产超广谱β 内酰胺酶细菌 细菌β内酰胺酶表型纸片检查法的进展.docx

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1、产超广谱 内酰胺酶细菌 细菌内酰胺酶表型纸片检查法的进展 关键词 内酰胺酶 表型 纸片法 doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.15.170 细菌内酰胺酶,尤其是革兰阴性菌产生的广谱酶(ESBLs)AmpC(C类酶)。金属酶(B类酶)和D类酶(主要有OXA酶)引起的耐药性,尤其是B和D类酶均可使碳青酶烯类抗生素失效,使细菌耐药问题更加严峻。 ESBLs表型纸片检查的最佳方案 ESBLs筛查试验:同时用头孢他啶(抑菌环22mm)和头孢泊肟(抑菌环17mm),或同时用头孢他啶和头孢三嗪(抑菌环25mm)。 据探讨如单用头孢他啶,会遗漏TEM-20、25,SHV-3、5

2、、7,CTX-M-5、14、15;单用头孢噻肟会遗漏TEM-7、10、11、12、26,SHV-5、6、7;单用氨曲南(27mm),会遗漏TEM-7、20、25,SHV-3、6;单用头孢泊肟会遗漏TEM-11、12,SHV-6;单用头孢三嗪,会遗漏TEM-7、10、11、SHV-6、18;同时用头孢他啶和头孢噻肟会遗漏TEM-5、7,同时用头孢他啶和氨曲南,会遗漏TEM-20、25,SHV-3。 (ESBLs)确证试验:应用CLSI/NCCLS举荐法,同时用头孢他啶加棒酸和头孢噻肟加棒酸。如单用头孢噻肟加棒酸,会遗漏TEM-5、7、10、11、12、26、61,SHV-5、6;单用氨曲南加棒酸

3、,头孢三嗪TEM-10、12、25,SHV-6,CTX-M-15;单用头孢泊肟或头孢三嗪,会遗漏多种,同时用头孢他啶和氨曲南,会遗漏CTX-M-15;同时用头孢他啶和头孢噻肟无遗漏。 AmpC酶 AmpC酶分为染色体酶和质粒介导酶。检测AmpC酶现用方法有头孢西丁筛查法,可同时筛查ESBLs和AmpC酶。国内已有些报道,新的纸片方法有以下几种。 质粒介导的AmpC酶的简易检查法。在M-H平板上匀称涂大肠埃希菌ATCC 25922贴头孢西丁纸片于涂菌平板上37温育过夜,视察头孢西丁的抑菌环有无缺损。 质粒介导的AmpC酶的纸片法。(DDST)特异性抑制物用3-氨基苯硼酸或3-硝基苯硼酸或3-硫苯

4、硼酸。将待测菌株匀称涂于M-H平板,加头孢他啶和头孢噻肟各1片,37温育过夜,两纸片间有抑菌环增大(5mm)者为阳性。 资料表明,用头孢噻肟的抑制试验,ACT-1、MOX-2酶可为阴性。用头孢西丁的效果最佳。它几乎不受ESBLs和碳青酶烯酶的干扰,只有ACT-1酶可为阴性,因此酶对头孢西丁几乎无活性。 诱导型AmpC酶检测法:强诱导剂用亚胺培南纸片,将待检菌涂在M-H平板,将IMP纸片贴在中心,四周贴四个底物纸片,头孢西丁、头孢他啶、头孢噻肟和哌拉西林/他唑巴坦,弱诱导剂用头孢西丁纸片,底物用哌拉西林纸片温育1824小时,视察,随意接近诱导物的抑菌环减小2mm及2mm以上者为阳性。经检测,铜绿

5、假单胞菌、肠杆菌、枸橼酸杆菌、沙雷菌等总阳性率为85.5%。 碳青酶烯酶的筛查法 可水解碳青酶烯的酶有A.D类的(OXA酶)和B类金属酶。金属酶发觉有染色体酶多种。分为B1、B2、B3三组。非染色体酶有IMP酶、VIM酶、SPM、GIM酶等,此类酶可水解碳青酶烯类抗生素,故应用金属离子偶螯合剂祛除锌离子以灭活酶的活性,即抑制法。 EDTA与亚胺培南和头孢他啶的双纸片抑制法,此法的EDTA浓度和药物底物应优选。巯基丙醇与头孢他啶和亚胺培南双纸片抑制法。但此抑制剂有毒性,应用适当的浓度。MBL商品纸片,加有EDTA胺培南纸片,与不加EDTA者比照。 酶类的筛查法 D类酶以OXA酶为主,与一般A类酶最具临床意义的区分是对碳青酶烯类耐药。 用表型纸片法提示细菌孔蛋白的缺失(耐药膜)在纸片法筛查上述酶类时,应仔细视察是否同时存在细菌的孔蛋白缺,此类资料目前只适用于大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌。 参考文献 1 王金良,沈定霞,罗艳萍,周光,曹敬荣,等.内酰胺酶和肺炎克雷伯菌的纸片及表型检测.江苏临床检验杂志,2007:32-1204.