动物分子遗传学实验.ppt

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1、动物分子遗传学实验动物分子遗传学实验实验六实验六 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳一、实验原理一、实验原理琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂琼脂糖的浓度糖的浓度。DNADNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。场作用下向正极泳动。DNADNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同与分子筛效应。不同DNADNA的分子量大小及构型的分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，

2、从而不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同分出不同的区带的区带。二、实验目的二、实验目的 通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳通过此实验操作，掌握琼脂糖凝胶电泳分离分离DNADNA的的原理和技术。原理和技术。猪猪,鸡基因组鸡基因组DNADNA的的PCRPCR产物产物电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。微波炉，紫外透射检测仪等。琼脂糖，琼脂糖，1XTAE1XTAE电泳缓冲液，溴化乙锭（电泳缓冲液，溴化乙锭（EBEB），），6X6X载样载样缓冲液缓冲液 ：0.25%0.25%溴酚蓝溴酚蓝 ，0.25%0.25%二甲苯青二甲苯青

3、，40%40%蔗蔗糖水溶液糖水溶液;0.25%;0.25%溴酚蓝溴酚蓝 ，0.25%0.25%二甲苯青二甲苯青 ，30%30%甘甘油水溶液油水溶液三、实验材料、器具及药品三、实验材料、器具及药品四、实验步骤四、实验步骤(一一)制胶制胶1.1.准备好凝胶成型器，插入成型梳。准备好凝胶成型器，插入成型梳。2.2.将将1.51.5琼脂糖加至琼脂糖加至100 ml 1TAE100 ml 1TAE缓冲液中，摇匀。缓冲液中，摇匀。在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至在微波炉中加热至琼脂糖完全熔化，冷却至6060以下。以下。3.3.加入加入5ul5ul溴化乙锭（终浓度溴化乙锭（终浓度0.5ug/ml 0.

4、5ug/ml）至熔化）至熔化的琼脂糖液中混匀，但避免出现气泡。的琼脂糖液中混匀，但避免出现气泡。4.4.将冷却的将冷却的琼脂糖倒入凝胶成型器琼脂糖倒入凝胶成型器，制备凝胶。，制备凝胶。（二）电泳（二）电泳1.待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约待胶变硬，直到它呈乳白状且不透明（约2020分钟），分钟），小心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加小心垂直向上拔出梳子，将凝胶置入电泳槽中，加1TAE1TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2mm1-2mm。2.2.用移液器吸取用移液器吸取2l 2l 的的6X6X载样缓冲液于封口膜上，再载样缓冲液于封口膜上，再加入加入5l5l样

5、品，混匀后，样品，混匀后，小心加入点样孔小心加入点样孔。3.3.接通电源，调节电压至接通电源，调节电压至4-5V/cm4-5V/cm，DNADNA从负极移到正从负极移到正极。电泳时间极。电泳时间30306060分钟。分钟。4.4.电泳结束，关掉电源。电泳结束，关掉电源。1.1.将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统将电泳完毕的琼脂糖凝胶置于自动成像系统 的平台中间；的平台中间；2.2.开通紫外光，开通紫外光，可见到发出荧光的可见到发出荧光的DNADNA条带，条带，在在 电脑中观察图像；电脑中观察图像；3.3.关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像；关上紫外光电源，在电脑中编辑和保存图像；4.4.根据图像结果判定基因型。根据图像结果判定基因型。五、结果分析五、结果分析 图图1 1 猪基因组猪基因组DNA1%DNA1%琼脂凝胶电泳图琼脂凝胶电泳图 图图2 2 PCR PCR产物琼脂凝胶电泳图产物琼脂凝胶电泳图 (1(1、2 2、3 3、4 4为为PCRPCR产物，产物，M M为为DL2000Marker)DL2000Marker)Thank youThank you！