兽药残留分析方法概述报告.ppt

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1、兽药残留分析方法概述报告兽药残留分析方法概述报告报告人报告人报告人报告人:单吉浩单吉浩单吉浩单吉浩 报告内容报告内容 兽药残留分析方法的特点兽药残留分析方法的特点 方法建立步骤方法建立步骤 前处理方法前处理方法 发展与展望发展与展望 兽药残留分析方法的特点兽药残留分析方法的特点 1 1 1 1、待测物浓度低，浓度波动范围大、待测物浓度低，浓度波动范围大、待测物浓度低，浓度波动范围大、待测物浓度低，浓度波动范围大 多数为多数为多数为多数为ug/kg_mg/kgug/kg_mg/kgug/kg_mg/kgug/kg_mg/kg甚至更低的水平甚至更低的水平甚至更低的水平甚至更低的水平 浓度变化范围达

2、浓度变化范围达浓度变化范围达浓度变化范围达1 1 1 1：1000100010001000以上以上以上以上2、样品基质复杂，干扰物质多样品基质复杂，干扰物质多生物材料生物材料生物材料生物材料种属种属种属种属器官器官器官器官药物自身代谢药物自身代谢药物自身代谢药物自身代谢动物日粮动物日粮动物日粮动物日粮环境污染环境污染环境污染环境污染3、以各种仪器分析方法为主方法建立步骤方法建立步骤 -分析原理分析原理原理：原理：原理：原理：1 1 1 1）分离分离分离分离一般占整个过程的一般占整个过程的一般占整个过程的一般占整个过程的90%90%90%90%以上以上以上以上（1 1 1 1）1 1 1 1个提

3、取步骤个提取步骤个提取步骤个提取步骤将待测物从样品中释放进入溶液状态将待测物从样品中释放进入溶液状态将待测物从样品中释放进入溶液状态将待测物从样品中释放进入溶液状态（2 2 2 2）1-31-31-31-3个净化步骤；个净化步骤；个净化步骤；个净化步骤；除去部分干扰杂质除去部分干扰杂质除去部分干扰杂质除去部分干扰杂质（3 3 3 3）1 1 1 1个分离步骤（分辨）个分离步骤（分辨）个分离步骤（分辨）个分离步骤（分辨）仪器在线分离过程仪器在线分离过程仪器在线分离过程仪器在线分离过程2 2 2 2）检测检测检测检测紫外可见（紫外可见（紫外可见（紫外可见（UV/Vis)UV/Vis)UV/Vis)

4、UV/Vis)、红外（、红外（、红外（、红外（IRIRIRIR）、荧光（）、荧光（）、荧光（）、荧光（FluorFluorFluorFluor）、核磁共振（）、核磁共振（）、核磁共振（）、核磁共振（NMRNMRNMRNMR）、质谱（）、质谱（）、质谱（）、质谱（MSMSMSMS）等）等）等）等方法建立步骤方法建立步骤 -分析原理分析原理w采样与样品制备（样品预处理）w提取w净化w浓缩w衍生化w分辨w检测方法建立步骤方法建立步骤 UU1 1 1 1、文献检索、文献检索、文献检索、文献检索 获得某些信息或启示获得某些信息或启示获得某些信息或启示获得某些信息或启示站在巨人的肩膀上站在巨人的肩膀上站在

5、巨人的肩膀上站在巨人的肩膀上了解待测物的理化性质（极性、溶解性、酸碱性、稳定性、了解待测物的理化性质（极性、溶解性、酸碱性、稳定性、了解待测物的理化性质（极性、溶解性、酸碱性、稳定性、了解待测物的理化性质（极性、溶解性、酸碱性、稳定性、熔点或蒸汽压、波谱学性质等）熔点或蒸汽压、波谱学性质等）熔点或蒸汽压、波谱学性质等）熔点或蒸汽压、波谱学性质等）体内过程（代谢物、组织分布、排泄途径和药动学性质）体内过程（代谢物、组织分布、排泄途径和药动学性质）体内过程（代谢物、组织分布、排泄途径和药动学性质）体内过程（代谢物、组织分布、排泄途径和药动学性质）药理毒学（理残留毒性、药理毒学（理残留毒性、药理毒学

6、（理残留毒性、药理毒学（理残留毒性、MRLsMRLsMRLsMRLs、WTDWTDWTDWTD）专业期刊：专业期刊：专业期刊：专业期刊：分析化学分析化学分析化学分析化学、色谱色谱色谱色谱等国内外等国内外等国内外等国内外丛书或手册丛书或手册丛书或手册丛书或手册药典药典药典药典方法建立步骤方法建立步骤 2 2 2 2、建立测定方法、建立测定方法、建立测定方法、建立测定方法 紫外可见（紫外可见（紫外可见（紫外可见（UV/Vis)UV/Vis)UV/Vis)UV/Vis)、红外（、红外（、红外（、红外（IRIRIRIR）、荧光（）、荧光（）、荧光（）、荧光（FluorFluorFluorFluor）、

7、核磁共）、核磁共）、核磁共）、核磁共振（振（振（振（NMRNMRNMRNMR）、质谱（）、质谱（）、质谱（）、质谱（MSMSMSMS）等）等）等）等3 3 3 3、建立样品处理方法、建立样品处理方法、建立样品处理方法、建立样品处理方法 最为重要的步骤最为重要的步骤最为重要的步骤最为重要的步骤 提取、净化、浓缩、衍生化提取、净化、浓缩、衍生化提取、净化、浓缩、衍生化提取、净化、浓缩、衍生化4 4 4 4、标准曲线（定量手段）、标准曲线（定量手段）、标准曲线（定量手段）、标准曲线（定量手段）外标法外标法外标法外标法 内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标记物）内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标

8、记物）内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标记物）内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标记物）方法建立步骤方法建立步骤 w5、稳定性试验w标准溶液w样品w温度、时间、环境w6、分析方法的评价w标准添加样品进行w至少3个浓度（10MRL、1MRL、0.1MRL）w每个浓度4次重复方法建立步骤方法建立步骤 w6、分析方法的评价w（1）精密度（precision)w RSD，（变异系数CV）w重复性：批内精密度、批间精密度w重现性：不同试验条件下（实验室、人员、仪器、试剂等）独立测定值之间w-与待测物浓度有关（参见相关部门规定范围）精密度的要求：待测物浓度(mg/kg)批内 批间 100 1.5 2

9、.3 10 7 11 1 11 16 0.1 17 26 0.01 21 32 0.001 30 45 0.0001 43 64方法建立步骤方法建立步骤 w（2）准确度（accuracy)w通常采用添加回收率来表示w浓度（ug/kg)允许范围（%）w小于1 50-120w1-10 60-120w10-100 70-110w大于100 80-110方法建立步骤方法建立步骤 w6、分析方法的评价w（3）检测限与定量限w检测限:LOD（limit of detection)w一般LOD0.1MRLwLOD=B+3SDw不作定量可靠性要求（精密度、回收率等）w定量限：LOQ（limit of quan

10、titation)w一般LOD0.2MRLwLOD=B+10SDw一般CV 20%，回收率70%方法建立步骤方法建立步骤 w6、分析方法的评价、分析方法的评价w（4）线性范围w R0.9900，R2w（5）选择性w 内源性物质的干扰w 代谢物的干扰w 其他药物的干扰w（6）与参比方法的分析结果比较w（7）实验室协同研究（collaborative study)w -实际样品、添加样品w -一般3个实验室，影响方法至少8个w -考虑地域、气候、部门、行业等w7、分析方法报告w8、分析质量监控前处理方法的建立前处理方法的建立w1、概述w目的：分离-检测w基本内容：w提取、净化、浓缩、衍生化w2、样

11、品预处理w采集w制备w贮存前处理方法的建立前处理方法的建立w3、提取方法w1）样品种类w尿液、血浆、胆汁、奶、蛋、动物组织（肉、肝、肾等）w2）提取溶剂w-相似相溶原则w-一般采用乙腈、甲醇和丙酮等水溶性溶剂w-混合溶剂，增加选择性前处理方法的建立前处理方法的建立w3）提取方法w-组织捣碎法（homogenization)w-振荡法(shaking)w-索氏提取法(Soxhlet extraction)w-超声波辅助提取（SAE）w-超临界流体萃取（SFE）w-强化溶剂萃取（ASE）w-微波辅助萃取（MAE）w-消解法：酸消解、碱消解、酶消解w-其他技术：冷冻干燥、制备干混物、起泡分离前处理方

12、法的建立前处理方法的建立w4、净化方法w1）液液萃取LLEw2）固相萃取SPEw3）固相微萃取（SPME）w4）制备色谱法（HPLC、TLC）w5）凝胶渗透色谱法（GPC）w6）吹扫-捕集（P&T）w7）膜分离技术w8）浸透限制固定相（RAS）w9）基质固相分散技术（MSPD）w10）免疫亲和柱（IAC）w11）分子印迹技术（MIPs)w12)其他技术前处理方法的建立前处理方法的建立w5、浓缩与富集w-旋转蒸发浓缩w-气流吹蒸法w-浓缩器浓缩w-真空离心浓缩w浓缩过程组分最容易损失前处理方法的建立前处理方法的建立w6、衍生化w-反应速度快w-容易重复w-定量完全、转化率稳定w-产物易纯化w-产物易于分离和检测w-GC衍生化方法w-HPLC衍生化方法w-衍生化方式：w柱前、柱后、固相衍生化、光化学衍生化