胰岛素工艺流程说明.pdf

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1、 胰岛素工艺流程说明 Prepared on 22 November 2020 重组人胰岛素产品生产工艺流程 对从菌种库中取出的菌种进行活化及初步扩大培养 在种子罐中对菌种进行进一步的扩大培养，至菌种到对数生长期 时转入发酵罐培养 分两阶段进行控制，第一阶段主要通过控制溶氧和补加甘油使菌 体达到富集的目的，第二阶段通过补加甲醇使菌体进行高密度表 达目的产物，HPLC 检测目的产物含量 目的产物存在于发酵液上清中，此步骤主要控制目的产物收率 通过两步柱层析，分别去除发酵上清液中的色素和杂蛋白 利用紫外检测仪控制目的产物收率，主要试剂为乙醇与异丙醇 调节 PH值，使 P1 沉淀，再经离心干燥，得中

2、间体 I固体 控温进行转肽反应，主要试剂为DMSO 与 1,4-丁二醇 菌种扩培 种子罐培养 发酵罐培养 发酵液固液分P1 纯化 P1 沉淀、干燥 P2 纯化 再通过柱层析进行提纯，主要试剂为异丙醇 调节 PH值，使 P2 沉淀，再经离心干燥，得中间体II固体 通过控制湿度与温度进行脱帽反应，得到终产物胰岛素 主要试剂为丙酮，产品为半固体 经过两步柱层析对胰岛素进行提纯，试剂为Tris-HCl和异丙醇 通过超滤对提纯后的胰岛素进行浓缩，通过管道传递到下工序 通过制备色谱对胰岛素粗品进行精制，主要试剂为色谱乙腈 然后经两步结晶后通过管道过滤除菌到百级区 对胰岛素成品进行一次结晶和水洗 对水洗后的

3、胰岛素进行过滤除菌后冻干，即得胰岛素成品 P2 沉淀、干燥 脱帽 成品粗纯化 过滤冻干 成品精纯化 重组人胰岛素生产工艺流程功能间分布 工序 功能间名称 主要操作 菌种 菌种室 菌种储藏 培养基准备间 培养基配制、消毒、无菌服消毒 接种室 在超净工作台中进行无菌接种，菌种并瓶 扩培室 菌种的摇瓶培养 菌种洗衣 菌种区无菌服清洗 发酵 发酵室 种子培养、发酵培养 控制室 发酵过程控制 发酵配料室 发酵配料 固液分离 过滤室 发酵液过滤分离 洗衣洗滤布间 滤布清洗 中间体 I P1 纯化区 中间体 I柱纯化 沉淀干燥室 I 中间体 I沉淀、干燥 中间体 II P2 纯化 转肽操作、中间体 II柱纯化 沉淀干燥室 II 中间体 II沉淀、干燥 脱帽室 脱帽操作 成品粗纯化 粗纯配液室 P1、P2、粗纯化配液 粗纯化区 成品粗纯化柱纯化、超滤 清洗室 P1、P2、粗纯化区玻璃仪器及工具清洗 成品精纯化 精纯配液室 精纯化区配液 冷室 结晶产物低温静置 精纯化区 胰岛素成品精制、结晶 制备控制 制备色谱柱电脑控制 过滤冻干 过滤冻干室 成品无菌过滤、结晶水洗以及冻干