化学发光的强度与待测物的浓度呈线性关系。度呈线性关系。但有些生化反应不能释放光学信号，但有些生化反应不能释放光学信号，需要引入中间物，使其转变成能进行光检需要引入中间物，使其转变成能进行光检测的信号。测的信号。第99页/共114页 鲁米诺鲁米诺（luminol）（）（3-氨基氨基-邻苯甲酰邻苯甲酰肼），又称发光氨、光敏灵。在碱性条件肼），又称发光氨、光敏灵。在碱性条件下能被许多氧化剂（例如下能被许多氧化剂（例如H2O2，ClO-等）等）氧化而发出蓝色的光，是研究最早、最多、氧化而发出蓝色的光，是研究最早、

39、最多、应用最广泛的发光试剂。应用最广泛的发光试剂。第100页/共114页谷氨酰胺谷氨酰胺 谷氨酸谷氨酸+NH3谷氨酸谷氨酸+O2+H2O 酮戊二酸酮戊二酸+H2O2+NH3鲁米诺鲁米诺+H2O2 氨基邻苯二甲酸氨基邻苯二甲酸+N2+h谷氨酰胺酶谷氨酰胺酶谷氨酸氧化酶谷氨酸氧化酶第101页/共114页鲁米诺鲁米诺+H2O2 氨基邻苯二甲酸氨基邻苯二甲酸+N2+h第102页/共114页 GOD氧化氧化葡萄糖，生成的过氧化氢启动鲁米诺电葡萄糖，生成的过氧化氢启动鲁米诺电化学发光，并通过光纤传感器检测发光信号。酶促反化学发光，并通过光纤传感器检测发光信号。酶促反应和发光反应同时发生，因此传感器响应非常

40、快。应和发光反应同时发生，因此传感器响应非常快。鲁米诺+H2O2 氨基邻苯二甲酸+N2+h第103页/共114页（2 2）光吸收型）光吸收型 如果被测物如果被测物A不具有光学活性，经不具有光学活性，经酶催化后产生具有特征光吸收的产物酶催化后产生具有特征光吸收的产物P，或是被测物或是被测物A具有特征光吸收特性而产具有特征光吸收特性而产物物P不具备这种性质，便能通过反应前后不具备这种性质，便能通过反应前后吸光值的变化来测定底物。吸光值的变化来测定底物。第104页/共114页105对硝基苯酚在对硝基苯酚在404nm波长有最波长有最大吸收大吸收峰。峰。第105页/共114页（3 3）荧光猝灭型）荧光猝

41、灭型 由于荧光物质分子与溶剂分子相互作用引由于荧光物质分子与溶剂分子相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。使荧光强度下降的物质称为使荧光强度下降的物质称为荧光猝灭荧光猝灭剂剂。第106页/共114页 麦芽糖光纤传感器：麦芽糖光纤传感器：大肠杆菌细胞膜上分离出麦芽糖结合蛋大肠杆菌细胞膜上分离出麦芽糖结合蛋白，这种蛋白被激发光激发时产生荧光，但白，这种蛋白被激发光激发时产生荧光，但与麦芽糖结合后，荧光活性猝灭。与麦芽糖结合后，荧光活性猝灭。第107页/共114页（4 4）指示剂型）指示剂型 在在pH光极含有一种荧光染料光极含有一种荧光染料1-羟基羟基-3,6

42、,8-三硫磷酸三硫磷酸(HPTS)。在。在450nm波长的光波长的光辐射下，辐射下，HPTS受激发出受激发出515nm的荧光。的荧光。HPTS的荧光强度与溶液的的荧光强度与溶液的pH有关，有关，生物反应引起微环境的生物反应引起微环境的pH改变，从而引起改变，从而引起HPTS 的荧光强度的改变，达到检测的目的。的荧光强度的改变，达到检测的目的。第108页/共114页第109页/共114页（5）生物发光型）生物发光型 是指生物体发光或生物体提取物在实是指生物体发光或生物体提取物在实验室中发光的现象。由细胞合成的化学物质，验室中发光的现象。由细胞合成的化学物质，在一种特殊酶的作用下，使化学能转化为光

43、在一种特殊酶的作用下，使化学能转化为光能。能。生物发光主要有生物发光主要有ATP依赖型和依赖型和还原型还原型黄素单核苷酸黄素单核苷酸(FMNH2)依赖型两类。依赖型两类。第110页/共114页111含有荧光素、荧光素酶，与含有荧光素、荧光素酶，与ATP及氧一起反应，氧与荧及氧一起反应，氧与荧光素结合时发生电子转移，光素结合时发生电子转移，同时发生能量的变化释放出同时发生能量的变化释放出荧光光子而发光。荧光光子而发光。萤火虫萤火虫萤火虫现象萤火虫现象ATP依赖型依赖型第111页/共114页还原型黄素单核苷酸（还原型黄素单核苷酸（FMNH2）依赖型）依赖型 细菌发光细菌发光 底物在催化循环中会形成还原型核黄底物在催化循环中会形成还原型核黄素磷酸盐和醛化合物，当遇到荧光素酶和氧素磷酸盐和醛化合物，当遇到荧光素酶和氧时，就会形成一种激发的络合物，发出时，就会形成一种激发的络合物，发出480-490nm波长的光。波长的光。第112页/共114页思考题：思考题：1.1.简述葡萄糖传感器和尿素传感器的构成及测简述葡萄糖传感器和尿素传感器的构成及测量原理量原理。（。（选取选取1种种信号转换信号转换器即可器即可）第113页/共114页114感谢您的观看！第114页/共114页