《蛋白质技术》PPT课件.ppt

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1、蛋白质技术1.蛋白的分离纯化技术蛋白的分离纯化技术(略略)2.蛋白的检测技术蛋白的检测技术 (1)SDS-PAGE (2)Western blot (3)ELISA (4)蛋白芯片蛋白芯片 (5)蛋白测序蛋白测序(略略)(6)双向电泳双向电泳-新基因的获取技术新基因的获取技术 (7)蛋白质磷酸化分析蛋白质磷酸化分析 (8)EMSA-蛋白与核酸相互作用的研究蛋白与核酸相互作用的研究(功能)(9)免疫共沉淀技术免疫共沉淀技术(CoIP)-蛋白与蛋白相互作用的研究蛋白与蛋白相互作用的研究(功能功能)(1)SDS-PAGE 电泳电泳1、原理2、用途SDS-PAGE 电泳原理1.SDS(带负电带负电)和

2、还原剂破坏蛋白的高级结构和还原剂破坏蛋白的高级结构,同时同时SDS与蛋白定量结合与蛋白定量结合,消除蛋白之间的电荷消除蛋白之间的电荷差异差异,使得使得蛋白的迁移率主要依赖分子量蛋白的迁移率主要依赖分子量(分子小分子小跑得快跑得快).).2.2.不连续电泳不连续电泳:上层为浓缩胶上层为浓缩胶,可将样品压缩到同可将样品压缩到同一起跑线一起跑线,下层为分离胶下层为分离胶;可获得更高的分辨率可获得更高的分辨率.3.3.考马斯亮蓝进行染色考马斯亮蓝进行染色.SDS-PAGE 电泳用途1.蛋白分子量的测定2.蛋白浓度的测定3.蛋白的鉴定(通过1来实现)(2).Western blot名称名称检测对检测对象

3、象探探针针检测检测原理原理处处理理过过程程用途用途Southern blotDNA标记单链核酸核酸复性中碱基配对专一性琼脂糖电泳后转膜基因检测（拷贝数）Northern blotRNA标记单链核酸核酸复性中碱基配对专一性变性琼脂糖电泳后转膜基因表达的检测（表达量）Western blot蛋白抗体抗原抗体特异性结合SDS-PAGE后转膜基因表达产物蛋白的检测Western blot(3)ELISA(4)蛋白芯片蛋白芯片(6)双向电泳双向电泳 双向电泳是蛋白质组学中对蛋白质组进行研究的主要分离方法，同时能分离成百上千种蛋白质。蛋白质在第一向根据电荷的不同（等电聚焦），第二向根据分子量的不同进行分离

4、（SDS-PAGE）。分离后对蛋白质进行染色，根据实际分析情况，分别进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色。扫描后用相关软件（PDQUEST等）进行图谱分析，分析差别点等。双向电泳与质谱技术联用，还可以进一步分析差别点蛋白的特性。(7)蛋白质磷酸化分析蛋白质磷酸化分析蛋白磷酸化是一种重要的细胞信号调控方式一般在丝氨酸,苏氨酸和酪氨酸上磷酸化.蛋白激酶-磷酸化;蛋白质磷酸酯酶-去磷酸化.A.一般通过双向电泳和质谱分析.B.也可通过磷酸化抗体Western blot检测(8)EMSA凝胶阻滞试验(electrophoretic mobility shift assay)体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术.原理:非变性电泳中,核酸蛋白结合后,泳动速度变慢.DNA与与Protein 相互作用检测相互作用检测(9)免疫共沉淀技术免疫共沉淀技术(CoIP)蛋白蛋白-蛋白相互作用蛋白相互作用常验证酵母双杂交的结果常验证酵母双杂交的结果Protein-protein 相互作用的检测相互作用的检测