氨基酸的测定.pdf

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1、主题序号 13 授课班级 173 烹饪营养 授课形式 新授 教学主题 氨基酸的测定 教学目的 掌握氨基酸常用测定的方法和原理；培养学生科学素养和严谨的态度和工作作风 教学重点 氨基酸测定方法和原理 教学难点 氨基酸测定方法和原理 更新、补充、删节内容 无 使用教具 多媒体、黑板、粉笔 课外作业 1、简 述 氨 基 酸 电 位 法 测 定 原 理。教学反思 课 堂 教 学 安 排）教学 过程 主 要 教 学 内 容 及 步 骤 （教 师 活 动、学 生 活 动 及 活 动 形 式 与 目 的 请 加 以 说 明）导入新课 ,讲授新课$(蛋白质组成单位是氨基酸，氨基酸同样由。碳、氢、氧、氮等元素组

2、成，但是蛋白质性质与氨基酸性质有些不同。一、氨基酸态氮的测定 氨基酸态氮：与测定蛋白质相比，氨基酸中的氮可以直接测定。氨基酸中的氮含量称为氨基酸态氮。（一）氨基酸分析仪法 1 原理 基于各种氨基酸的酸碱性、极性和分子大小不同，对阳离子交换树酯的吸附力也不同，在一定的 pH 和离子强度，从树酯上将这些氨基酸洗脱下来的难易也不同，因此可以控制条件，用不同 pH 和离子强度的缓冲溶液将逐个分开洗脱下来，然后显色，由分光光度计进行定量比色，测定各个氨基酸的含量。2 样品处理 用酸水解和碱水解方法 酸水解法：用盐酸水解食品中蛋白质，使它转变成氨基酸（允许测出 16 种氨基酸，其中色氨酸完全被破坏，甘氨酸

3、部分被破坏）。碱水解法：用 NaOH 水解样品，测色氨酸（二）柱前衍生高效液相色谱法（三）柱后衍生高效液相色谱法（四）双指示剂甲醛滴定法 1、原理 加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用强碱滴定。2、操作：用中性红作指示剂，先测定其它游离酸的含量 再用百里酚酞作指示剂测定氨基酸和游离酸的总含量。3、方法适用范围 浅色样品 4、计算（五）电位滴定法 1、原理 根据氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，将酸度计的玻璃电极及甘汞电极（或复合电极）插入被测液中构成电池，用碱液滴定，根据酸度计指示的 pH 值判断和控制滴定终点。2、仪器与试剂 仪器 酸度计 磁力搅拌器 烧

4、杯（250mL）微量滴定管 试剂 pH=标准缓冲溶液 20%中性甲醛溶液 L 左右的 NaOH 标准溶液 3、测定操作 样品处理 吸取样品液于 100mL 容量瓶中,加水定容。吸取定容液于 250mL烧杯中,加水 60mL，放入磁力转子，开动磁力搅拌器使转速适当。用标准缓冲液校正好酸度计，然后将电极清洗干净，再插入到上述样品液中，用NaOH标准溶液滴定至酸度计指示,记下消耗的NaOH溶液体积。氨基酸的滴定 在上述滴定至的溶液中加入的中性甲醛溶液，再用 NaOH 标准溶|，&洗干净，再插入到上述酱油液中，用 mol/L NaOH 标准溶液滴定至酸度计指示,消耗的 NaOH 溶液体积为。在上述滴定

5、至的溶液中加入的中性甲醛溶液，再用 NaOH 标准溶液滴定至,消耗的 NaOH 溶液体积为。吸取 80mL 蒸馏水于 250mL 的烧杯中，用 NaOH 标准溶液滴定至,然后加入中性甲醛溶液，再用 NaOH 标准溶液滴定至,加入甲醛后消耗的NaOH 溶液体积为。1、请问在测定过程中为什么要加入中性甲醛 2、计算该次氨基酸态氮含量测定结果。3、该检验员按同样的方法另作了 4 次测定，结果分别为%,%,%,%，请你写一份完整的检验评价报告。%解：1、加入中性甲醛是为了固定氨基酸中的氨基，使羧基显示出酸性，才能进行氨基酸测定。2、依据题意，酱油的相对密度 d420=,取样体积 V mL 酱油的质量

6、md420V 酱油稀释液在加入甲醛后滴定至所用 NaOH 标准溶液的体积 V1 空白滴定在加入甲醛后滴定至所用 NaOH 标准溶液的体积 V2 NaOH 标准溶液的浓度 CL 根据电位滴定法，计算氨基酸态氮含量 （V1-V2）C 氨基酸态氮%=100 m 20/100 （）100 20/100 3、先进行数据处理 从大到小排列测定结果数据：%，%，%,%,%|小结 可以看出%与其它各次结果偏离太远，应为测定可疑值。X2 X1%Q Xn X1%测定结果值应舍去，应用其它四次测定值计算。测定结果平均值 X（%+%+%+%）/4=%（%）标准偏差 S（%）2（%）2（%）2（%）2（41）%相对标准偏差 CrS/X 100%/%100%=3%小结 本节课学习了几种氨基酸测定原理的几种方法，尤其是自动电位滴定法。作业布置 简 述 氨 基 酸 电 位 滴 定 法 原 理。作业布置