血小板聚集功能.ppt

《血小板聚集功能.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血小板聚集功能.ppt（129页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、血小板的血小板的止血作用及检测止血作用及检测王王 学学 锋锋上海交通大学医学院附属瑞金医院12直径2-4um,厚3星形，圆形，椭圆形，不规则形4图图图图19 19 19 19 人血涂片示聚集的血小板和嗜酸性粒细胞人血涂片示聚集的血小板和嗜酸性粒细胞人血涂片示聚集的血小板和嗜酸性粒细胞人血涂片示聚集的血小板和嗜酸性粒细胞56Scanning election micrograph of normal human blood cellsScanning election micrograph of normal human blood cellsScanning election microgra

2、ph of normal human blood cellsScanning election micrograph of normal human blood cells(E(E(E(E红细胞红细胞红细胞红细胞 G G G G粒细胞粒细胞粒细胞粒细胞 L L L L淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 M M M M单核细胞单核细胞单核细胞单核细胞 P P P P血小板血小板血小板血小板)7血液涂片中的血小板8The Normal In-Situ ProcessFIG 1:Normal blood vessel Intima/media withendothelialcellbasalmembr

3、anesmoothmusclecellscollagenfiberserythrocytethrombocytelumenleukocyte Hemostasis9FIG 2Injured blood vessel Exposure of collagen Adhesion of platelets mediated by vWFActivation and de-granulation of plateletsAggregation of plateletserythrocytenon-activatedthrombocytelumenendothelial cellbasal membra

4、neactivated collagen-bound thrombocytecollagen fiberssmooth muscle cellsHemostasisThe Normal In-Situ Process10FIG 3Platelet plug stabilization by fibrin lumenendothelial cellbasal membraneerythrocytesactivatedthrombocytesplug sealing and stabilization by fibrin formationThe Normal In-Situ ProcessHem

5、ostasis11一、血小板的结构一、血小板的结构12图图图图22 22 22 22 血小板电镜像血小板电镜像血小板电镜像血小板电镜像(1(1(1(1横切面横切面横切面横切面 2 2 2 2纵切面纵切面纵切面纵切面3 3 3 3膜膜膜膜 4 4 4 4糖衣糖衣糖衣糖衣 5 5 5 5线粒体线粒体线粒体线粒体 6 6 6 6血小板颗粒血小板颗粒血小板颗粒血小板颗粒 7 7 7 7小管系小管系小管系小管系 8 8 8 8糖原颗粒糖原颗粒糖原颗粒糖原颗粒)131415电镜下血小板超微结构：表面结构，骨架系统，细胞器，特殊膜系统电镜下血小板超微结构：表面结构，骨架系统，细胞器，特殊膜系统电镜下血小板超

6、微结构：表面结构，骨架系统，细胞器，特殊膜系统电镜下血小板超微结构：表面结构，骨架系统，细胞器，特殊膜系统静止相 机能相16表 面 结 构17表面结构表面结构细胞外衣糖蛋白的糖链（血小板膜受体的所在位置）细胞膜蛋白质与脂质开放管道系统的开口1819FibronectinThrombinTSP vWFCollagen FibrinogenvWF，FibronectinGPIc/IIaGPVGPIVGPIa/IIaGPIb/IXGPIIb/IIIa1.1.糖蛋白：受体特性糖蛋白：受体特性图图3.3.血小板的表面结构模式图血小板的表面结构模式图2 2ICSHICSHCD42b/42aCD41/61C

7、D36CD49b/2920d d-granule -granuleGPIb-IX receptor-complexvon Willebrand-FactorfibrinogenGPIIb-IIIa receptor-complexRelease of glycoproteins vWF fibrinogen coagulation factorsRelease of ADP serotonin calcium etcendothelial cellplateletPrimary HemostasisNormal Platelet Functioncollagen fibers21d d-gra

8、nule-granuleGlanzmann ThrombasteniaBernard-Soulier SyndromeplateletNo release from granules:Gray syndrome(no-granules)Storage Pool Disease(no d-d-granules)Secretion defects(granules are present but secretion is inhibited)Primary HemostasisCongenital Platelet Dysfunctions22Von Willebrand Disease Mech

9、anismPrimary Hemostasisd d-granule-granuleGPIb/Ix receptor-complexvon Willebrand-Jrgens Syndromeplateletcollagen fibers23重要糖蛋白缺乏所导致的疾病重要糖蛋白缺乏所导致的疾病?24生化组成生化组成磷脂酰胆碱（磷脂酰胆碱（PC）磷脂酰乙醇胺（磷脂酰乙醇胺（PE）膜磷脂膜磷脂 鞘磷脂鞘磷脂甘油磷脂甘油磷脂磷脂酰丝氨酸（磷脂酰丝氨酸（PS）磷脂酰肌醇（磷脂酰肌醇（PI）溶血卵磷脂溶血卵磷脂 胆固醇胆固醇糖脂糖脂膜脂质75%80%20%25%2%5%2.2.膜脂质膜脂质SPH25Ph

10、osphatidylcholine，PCPhosphatidylethano-lamine，PEPhosphatidylserine，PS Phosphatidylinositol，PISphingomyelin，SPH溶血磷脂溶血磷脂platelet factor 32.2.膜脂质膜脂质PF3图图4.4.血小板的表面结构模式图血小板的表面结构模式图3 326（二）血小板骨架系统和收缩蛋白（二）血小板骨架系统和收缩蛋白.微管微管 Microtubule.微丝微丝 Microfilaments.膜下细丝膜下细丝 Submembrane filaments图图5.5.血小板的骨架系统模式图血小板的

11、骨架系统模式图4 427A and B二聚体细丝微管微管微管 维持血小板形态维持血小板形态28骨架系统和收缩蛋白骨架系统和收缩蛋白微丝微丝 肌动蛋白细丝及肌球蛋白粗丝肌动蛋白细丝及肌球蛋白粗丝,参参与血小板收缩活动，伪足形成和释放与血小板收缩活动，伪足形成和释放膜下细丝膜下细丝29（三）血小板（三）血小板细胞器和内容物细胞器和内容物DDD1.-1.-颗粒（颗粒（granule granule）：）：P-selectin，PF4，-TG，TSP，Fnaaaa2.2.致密颗粒（致密颗粒（dense bodydense body，颗粒）：颗粒）：ADP，ATP3.3.溶酶体颗粒（溶酶体颗粒（颗粒）：

12、颗粒）：组织蛋白酶组织蛋白酶D、E、O等等图图6.6.血小板细胞器模式图血小板细胞器模式图5 530细胞器和内容物细胞器和内容物致密颗粒致密颗粒 颗粒颗粒溶酶体溶酶体颗粒颗粒ADP-TG酸性水解酶ATPPF4-半乳糖苷酶5-HTP-选择素-葡萄糖醛酸酶Ca2+PDGF、TSP弹性硬蛋白酶Fn胶原酶FV、XI、vWF、肝素酶FXIII、白蛋白、1-AT、2-MG、C1-INH血小板活化？血小板活化？31（四）血小板（四）血小板特殊膜系统特殊膜系统图图7.7.血小板细胞器模式图血小板细胞器模式图6 6开放管道系统：开放管道系统：(open canalicular system,OCS)交换通道交换

13、通道致密管道系统：致密管道系统：(dense canalicular system,DTS)Ca2+32FIG 4aCellular organiza-tion of a platelet,side cross-viewouter membranesurface connectedcanalicular systemactin microtubulidense(d d-)granulesalpha(-)granuleslysosomesmitochondriaFIG 4bEquatorial cross-viewPrimary HemostasisThe Platelet33图图6.6.血小板

14、结构模式图血小板结构模式图Dense tubularsystemOpen canalicular systemMicrotubules MicrofilamentsDense bodyDense body in granuleGranulesExterior coat图图8.8.血小板结构模式图血小板结构模式图7 7Plasma membrane总结：总结：34二、血小板的活化二、血小板的活化二、血小板的活化二、血小板的活化及其分子基础及其分子基础及其分子基础及其分子基础 351.1.血小板形态的改变血小板形态的改变2.2.血小板表面特殊蛋白的表达血小板表面特殊蛋白的表达(GPIIb/IIIa

15、,CD62P)(GPIIb/IIIa,CD62P)3.3.血浆血小板特异产物水平增血浆血小板特异产物水平增(PF4PF4，-TG-TG，TXA2)TXA2)(一一)血小板活化的表现血小板活化的表现361.1.血小板收缩的基础血小板收缩的基础:在活性物质的作用下发生骨架蛋白的收缩在活性物质的作用下发生骨架蛋白的收缩(二二)血小板活化的分子基础血小板活化的分子基础Resting PlateletResting PlateletActivated Activated PlateletPlatelet活化激活剂活化激活剂:throbin、collagen、TXA2、PAF、adrenaline、ADP

16、、Vasopridsin、等、等图图9.9.血小板活化示意图血小板活化示意图372.2.血小板表面物质表达基础血小板表面物质表达基础:(二二)血小板活化的分子基础血小板活化的分子基础Activated Activated Platelet PlateletGPGPb/b/a aP-selectinP-selectin图图10.10.血小板表面物质表达血小板表面物质表达383.3.血小板代谢基础血小板代谢基础（1 1）能量代谢）能量代谢(二二)血小板活化的分子基础血小板活化的分子基础葡萄糖葡萄糖glucose糖酵解糖酵解丙酮酸丙酮酸乳酸乳酸三羧酸循环三羧酸循环CO2图图11.11.血小板能量代谢

17、血小板能量代谢39（2 2）膜磷脂代谢）膜磷脂代谢Ca2+PCPEPI溶血溶血PC、PE、PIPIP2DAGAA环环氧氧化化酶酶PGG2PGH25-HPETELTA2PGI2TXA2LTB4LTC4LTD4LTE4脂脂肪肪加加氧氧酶酶PSPlatelet factor 3前列环素前列环素合成酶合成酶血栓素血栓素合成酶合成酶secretionPLCPLCPLA2图图12.12.血小板膜磷脂代谢血小板膜磷脂代谢白三烯白三烯血管内皮细胞血管内皮细胞4041花生四烯酸代谢产物花生四烯酸代谢产物TXA2收缩血管促进血小板聚集PGI2舒张血管抑制血小板聚集4243三、血小板功能三、血小板功能三、血小板功能

18、三、血小板功能 441.1.定义定义：是指是指PltPlt粘附于血管内皮下组分粘附于血管内皮下组分 或其他物质表面的能力或其他物质表面的能力(一一)粘附功能粘附功能（Platelet adhesion）45一一.粘粘附附功功能能 vWF胶原胶原 Adhesion内皮内皮细胞细胞endothelium基基底底膜膜GPa-aGPb-Resting PlateletResting Platelet图图13.13.血小板粘附模式图血小板粘附模式图黏附反应需要条件黏附反应需要条件?461.1.定义定义：是指是指PltPlt与与PltPlt之间的粘附，是形成血小之间的粘附，是形成血小板血栓的基础，也是血小

19、板进一步活化和板血栓的基础，也是血小板进一步活化和参与二期止血、促进血液凝固的保证。参与二期止血、促进血液凝固的保证。(二二)聚集功能聚集功能（Platelet aggregation）47Resting PlateletResting PlateletADPGPActivated Activated Platelet onePlatelet oneActivated Activated Platelet two Platelet twoGPb-aAggregation二二.聚聚集集功功能能 aGPb-aFibrinogenCa+图图14.14.血小板聚集模式图血小板聚集模式图48GpIbvW

20、FDense GranuleIIIaIIbIIIaIIbADPADPIIIaIIbPlatelet AggregationFibrinogenEDDD49血小板聚集功能血小板聚集功能定义三个要素GPIIb/IIIa,Fg,Ca2+诱导剂的作用高切变率的条件下,vWF与Fn也参与血小板聚集l图7（幻灯）50512.2.诱聚剂：诱聚剂：低分子物质：低分子物质：ADPADP、肾上腺素、肾上腺素、TXATXA2 2、5-HT5-HT等。等。蛋白水解酶：蛋白水解酶：aa、蛇毒等、蛇毒等 颗粒及巨分子：颗粒及巨分子：胶原、微纤维等胶原、微纤维等 凝集素：凝集素：瑞斯托霉素等瑞斯托霉素等52血小板聚集三种途

21、径ADPTXA2PGG2,PGH2,TXA2PAF53血小板聚集两两种种聚聚集集波波形形541.1.定义定义：指血小板被机械或诱导剂激活后指血小板被机械或诱导剂激活后,Plt,Plt、及溶酶体等贮存颗粒中的内容物通过及溶酶体等贮存颗粒中的内容物通过OCSOCS释释放到放到PltPlt外的过程外的过程(三三)释放反应释放反应（Platelet release reaction）55Ca+RestingResting Platelet PlateletADPActivated Activated Platelet onePlatelet onea三三.释释放放反反应应颗粒：颗粒：-TG PF4 T

22、SP致密颗粒：致密颗粒：ADPP-selectinCa2+图图15.15.血小板释放模式图血小板释放模式图 release565758四四.促促凝凝作作用用aCaaaFgActivated PlateletaaCaFIBRIN CLOTPF3PF3a-Ca2+PF3Coagulationa-a Ca2+PF3凝血活酶凝血活酶图图16.16.血小板促凝作用模式图血小板促凝作用模式图59TrombogeneseProthrombineThrombineXaIntrinsiekeExtrinsiekeFibrineFibrinogeenADPTXA25-HTGP IIb/IIIaGP IIb/III

23、aSimons ML,Decker JW.Br Heart J 1995;74:337;Katzung BG.Basic&Clinical Pharmacology,Appleton&Lange,2001Wand beschadigingEndotheelcellenCollagenvWFPGI2GP IaGP IbGP IIb/IIIa-60血小板的促凝活性血小板的促凝活性PF3的促凝活性（参与两个复合物形成）接触产物生成活性（CPFA）：胶原、ADP胶原诱导的凝血活性（CICA）：胶原颗粒中的凝血因子释放（FV、Fg、FXI）凝血酶原酶合成：FXa结合位点61五五.血血块块收收缩缩功功能能

24、图图17.17.血小板血块收缩功能模式图血小板血块收缩功能模式图62六、六、维护血管内皮细胞维护血管内皮细胞完整性完整性填充空隙填充空隙参与内皮细胞再生和修复参与内皮细胞再生和修复63总结：总结：总结：总结：血小板功能血小板功能血小板功能血小板功能1.粘附功能粘附功能 2.聚集功能聚集功能 3.释放反应释放反应 4.促凝作用促凝作用 5.血块收缩作用血块收缩作用 6.维护血管内皮细胞完整性维护血管内皮细胞完整性6465血血 小小 板板 检检 验验66血小板生存时间测定血小板生存时间测定（丙二醛法（丙二醛法,MDA,MDA法）法）67血小板寿命测血小板寿命测定还可以有其定还可以有其他方法他方法?

25、68Arachidonic acidCyclo-oxygenaseEndoperoxidases MDA Effects of AspirinInhibitionPlateletNew PlateletCyclo-oxygenaseEndoperoxidases MDA 69血小板生存时间测定缩短缩短 血小板破坏、消耗增多血小板破坏、消耗增多ITP、药物免疫性血小板减少性紫癜、输血后紫癜、脾功能亢进、SLE、DIC、TTP、HUS血栓性疾病血栓性疾病心肌梗死、DVT、糖尿病血管病变70血小板自身抗体测定血小板自身抗体测定71血小板自身抗体血小板自身抗体血小板相关免疫球蛋白血小板相关免疫球蛋白(

26、PAIg G,A,M)(PAIg G,A,M)血小板蛋白自身抗体血小板蛋白自身抗体(特异性特异性)药物相关自身抗体药物相关自身抗体同种血小板自身抗体同种血小板自身抗体72血小板相关免疫球蛋白检测血小板相关免疫球蛋白检测73PLATELET IMMUNOFLUORESCENCEpatientdonoreluaat74单克隆抗体血小板抗原固定试验单克隆抗体血小板抗原固定试验(monoclonal antibody immobilazation of platelet antigen,MAIPA)75MoAb incubation+solubilisationGM ELISA plates+labe

27、led anti Human IgGsubstrate reaction+HRP+substrate+HRP+serum Ig+MoAbSanquinserum incubationMAIPA76改良抗原捕获酶联免疫吸附试验改良抗原捕获酶联免疫吸附试验(modified antigen capture ELISA,MACE)77MACE健康人血小板+待测血清孵育后裂解加入包被不同鼠抗血小板膜加入包被不同鼠抗血小板膜糖蛋白抗体微孔中糖蛋白抗体微孔中+substrate78临床意义临床意义增高增高 见于见于ITP、同种免疫性血小板减少性紫、同种免疫性血小板减少性紫癜、药物免疫性血小板减少性紫癜、恶

28、性淋癜、药物免疫性血小板减少性紫癜、恶性淋巴瘤、巴瘤、Evan综合征、综合征、SLE、慢性活动性肝炎、慢性活动性肝炎等等 动态检测有利于疗效和预后判断动态检测有利于疗效和预后判断 79血小板黏附试验（玻株柱法）血小板黏附试验（玻株柱法）8081血小板黏附试验（玻株柱法）血小板黏附率（%）=柱前血小板数柱后血小板数100%柱前血小板数问题问题:柱前血小板数250109/L,柱后血小板数125109/L,黏附率?82血小板黏附试验临床意义临床意义增高增高高凝状态与血栓性疾病降低降低vWD、巨血小板综合征、血小板无力症、尿毒症、肝硬化、MDS、服用血小板抑制药物83血小板聚集试验血小板聚集试验84透

29、射比浊法测定原理光光 源源诱诱导导剂剂85样品光电计滤光片光源透射比浊法测定原理86878889909192散射比浊法测定原理增增增增 加加加加 散散散散 透透透透 率率率率:660nm :660nm 测测测测 定定定定 散散散散 射射射射 光光光光聚集聚集形成形成诱诱导导剂剂93散射光散射光测测定定检测器(LED)光电计样品100%0%时间散射光强度94阻抗法95阻抗法的优点直接使用全血直接使用全血其他血细胞同时存在，真正模拟体内生理环境其他血细胞同时存在，真正模拟体内生理环境保存全部血小板，避免大血小板在制备保存全部血小板，避免大血小板在制备PRPPRP时丢失时丢失对对于于脂脂血血标标本本

30、的的检检测测，可可以以克克服服光光学学法法检检测测时时因因过过于于浑浊而影响结果浑浊而影响结果全全血血电电阻阻聚聚集集仪仪与与光光学学法法相相比比，检检测测高高凝凝状状态态时时的的血血小板功能更为敏感小板功能更为敏感96血小板聚集试验临床意义临床意义增高反映血小板聚集功能增强。见于血栓前状态和血栓性疾病。降低反映血小板聚集功能减弱。见于血小板无力症、巨血小板综合征、储存池病、尿毒症、肝硬化、MDS等97血小板第血小板第3 3因子有效性测定因子有效性测定98原原理理aCaaaFgActivated PlateletaaCaFIBRIN CLOTPF3PF3a-Ca2+PF3Coagulation

31、a-a Ca2+PF3凝血活酶凝血活酶99血小板第3因子有效性测定组别患者血浆（ml）正常血浆（ml）PRPPPPPRPPPP一0.10.1二0.10.1三0.10.1四0.10.1参考值 APTT 1-APTT 25s100血小板第3因子有效性测定临床意义临床意义 降低见于先天性血小板第3因子缺乏症、血小板无力症、巨血小板综合征、肝硬化、MDS、尿毒症、DIC、AL、再生障碍性贫血以及某些药物的影响等101血块收缩试验102 血块收缩试验血块收缩试验103血小板膜糖蛋白检测血小板膜糖蛋白检测104流式细胞仪原理示意图流式细胞仪原理示意图105无需分离，快速检测，避免血小板的激活无需分离，快速

32、检测，避免血小板的激活针对单个细胞分析针对单个细胞分析最少的标本处理，避免血小板亚群的丢失最少的标本处理，避免血小板亚群的丢失测定血小板的活化状态，检查循环血小板反应性测定血小板的活化状态，检查循环血小板反应性FCM106FCM可以测定膜表面多种受体的变化可以测定膜表面多种受体的变化新单抗，新功能性抗原决定簇检测新单抗，新功能性抗原决定簇检测极高灵敏度，检出仅有极高灵敏度，检出仅有1%1%活化血小板亚群活化血小板亚群需微量体积标本（约需微量体积标本（约2l2l），适合于新生儿），适合于新生儿血小板明显减少标本，也能进行准确的分析血小板明显减少标本，也能进行准确的分析无放射性核素污染无放射性核素

33、污染107糖蛋白阳性血小板百分率GPIb(CD42b)GPIIb(CD41)GPIIIa(CD61)GPIX(CD42a)CD62P(P-Selectin)2%CD632%FIBR5%95%99%108109110111流式细胞仪检测血小板活化R2R2细胞群为单个血小板，细胞群为单个血小板，R3R3细胞群为聚集的血小板细胞群为聚集的血小板 图图1a1a为未加为未加ADPADP的血小板分布；图的血小板分布；图1b1b示示ADPADP活化后的血小板荧光强度、活化后的血小板荧光强度、FSCFSC均抬高，均抬高，R2R2细胞群明细胞群明显减少，显减少，R3R3明显增加，直观的表明血小板发生了聚集。并可

34、自动计算出图明显增加，直观的表明血小板发生了聚集。并可自动计算出图T3T3门中血小板占总血门中血小板占总血小板的百分率，即为血小板聚集率。小板的百分率，即为血小板聚集率。112临床意义临床意义血小板功能缺陷病血小板功能缺陷病 血栓前状态和血栓病血栓前状态和血栓病:CD41,CD61,CD62P,CD63 CD41,CD61,CD62P,CD63113FCM与聚集仪测定血小板聚集的敏感性比较与聚集仪测定血小板聚集的敏感性比较114血小板活化分析血小板活化分析115血小板膜磷脂酰丝氨酸和凝血因子血小板膜磷脂酰丝氨酸和凝血因子荧光素标记的荧光素标记的Annexin V(PS特异结合特异结合),Fib

35、 FV/Va FX/Xa 的单抗的单抗+PLT,FCM检检测荧光强度测荧光强度116活化血小板膜糖蛋白分子标志物活化血小板膜糖蛋白分子标志物 CD41,CD61,CD62P,CD63CD41,CD61,CD62P,CD63117血小板微粒血小板微粒活化出芽相同结构118血浆血栓烷血浆血栓烷B B2 2（TXBTXB2 2）测定）测定原理原理ELISA临床意义增高增高血栓前状态与血栓性疾病降低降低见于环氧化酶或TX合成酶缺乏症、服用抑制环氧化酶或TX合成酶的药物等。11911-11-去氢血栓烷去氢血栓烷B B2 2（TXBTXB2 2）测定）测定原理 ELISATXB2在肝脏氧化酶作用下的产物不

36、受体外血小板活化的影响120血浆-TG、PF4测定原理原理双抗体夹心法临床意义临床意义增高反映血小板被激活及其释放反应亢进。降低见于先天或获得性储存池病。121血小板功能分析仪血小板功能分析仪PFA-100PFA-100122PFA-100 血小板功能测定仪血小板功能测定仪溶液贮藏器按钮屏幕打印机圆盘传送带暗盒测试暗盒123In Vivo HaemostasisPFA-100 capillary200maperture150mepinephrine or ADPplateletvWFerythrocyteFLOWFLOW-40mbarcollagenmembranePFA-100 Test P

37、rinciplelumenfibrinogenplateletcollagenfibrilserythrocyteendothelialcellvWF124Test Cartridge before and after a testbeforeafteraperture150McupplateletaggregateFilter+epinephrineorADPflashmembrane800lbloodcapillary200McollagenPFA-100 Test Principle125PFA-100 Test PrincipleOcclusion Process126PFA-100R

38、EV.2.00S/N:0037014/07/9714:01ID#:23456.17Test Type:Collagen/EPISAMPLE A:110 SECFinal Result and Print-outClosure time in seconds indi-cating“Primary-Hemostasis-Capacity(PHC)”PFA-100 Test Principle127Method SimplicityPipette 800 l bloodThree1 1Start the testSteps3 3Insert cassette Easy2 2PFA-100 Test Advantages and Benefit128衷衷心心感感谢谢各各位位129