DNA和蛋白质的提取.ppt

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1、专题专题5 5DNADNA和蛋白质技术和蛋白质技术课题课题1 1DNADNA的粗提取和鉴定的粗提取和鉴定讨讨论论2 2：如如何何证证明明他他们们是是遗遗传传物质？物质？讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质分离出来？讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？1 1、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子不同物理或化学性质的生物大分子2 2、生物大分子、生物大分子主主要要指指蛋蛋白白质质、酶和核酸酶和核酸3 3、提取、提取DNADNA的基本思路的基本思路利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂

2、质等在物理和化学性质方面的、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取差异，提取DNADNA，去除其他成分，去除其他成分基础知识基础知识提取提取提取提取DNADNADNADNA的方法的方法的方法的方法4 4、DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和和蛋蛋白白质质等等其其他他成成分分在在不不同同浓浓度度的的NaClNaCl溶溶液液中中溶溶解解度度不不同同，利利用用这这一一特特点点，选选择择适适当当的的盐盐浓浓度度就就能能使使DNADNA充充分分溶溶解解，而使杂质沉淀，或者相反而使杂质沉淀，或者相反根根据据DNADNA在在NaClNaCl溶溶液液中中的的溶溶解解度度曲曲线线图图，思思考考在在

3、什什么么浓浓度度下下，DNADNA的的溶溶解解度度最最小小？DNADNA在在NaClNaCl溶溶液液中中的的溶溶解解度度是是如何变化的如何变化的？在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。如如何何通通过过控控制制NaClNaCl溶溶液液的的浓浓度度使使DNADNA在在盐盐溶溶液液中中溶溶解解或或析析出？出？当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在

4、盐溶液中溶解或析出6 6、DNADNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性DNADNA不不溶溶于于酒酒精精溶溶液液，但但是是细细胞胞中中的的某某些些物物质质则则可可以以溶溶于于酒酒精精。利利用用这这一一原原理理，可可以以将将DNADNA与与蛋蛋白白质质进进一一步分离步分离7 7、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋蛋白白酶酶能能水水解解蛋蛋白白质质，但是对但是对DNADNA没有影响没有影响大大多多数数蛋蛋白白质质不不能能忍忍受受606080C80C的的高高温温，而而DNADNA在在80C80C以上才会变性以上才会变性洗洗涤涤剂剂可可以以溶溶解解细细胞胞的的细细

5、胞胞膜膜，去去除除脂脂质质和和蛋蛋白白质质,但对但对DNADNA没有影响没有影响（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取实验设计实验设计（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNADNADNA的滤液的滤液的滤液的滤液讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？2、植物细胞植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂

6、质（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答答：可可能能含含有有核核蛋蛋白白、多多糖糖和和RNA等等杂质杂质为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质?（四）（四）（四）（四）DNADNADNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定的析出与鉴定的析出与鉴定操作提示操作提示1、以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。课题延伸课题延伸