抗中性粒细胞胞浆抗体精编A的检测及临床意义.pdf

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1、 抗中性粒细胞胞浆抗体精编 A 的检测及临床意义 文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)检测及临床意义 间接荧光免疫(IIF)方法（欧盟）一、ANCA 概念及分类 抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为 ANCA 的靶抗原，蛋白酶 3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶 G(

2、CathG)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶 3(PR3)。另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶 G(CathG)，杀菌/

3、通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白 2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。抗 MPO 抗体产生的 p-ANCA 因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的 c-ANCA 类似故叫甲醛抗性的 p-ANCA。而其他非 MPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的 p-ANCA。故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定 ANCA 的靶抗原 PR3，MPO，非 MPO 三类。二、ANCA 的检测 间接荧光免疫方法是检测 ANCA 的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的

4、经典方法。IIF 是区分 c-ANCA 和 p-ANCA 的基础，有较高敏感性，可半定量，但 IIF 测定的是总ANCA，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。由于多种免疫性疾病患者存在 ANA，用 IIF 法检测 ANCA 时，会产生干扰实验结果的判断。为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。ANCA 荧光模型及表现如表二所述。表一：四联基质片分布及意义 区分 ANA 的干扰：Hep-2 细胞有典型荧光表现，Hep-2 细胞 甲醛固定 粒细胞 1：判断c-ANCA，2：区

5、分 p-ANCA 对甲醛敏感还是耐受 甲醛抗性 p-ANCA：抗 MPO抗体耐甲醛，其荧光与在乙醇固定的中性粒细胞中的 c-ANCA 类似 甲醛敏感 p-ANCA：其他非MPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现 表二：ANCA 荧光模型及表现 区分 ANA 与 ANCA：借助猴肝细胞和其中的肝血窦粒细胞。ANCA 阳性，只有肝血窦粒细胞出现荧光，。如果两者同时阳性，所有肝细胞核都有荧光。猴肝细胞 乙醇固定 粒细胞 是标准实验基质。区分两种荧光模型：c-ANCA；p-ANCA。荧光模型 荧光表现 乙醇固定粒细胞 甲醛固定粒细胞 Hep-2 细胞 猴肝细胞 ANA 阴性 c-ANCA

6、阳性 胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。阴性 肝细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞出现荧光。p-ANCA阳性 甲醛耐受p-ANCA 呈现核周胞质平滑丝状带荧光。荧光阳性的胞质主要集中在分页核周围，形成环状或不规则的块状。胞质呈现弥散的细颗粒荧光，胞质荧光清晰勾勒出核的轮廓，分页核之间荧光增强。阴性 肝脏细胞本身无荧光。仅肝血窦粒细胞出现荧光。甲醛敏感p-ANCA 呈现核周胞质平滑丝状带荧光。荧光阳性的胞质主要集中在分页核周围，形成环状或不规则的块状。阴性 阴性 肝脏细胞本身无荧光。仅肝

7、血窦粒细胞出现荧光。ANA 阳性 ANCA 阴性 细胞核阳性，荧光强度增强 阴性 细胞核呈现荧光表现，如ANA 所述 肝细胞核阳性。肝血窦粒细胞未见荧光。甲醛耐受 p-ANCA 阳性 细胞核阳性，荧光强度增强 荧光表现如 c-ANCA 阳性，乙醇，甲醛固定粒细胞所述 细胞核呈现荧光表现，如ANA 所述。肝细胞和肝血窦粒 细 胞 都 有 荧光。三、注意事项 为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题 1、检测 ANCA，一般建议同时做 IIF 初筛和确认实验，以提高 ANCA 的临床应用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。2、不能仅检测抗 PR3 和 MPO 两种特

8、异性抗体，而不检测，这样容易限制 ANCA 对疾病诊断的特异性。3、用 IIF 检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除 ANA 的干扰，容易出现假阳性。四、临床意义（一）ANCA 与原发性小血管炎 韦格纳肉芽肿(WG)，显微多动脉炎(MPA)，坏死性新月体性肾小球肾炎(NCGN)和变应性肉芽肿性血管炎(CSS)等等原发性系统性小血管炎的发病与 ANCA 密切相关，临床上已将上述疾病统称为 ANCA 相关小血管炎。ANCA,特异性 PR3 抗体和抗 MPO 抗体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学检测项目。1、抗 PR3 抗体 特异性 PR3 抗体为 WG 的标志性抗体，抗

9、PR3 抗体荧光模型以 c-ANCA 为主。但以 c-ANCA 诊断 WG 特异性为 90，而以抗 PR3 抗体的特异性可超过 95。抗 PR3 抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。甲醛敏感 p-ANCA 阳性 细胞核阳性，荧光强度增强 阴性 细胞核呈现荧光表现，如ANA 所述。肝细胞和肝血窦粒 细 胞 都 有 荧光。抗 PR3 抗体敏感度与疾病的活动性及病程有关，在疾病的早期症状不明显时，就可出现阳性。因而抗 PR3 抗体常作为 WG 的早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。2、抗 MPO 抗体 抗 MPO 抗体荧光模型以 p-ANCA 为主，主

10、要与 MPA、NCGN、CSS 相关。还可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WG，SLE，RA，药物诱导的狼疮，Felty综合症等。抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。抗 MPO 抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性 NCGN，对诊断原发性小血管炎的特异性达到 99。因而每一个不明原因的血管炎或肾小球肾炎的患者，都应该检测 ANCA。表三：ANCA 与原发性小血管炎（二）ANCA 与药物诱导性血管炎 近年来不断有药物治疗引起的 ANCA 阳性的病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴唑

11、/甲巯咪唑等。其中报道比较多的是长期使用丙基硫氧嘧啶引起的 ANCA，其特点是滴度高，抗体谱广（抗原主要是 MPO，也可同时伴有或单独出现其他靶抗原，如 PR3，LF，CathG，BPI，LYS 等）。相关疾病 荧光模型 靶抗原（）韦格纳肉芽肿(WG)C，P（少见）PR3（85），MPO（10）显微多动脉炎(MPA)C，P PR3（45），MPO（45）坏 死 性 新 月 体 性 肾 小 球 肾 炎(NCGN)C，P（少见）PR3（25），MPO（65）变应性肉芽肿性血管炎(CSS)C，P（少见）PR3（10），MPO（60）结节性多动脉炎（PAN）少见 PR3（5），MPO（15）抗肾小球基

12、底膜病（抗 GBN）P MPO 药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状好转，ANCA 可转阴。因此，长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测ANCA，及早发现药物诱导性血管炎。（三）ANCA 与其他疾病 除原发性血管炎外，其他一些疾病中也可出现 ANCA，主要为 p-ANCA，其靶抗原并非PR，MPO，而是 LF，CathG，BPI，LYS 等 1、慢性炎症性肠病(CIBD)CIBD 是一种消化系统的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎（UC），克罗恩病（CD）两种。以往的 CIBD 诊断依赖 X 线检查，内窥镜及组织学诊断，缺乏有效的试验室指标。近年来

13、研究发现 UC 病人血清中 ANCA 阳性率为 60-80，而 CD 患者的阳性率为 10-20，多为 p-ANCA，相关靶抗原有 BPI 等。滴度与疾病的活动度和病程无关。因为 p-ANCA 在 UC 阳性率高，CD 阳性率低，故可作为两者的鉴别诊断及 UC 早期诊断指标。2、结缔组织病 在结缔组织病中，ANCA 阳性主要见于 SLE 和 RA，其他结缔组织病中少见。但文献报道在 SLE 和 RA 阳性率差异特别大（16-69），这可能与使用方法，抗原基质片及工作人员水平有很大关系。SLE 中 ANCA 阳性可能与慢性炎症反应有关，如动脉炎，浆膜炎和 CRP 增加等。有报道抗 MPO 抗体与 RA 的关节外损害及血管损害有关。3、自身免疫性肝病 在自身免疫性肝病中，也可检测到 p-ANCA。在原发性硬化性胆管炎(PSC)患者中，p-ANCA 阳性率高达 70-80，是该病重要的血清学指标。4、其他疾病 有文献报道，HIV,阿米巴，细菌感染以及不明原因的肺部慢性炎症及纤维化患者中有 p-ANCA 阳性。