收涩中药对小鼠肝癌淋巴道转移的影响 小鼠腹水型肝癌淋巴道转移.docx

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1、收涩中药对小鼠肝癌淋巴道转移的影响 小鼠腹水型肝癌淋巴道转移 摘要：目的：视察收涩中药对小鼠肝癌淋巴道转移的影响。方法：以腹水型肝癌H22瘤株在小鼠右下肢爪垫内侧皮下注射接种，复制淋巴道转移模型，视察小鼠实体瘤的瘤重量押瘤率、肺部转移率、淋巴结转移状况等的指标改变。结果：乌梅组和山茱萸组的肺部转移结节较模型组明显削减，抑瘤率明显增加；三味收涩药的淋巴结转移显著削减。结论：收涩中药对H22，肿瘤淋巴道转移有肯定的抑制作用。 关键词：收涩中药；H22腹水型肝癌；淋巴道转移 中图分类号：R285.5；R33文献标识码：A文章编号：16737717(2007)09188403 收涩类中药在临床抗肿瘤转

2、移治疗中多有应用，但动物试验对于收涩类中医的探讨目前尚无报道。为了进一步了解收涩类中药抗肿瘤转移的疗效及作用机理，本试验依据以往对收涩类中药的抗肿瘤转移的筛选工作结果，结合临床抗肿瘤转移方剂中常用的收涩类中药选取了3味收涩药，通过其对腹水型H22肝癌小鼠淋巴道转移的抑制作用进行了视察探讨。现将结果报道如下。 1材料与方法 11材料 111瘤细胞株小鼠腹水型H22肝癌瘤株，由山东省医学科学院药物所肿瘤室供应。 112动物昆明种健康小白鼠100只，体重20g左右，雄性，一般级，由山东高校试验动物中心供应(合格证书号：SCXK鲁20030004)。 113药品参一胶囊由吉林压泰制药有限公司生产，批号

3、为20030044。椿皮、山茱萸、乌梅，由建联中药店供应。 12方法 121肝癌细胞株的制备采纳种鼠为腹腔生长H22腹水型肝癌的昆明小鼠，传代7天后消毒小鼠腹部皮肤，局部穿刺抽取腹水0.2mL，腹水原液以灭菌生理盐水2倍稀释。试验用昆明小鼠下腹部皮肤消毒，经腹腔注射稀释腹水0.2mL，传代的小鼠在7天左右即可长出腹水，传代的胜利率为100，每7天传代1次，经5次传代后的小鼠腹水用于移植接种。 122肿瘤细胞悬液的制备选取接种7天的H22腹水瘤小鼠6只，腹部皮肤消毒，运用1mL的注射器每只小鼠抽吸腹水1mL，放入无菌容器中混匀(腹水为乳白色的浓稠液体，若为黄色或红色表示存在继发感染或腹腔出血则弃

4、去不用)。DHanks液洗涤3次，镜检计数肿瘤细胞(簇新配制的0.1胎盼蓝生理盐水溶液，将肿瘤细胞悬液稀释，混匀后在血球计数板上计数存活肿瘤细胞，存活肿瘤细胞大于95)，细胞浓度调至约为4106L。 123分组与给药昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组各10只。各组小鼠分别标号，称重。其中生理盐水组为阴性比照组，参一胶囊组为阳性比照组。分别为：椿皮组、山茱萸组、乌梅组、参一胶囊组、生理盐水组。阴性比照组小鼠每天灌胃生理盐水0.2mL只；阳性比照组每只小鼠灌胃参一胶囊水溶液120mg(kgd)，药物组为人临床用药量的20倍，椿皮62.5g/(kgd)、山茱萸75g(kgd)、乌梅25g/(kgd

5、)，3组小鼠每天分别灌胃中药水煎液0.2mL只。 12 4腹水型H22肝癌淋巴道转移模型的建立抽取调整好浓度的肿瘤细胞悬液，局部消毒后，在每只试验小鼠右爪垫内侧皮下缓慢注射0.04mL肝癌细胞悬液，自造模之日起，连续给药21天。 13视察指标 131一般状况视察自接种肿瘤细胞之日起，每日视察各组小鼠的精神、饮食及活动状况。 132脾指数胸腺指数抑瘤率于接种肿瘤细胞21天后各组小鼠分别脱颈椎处死，称重，取出脾脏和胸腺分别称重，计算脾指数及胸腺指数。脾指数=脾重体重，胸腺指数=胸腺重体重。自右趾足关节处剪下，肿瘤与右足趾一起称重，作为实体瘤的瘤重量，计算抑瘤率，抑瘤率=(1给药组平均瘤重比照组平均

6、瘤重)100。 133转移状况各组小鼠处死后摘取右侧胭窝、髂动脉旁、肾门处的淋巴结称重；取出肺脏称重，用鲍氏液固定，以单盲法计数肺部正反面及肺叶间的转移肿瘤结节数，并计算肺转移率和结节抑制率，结节抑制率=(1给药组平均肺结节数比照组平均肺结节数)100。 14统计学处理 肺转移灶用Mann Whitney U Test方法进行统计检验，其他计量资料采纳SPSS统计软件包作单因素卡方检验比较各组之间的差异，当P0.05时为有意义。 2结果 21一般状况 接种瘤细胞后小鼠外观并无明显异样改变，右爪垫内侧出现肿胀，尤其是生理盐水组小鼠肿胀明显，其他用药组小鼠右爪垫肿胀不同程度的较轻。处死前23天各组

7、小鼠，尤其是生理盐水组小鼠出现明显的活动削减，进食量下降，多蜷卧拥挤，毛枯稀疏。 22脾指数胸腺指数 试验后山茱萸组小鼠脾重量较生理盐水组明显降低P0.05；乌梅组脾指数较参一胶囊组明显降低P0.05；参一胶囊组小鼠胸腺重量及胸腺指数较生理盐水组均增加明显P0.01；乌梅组小鼠胸腺重量及胸腺指数较参一胶囊组均明显下降P0.01；椿皮组和山茱萸组小鼠胸腺指数较生理盐水组有明显的增加(前者P0.05，后者P0.01)。 23抑瘤率 试验后山茱萸组小鼠体重增长缓慢与生理盐水组及参一胶囊组比较差异显著P0.01；乌梅组、参一胶囊组及山茱萸组小鼠瘤重较生理盐水组减小明显(前者P0.05，后者P0.01)

8、、小鼠体重增长较生理盐水组及参一胶囊组均增加明显P0.01；椿皮组小鼠体重增长较生理盐水组亦有明显增加P0.05；乌梅组与山茱萸组的抑瘤率较高接近甚至超过参一胶囊组。 24淋巴结转移状况 试验后山茱萸组小鼠胭窝及骼支脉旁淋巴结重量较生理盐水组及参一胶囊组均显著削减P0.05；椿皮组小鼠骼动脉旁淋巴结重量较参一胶囊组显著削减P0.05；3味收涩药的淋巴指数较在一胶囊组显著削减P0.05及P0.01。 25肺转移灶抑制率 试验后参一胶囊组和山茱萸组小鼠肺重量及肺结节数、肺转移指数、肺转移瘤生长指数较生理盐水组均明显降低P0.05及P0.01，且山茱萸组结节抑制率高于参一胶囊组；乌梅组小鼠肺转移瘤生

9、长指数较生理盐水组均明显降低P0.05；椿皮组小鼠肺重量及肺转移瘤生长指数较参一胶囊组均明显增加(前者P0.05，后者P0.01)；乌梅组小鼠肺重量较参一胶囊组均明显增加P0.01。 3讨论 近年来对肿瘤转移发病机制的探讨多有正虚、血瘀、水湿、痰毒等相识，故采纳的中药多为补益药、活血化瘀药、清热解毒药、软坚散结药、化湿利水药。通过运用中医的理法方药预防肿瘤转移的确起到了肯定的临床疗效，但仍旧不能解决肿瘤转移的问题。因此探入剖析肿瘤转移的病机，探究相应的治法，已成为预防肿瘤术后转移的关键性的理论问题。 在大量的文献报道中肿瘤的临床治疗方药中多有收涩药的应用，试验证明多种收涩药具有抗癌有效成分。收

10、涩药临床作用独特而显著，但对其理解不够全面，尤其在现有中医相识肿瘤病机的束缚下使其应用受到限制。本试验从收涩药的固摄正气订正正虚失固、固摄癌毒防侵袭转移角度探究肿瘤转移的新病机，为临床抗肿瘤转移供应新的理论依据，为临床收涩药的应用开拓新的途径。笔者以往已经对多种收涩药的抑制血管生长及抗肿瘤生进步行了一些试验探讨工作，并发觉了一些作用显著的单味收涩中药，在此基础上笔者选择了3味收涩药进行多角度的深化探讨，笔者已经前期试验证明收涩药具有肯定的抑制肿瘤血道转移的作用(另有文章待发)，因此本试验从收涩药的固摄正气订正虚失固、固摄癌毒防转移角度，选用了目前常用的腹水型H22肝癌瘤株在右足爪垫内侧皮下接种复制小鼠H22淋巴道转移至肺的模型，视察收涩类中药对H22肿瘤生长和转移等指标的影响。结果显示：乌梅组及山茱萸组小鼠瘤重较小与生理盐水组比较有显著差异；乌梅组与山茱萸组的抑瘤率较高接近甚至超过参一胶囊组。山茱萸组淋巴结重量较生理盐水组及参一胶囊组均显著削减；椿皮组髂动脉旁淋巴结重量较参一胶囊组显著削减；3味收涩药的淋巴结指数较参一胶囊组显著削减。山茱萸组肺重量及肺结节数、肺转移指数、肺转移瘤生长指数较生理盐水组均明显降低，且山茱萸组结节抑制率高于参一胶囊组；乌梅组小鼠肺转移瘤生长指数较生理盐水组均明显降低，表明收涩类中药的确对肿瘤淋巴道转移有抑制作用，但其作用机制仍有待进一步深化探讨。